血液感染来源肺炎克雷伯菌毒力与碳青霉烯类耐药表型的关系及碳青霉烯类耐药高毒力菌株的鉴定

目的:探讨本地区从血培养分离的肺炎克雷伯菌临床株的毒力与碳青霉烯类耐药表型的关系,并对碳青霉烯类耐药高毒力肺炎克雷伯菌(CR-HVKP)进行毒力表型验证。方法:收集2016—2019年血流感染患者血培养分离的192株非重复肺炎克雷伯菌,其中96株为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP),96株为碳青霉烯敏感肺炎克雷伯菌(CSKP)。采用VITEK-2全自动微生物分析仪检测菌株对药物的敏感性,聚合酶链反应检测碳青霉烯类耐药基因、毒力基因和荚膜分型,拉丝实验检测菌株的高黏表型,全基因组测序方法检测CR-HVKP菌株的基因组特征,并通过血清抗性试验和生物膜形成试验进一步验证CR-HVKP的毒力。结果:CRKP对常见抗菌药物耐药率高,CSKP则对常见抗菌药物较敏感;除米诺环素外,CRKP组和CSKP组菌株对抗菌药物的耐药率差异均有统计学意义(均P<0.05)。96株CRKP中,92株携带碳青霉烯酶基因,以bla KPC-2为主。在毒力因子方面,4株CRKP和36株CSKP拉丝试验阳性,呈现为高黏表型,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。与CRKP组比较,CSKP组Kfu、aerobictin、iutA、ybtS、rmpA、magA、allS等毒力基因检出率均增加,荚膜抗原K1和K2检出率也增加(均P<0.05)。CRKP组检出高毒力肺炎克雷伯菌(HVKP)1株(即CR-HVKP),CSKP组检出HVKP 36株,差异有统计学意义(P<0.05)。全基因组测序结果显示,CR-HVKP多位点序列分型为412,荚膜抗原为K57,携带iutA、entB、mrkD、fimH和rmpA毒力基因,生物膜形成能力和血清抵抗力强,同时携带blaSHV-145、blaTEM-1、blaCTX-M-3、fosA6、oqxA5、oqxB26和aac(3)-IId耐药基因,伴随外膜蛋白K(OmpK)35和OmpK36的异常。结论:CRKP对抗菌药物的耐药率明显高于CSKP,虽然其携带的毒力基因数和种类均少于CSKP,但也出现了碳青霉烯类耐药且高毒力的新型多位点序列分型肺炎克雷伯菌。后者可能对公共卫生造成严重威胁。

抗菌药物体外联合药物敏感性试验方法

近年来,多重耐药菌(MDR)日益流行,但相关治疗方法有限,抗菌药物相互作用相关研究成为热点。体外联合药物敏感性试验可以判断2种及以上抗菌药物是否有协同作用,为临床联合使用抗菌药物提供参考。目前,临床常用体外联合药物敏感性试验方法有时间-杀菌曲线(TKA)、棋盘稀释法(CB)、E试验和纸片法。文章就上述方法进行综述,为临床应用提供参考。

685例重症急性胰腺炎患者中血流感染病原菌谱及抗菌药物敏感性分析

目的分析重症急性胰腺炎患者中血流感染病原菌谱及抗菌药物敏感性情况,探讨其血流感染来源及抢先治疗的最佳抗菌方案。方法回顾性分析四川大学华西医院2014年至2017年685例重症急性胰腺炎患者血培养结果,按照美国临床和实验室标准化协会(CLSI) M39-A4标准判读报告药敏,同时统计分析血培养阳性患者其他标本检出菌。结果 29. 1%(199/685)患者血培养阳性,62. 8%(125/199)患者检出革兰阴性菌,25. 6%(51/199)患者检出革兰阳性菌,13. 0%(26/199)患者检出真菌,8. 0%(16/199)患者为复数菌感染,前3位检出菌分别是肺炎克雷伯菌(44株),大肠埃希菌(29株),鲍曼/醋酸钙不动杆菌复合体(27株)。199例患者其他标本检出菌302株,所有标本检出菌517株,多重耐药菌检出比例为38. 1%(197/517)。血培养检出的所有革兰阴性菌对亚胺培南的敏感率是59. 4%,联合左氧氟沙星敏感率增至70. 7%,亚胺培南联合头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦敏感率分别为67. 9%、64. 1%;哌拉西林/他唑巴坦联合左氧氟沙星、头孢吡肟敏感率分别为56. 6%、55. 6%。结论重症急性胰腺炎患者中血流感染病原菌以革兰阴性菌为主,感染源主要来自腹腔,体外药敏数据显示,亚胺培南联合左氧氟沙星优于其他抢先治疗联合方案,可覆盖70. 7%的革兰阴性菌。革兰阳性菌、真菌引起的血流感染也不容忽视。

