左旋芳樟醇和β-石竹烯对鸡血管内皮细胞炎性损伤的影响

目的探讨左旋芳樟醇((-)-Linalool)和β-石竹烯(BCP)对鸡血管内皮细胞(chPAEC)炎性损伤的影响。方法实验分为空白对照组,脂多糖(LPS)组以及药物低、中、高剂量组,除空白对照组外其余组分别给予LPS和LPS+药物共孵育12 h之后,采用ELISA法检测(-)-Linalool和BCP对炎性因子iNOS、PGE2、COX-2和黏附因子VCAM-1、ICAM-1的影响;通过qRT-PCR法检测IL-6、TNF-α、CD14、TLR4和MyD88 mRNA的表达;利用Western-blot法来检测细胞内NF-κBp65蛋白的表达。结果 (-)-Linalool和BCP能显著降低LPS诱导chPAEC的iNOS、PGE2、COX-2、VCAM-1、ICAM-1的分泌(P<0.05,P<0.01),且使iNOS、PGE2、VCAM-1的分泌呈剂量依赖性;也能显著降低IL-6、TNF-α、CD14、TLR4和MyD88 mRNA的表达(P<0.05,P<0.01),呈剂量依赖性;也能显著下调细胞中NF-κBp65蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),呈剂量依赖性。结论 (-)-Linalool和BCP可通过抑制NF-κB信号通路的活化来减少黏附因子和炎性因子分泌,从而缓解LPS引起的血管内皮细胞炎症损伤,相对而言,(-)-Linalool在抑制血管内皮细胞炎症方面的作用效应稍佳。

艾纳香油对NF-κB及Nrf2/HO-1信号通路的作用研究

旨在通过研究NF-κB、Nrf2/HO-1通路来揭示艾纳香油(Blumea balsamifera(L.) DC Oil, BBO)发挥抗炎效果的作用机制。本研究利用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,试验分为空白组、LPS模型组、BBO组(低、中、高剂量)、BBO阴性对照组,每组3个重复,采用Hoechst 33342和PI双染检测BBO对细胞凋亡的影响;采用ELISA和分光光度法检测BBO对LPS诱导巨噬细胞后分泌IL-1β、TNF-α、PGE_(2)、LTB_(4)、NO含量及iNOS活力的影响;采用RT-PCR检测BBO对TNF-α、IL-1β的mRNA表达水平的影响;采用Western blotting检测BBO对NF-κB及Nrf2/HO-1信号通路关键蛋白水平的影响。结果显示,BBO在80μg·mL^(-1)剂量范围内可以扭转LPS导致的巨噬细胞形态变化及细胞凋亡发生;与LPS模型组相比,BBO 60~80μg·mL^(-1)剂量下可以极显著抑制LPS诱导的细胞炎性因子和炎症介质IL-1β、TNF-α、PGE_(2)、LTB_(4)、NO的分泌及iNOS活力(P<0.01),并极显著抑制LPS导致的细胞IL-1β、TNF-α mRNA表达(P<0.01);同时,BBO 60~80μg·mL^(-1)剂量下极显著下调LPS导致的COX-2、5-LOX、p-IKKα、p-P65、p-IκB-α、胞质Nrf2蛋白表达(P<0.01),极显著促进HO-1、核Nrf2蛋白表达(P<0.01),并呈现剂量依赖性关系。结果提示,艾纳香油有良好的抑制细胞炎性和抗凋亡效果,其可能通过抑制NF-κB通路中关键蛋白磷酸化和炎症因子的产生从而促进Nrf2/HO-1通路中主要抗炎基因表达最终发挥抗炎作用。