氨曲南联合头孢他啶/阿维巴坦对产金属β-内酰胺酶肠杆菌目细菌的体外协同作用初探

目的探讨氨曲南(aztreonam,ATM)与头孢他啶/阿维巴坦(ceftazidime averbatan,CAZ/AVI)联合使用对产金属β-内酰胺酶(metallo-β-lactamases,MBLs)肠杆菌目细菌的体外协同作用。方法收集四川大学华西医院2019年11月—2020年4月临床分离的32株产MBLs且同时满足对ATM及CAZ/AVI耐药;采用PCR扩增技术进行基因型检测,采用微量肉汤稀释法测定ATM及CAZ/AVI的MIC及棋盘稀释法检测ATM联合CAZ/AVI对产MBLs的肠杆菌目细菌的协同作用。结果32株产MBLs的菌株中,产NDM-1型金属酶19株,产NDM-5型金属酶12株及产IMP型金属酶1株;ATM联合CAZ/AVI对其中26株产MBLs的菌株有体外协同作用,占比81.3%;未出现无关和拮抗作用。结论ATM联合CAZ/AVI对产NDM金属酶菌株体外有协同抗菌作用的可能性较高,因此有条件情况下,如果临床治疗需要最好做联合药敏试验以更好的指导临床用药。

血流感染碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因和毒力基因及分子流行病学研究

目的 本研究旨在了解西南地区某大型三甲综合医院血流感染碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(carbapenemresistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)患者的临床特征和CRKP的分子流行病学。方法 收集2015–2019年血流感染患者血培养分离的131株非重复CRKP,采用VITEK-2全自动微生物分析仪和质谱MALDI-TOF进行菌株鉴定,微量肉汤稀释法检测最低抑菌浓度值(minimum inhibitory concentration, MIC),PCR检测常见碳青霉烯酶耐药基因和毒力因子,多位点序列分型对菌株进行同源性分析,全基因组测序方法检测不携带碳青霉烯酶菌株的基因组特征。结果 131株CRKP除多粘菌素B(耐药率1.6%)和替加环素(耐药率8.0%)外,对常见抗菌药物均耐药。105株(80.2%)CRKP携带Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC)耐药基因,15株(11.4%)携带New Delhi Metallo-β-lactamase (NDM)基因,4株(3.1%)同时携带KPC和NDM基因,以序列(sequence typing, ST)11(74.0%)为优势序列类型,mrkD(96.2%)、fimH(98.5%)、entB(100%)等毒力基因检出率较高,检出1株高毒力CRKP。全基因组测序显示7株不产碳青霉烯酶的CRKP携带ESBL或AmpC基因,同时存在膜孔蛋白OMPK35和OMPK36的异常。结论 某大型三甲综合医院CRKP主要携带KPC基因,对多种抗菌药物耐药率高,同时携带多种毒力基因,具有高毒力特性的CRKP应引起重视。

某院临床样本中耐碳青霉烯肠杆菌目菌株的流行病学分析

目的分析某院临床样本中耐碳青霉烯肠杆菌目(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)菌株的检出率、对抗菌药物的体外敏感性和碳青霉烯酶型别,为CRE相关感染的防控和治疗提供依据。方法按照细菌学检验操作规程进行临床样本检测,对分离菌株进行菌种鉴定和体外药敏试验。对CRE菌株采用3-氨基苯硼酸联合乙二胺四乙酸碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测的碳青霉烯酶型别。结果2021年该院从157196份临床样本中分离到CRE菌株2215株,检出率为1.4%(2215/157196)。1134株CRE非重复株分离于903例患者,主要样本来源为呼吸道样本(494/1134,43.6%)、分泌物(191/1134,16.8%)和血液(173/1134,15.3%),从同一患者的二个、三个和四个部位的样本中分离出相同CRE菌株的病例分别占12.5%、4.9%和1.1%。CRE最常见菌种是肺炎克雷伯菌(883/1134,77.9%),其次是阴沟肠杆菌复合群(107/1134,9.4%)和大肠埃希菌(96/1134,8.5%)。不同菌种对多黏菌素B和替加环素的耐药率差异无统计学意义(P<0.05)。产丝氨酸碳青霉烯酶、产金属β内酰胺酶以及同时产生两种酶的菌株分别占82.6%(809/979)、17.2%(168/979)和0.2%(2/979)。结论CRE菌株主要分离于呼吸道样本、分泌物和血液。产丝氨酸碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌最为常见,对多种抗菌药物的耐药率高,应关注该类细菌相关感染的危险因素。

基于NG-Test®CARBA 5的快速检测方法在碳青霉烯耐药肠杆菌目细菌血流感染中的应用

目的比较快速检测方法(简称快速法)与传统检测方法(简称传统法)对血培养阳性瓶的病原体鉴定、药敏试验和碳青霉烯酶型检测的一致性与准确性。方法收集2022年3月–2022年5月血流感染标本中涂片报告结果为“革兰阴性杆菌”的血培养阳性标本51份。采用快速法对阳性血培养标本进行快速药敏试验(rapid antibiotic susceptibility test,RAST)和鉴定,根据RAST判读标准,利用NG-Test®CARBA 5试剂盒对亚胺培南耐药菌株进行酶型快速检测,结果采用PCR确认。同时采用传统法对血培养阳性标本纯培养后的菌落进行鉴定、VITEK 2 Compact药敏分析和酶型检测。结果细菌鉴定中,两种方法鉴定大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的一致率均为100%。药敏试验中,两种方法的符合率较高,亚胺培南符合率为100%。碳青霉烯酶型鉴定中,传统法检测出18株产丝氨酸酶与3株产金属β-内酰胺酶的肠杆菌目细菌。快速法采用试剂盒检测出18株产KPC酶、2株产NDM酶以及1株产IMP酶的血培养标本,与PCR相比,快速法检测酶型的敏感度和特异度为100%。本实验探索的快速法对血培养阳性标本进行细菌和酶型鉴定的报告时间比传统法平均节约了1.94 d。结论本研究建立的快速法可有效缩短血培养标本报告病原微生物和药敏试验结果的时间,联合报告胶体金酶型鉴定结果可为临床医生合理使用抗菌药物、精准抗多重耐药菌感染提供参考。

某三甲医院临床分离假丝酵母分布及其耐药性

目的回顾性探讨临床常见假丝酵母的分布及耐药特点,为临床真菌感染性疾病提供病原学诊断和合理使用抗真菌药物的依据。方法收集2017年5月-2018年6月四川大学华西医院临床分离的假丝酵母190株,使用显色琼脂平板和质谱仪进行菌种鉴定;采用比色微量肉汤稀释法测定抗真菌药物最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)。结果临床分离的假丝酵母中,白假丝酵母最多(110株,57.89%),其次分别是热带假丝酵母和光滑假丝酵母,分别为(27株,14.21%)和(24株,12.63%);科室分布以外科(48株,25.26%)和ICU(39株,20.53%)为主,主要分离自血液(59株,31.05%)、引流液(29株,15.26%)和腹水(25株,13.16%);体外药敏结果显示,白假丝酵母对氟康唑和伏立康唑的耐药率分别为9.9%和7.0%,暂未发现对氟康唑和伏立康唑耐药的近平滑假丝酵母。对氟康唑耐药的光滑假丝酵母有5株(5/18,27.8%),对氟康唑和伏立康唑耐药的热带假丝酵母分别有5株(5/20,25.0%)和4株(4/20,20.0%)。未发现对棘白菌素类药物耐药的菌株。结论临床分离的假丝酵母仍以白假丝酵母为主,好发于外科病区和ICU;不同假丝酵母对唑类药物的敏感性不同;棘白菌素类药物对白假丝酵母、热带假丝酵母、近平滑假丝酵母和光滑假丝酵母具有较高的抗菌活性。

181例成人社区获得性急性细菌性脑膜炎病原学、临床预后及危险因素分析

目的了解成人社区获得性急性细菌性脑膜炎患者的病原学组成、临床预后及危险因素,为临床合理诊治提供依据。方法对2010年1月至2018年1月确诊的181例社区获得性成人急性细菌性脑膜炎住院患者进行回顾性分析,比较非老年组(<65岁,n=156)及老年组(≥65岁,n=25)患者的病原学组成及临床特征;以出院时患者的情况为截点,比较两组患者的预后及危险因素。结果 181例患者中有64例患者(35.4%)检出病原菌,前三位分别为肺炎链球菌(17.9%),单核细胞增生李斯特菌(13.4%),肺炎克雷伯菌(10.5%)。统计分析显示老年组高血压患病率、低钾血症患病率、肺部感染率、耳鼻喉感染率、CSF蛋白浓度、头部CT检查的异常率、病死率均高于非老年组(P<0.05)。Logistic回归分析发现肺部感染和体温≥38.5℃是非老年组预后不良的独立危险因素,CSF压力≥200mmH2O是老年组预后不良的独立危险因素。结论引起成人社区获得性急性细菌性脑膜炎感染的病原体主要是肺炎链球菌、单核细胞增生李斯特菌、肺炎克雷伯菌。≥65岁老年患者较<65岁患者病死率更高,肺部感染是65岁以下患者、CSF压力≥200mmH2O是65岁及以上患者预后不良的独立危险因素。