不同产源艾纳香油抗菌活性筛选及其对金黄色葡萄球菌抗菌作用的研究

旨在筛选抗菌效果好的艾纳香油,寻找其抗菌活性物质,分析其对金黄色葡萄球菌抗菌作用。通过对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞杆菌、无乳链球菌、白色念珠菌体外抗菌试验筛选不同产源(A1~A5)和自制的艾纳香油(B1~B9、T),采用GC-MS分析主要化学成分,并检测其部分化合物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),采用金黄色葡萄球菌感染小鼠模型研究艾纳香油T对动物的保护作用,测定其对细菌生长及细菌形态的影响。结果表明,艾纳香油B9、T体外抗菌效果最好,金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌对其敏感,MIC值分别为9.77、13.68μg·mL^-1,MBC值分别为19.54、27.35μg·mL^-1;从艾纳香油B5、B9、T中检测出36种共有化学成分,其中,α-葎草烯、蒎烯、芳樟醇类化合物具有一定抑菌活性;不同浓度艾纳香油T溶液均可不同程度抑制小鼠的死亡率,减轻小鼠脾肿大、肾炎性渗出,差异极显著(P<0.01);低浓度艾纳香油T溶液能延迟菌株进入对数生长期,高浓度能杀死细菌,造成菌体不规则凸出及凹陷结构,变形严重,甚至细胞破碎。筛选获得艾纳香油T抗菌活性较好,其对金黄色葡萄球菌的抑制与破坏菌体结构、抑制菌株生长有关,其中,α-葎草烯、蒎烯和芳樟醇类化合物可能是抑菌关键物质,值得进一步开发和研究。

艾纳香油中抗炎成分的筛选及其对炎性因子的影响

为了寻找艾纳香油中的抗炎物质,并研究其对巨噬细胞炎性因子的影响,本文采用动物炎症模型筛选艾纳香油中具有抗炎活性的部分化合物,再检测目标化合物对LPS刺激RAW264.7细胞中相关炎性因子的影响。发现艾纳香油中(-)-芳樟醇、反式-石竹烯抗炎活性最佳,且不同剂量的(-)-芳樟醇、反式-石竹烯均能抑制LTB4、PGE2、NO和iNOS炎症介质的产生,下调TNF-α、IL-1β、COX-2、5-LOX、FLAP、NF-κB-p65的表达。结果表明(-)-芳樟醇、反式-石竹烯是艾纳香油中的重要抗炎物质,它们可通过抑制多种炎症介质和细胞因子以及NF-κB-p65的表达来发挥抗炎作用。

艾纳香中抗炎活性成分虚拟筛选及麦角甾醇过氧化物对NF-κB信号通路的影响

目的探讨艾纳香中靶向TLR_(4)信号通路关键蛋白的抗炎活性成分及作用机制。方法本研究以TLR_(4)信号通路关键蛋白为靶点对艾纳香的化合物进行筛选,并通过MTT、ELISA、Western blot、亚细胞结构定位等方法检测了从艾纳香中筛选出的麦角甾醇过氧化物(ergosterol peroxide,EP)对细胞活性、LPS致细胞炎性因子分泌和NF-κB相关蛋白表达的影响。结果艾纳香中EP、β-谷甾醇、16-贝壳杉烯、胡萝卜甾醇、木犀草素、金丝桃苷、芫花素等具有较好的对接打分;2.3×10^(-5)-9.3×10^(-5)mol·L^(-1)的EP能抑制LPS致RAW264.7细胞TLR信号通路下游蛋白IκB的降解和磷酸化以及NF-κB p65磷酸化,进一步抑制NF-κB p65的入核,从而抑制细胞因子IL-6、IL-1β的分泌。结论通过分子对接技术筛选和抗炎活性检测明确了艾纳香中抗炎物质,并阐明以EP为活性物质的抗炎作用及机制。

基于网络药理学分析金英黄归汤治疗乳腺炎的作用机制

构建金英黄归汤干预乳腺炎的"中药-活性成分-靶点-炎症通路"网络关系,预测其治疗乳腺炎的靶点及机制。采用网络药理学方法,通过数据库收集金英黄归汤中化合物,以口服利用度(OB)和类药性(DL)作为限定条件筛选活性成分,收集其作用靶点,并应用Cytoscape软件拓补分析主要靶点,利用GeneCards等数据库获取乳腺炎疾病靶点,应用韦恩分析获取活性成分治疗乳腺炎的交集靶点;STRING数据库构建交集靶点之间的交互网络,利用DAVID数据库对作用的乳腺炎靶点进行GO和KEGG通路富集,最后构建"活性成分-靶点-炎症通路-疾病"网络。金英黄归汤中满足筛选条件的活性成分有62个,相对应的预测靶点有229个,主要靶点144个,乳腺炎疾病靶点有139个,金英黄归汤活性成分作用乳腺炎的靶点有23个,其通过调控Toll样受体(TLR)、TNF、NF-κB以及NOD样受体(NLRs)信号通路来治疗乳腺炎。金英黄归汤针对乳腺炎的药理作用是通过多成分、多靶点、多途径进行,这将为深入研究药效物质基础和作用机制提供理论指导。