基于Wnt/β-catenin信号通路探讨黄精-当归配伍对阿尔茨海默病小鼠海马神经干细胞增殖的影响

目的 观察黄精-当归配伍(CPA)对阿尔茨海默病(AD)小鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 雄性KM小鼠64只,随机分成正常对照组、AD模型组、CPA组、IWR-1-endo组。AD模型组、CPA组、IWR-1-endo组采用颈背部皮下注射1%D-半乳糖[140 mg/(kg·d),连续3 w]联合腹腔注射东莨菪碱[2 mg/(kg·d),连续2 w]复制小鼠AD模型;造模1 w后同时对CPA组及IWR-1-endo组灌胃CPA提取液[2.5 g/(kg·d),持续4 w],并对IWR-1-endo组增给腹腔注射Wnt信号抑制剂IWR-1-endo液;第5周开始,对各组再增加腹腔注射5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)处理[50 mg/(kg·d),连续5 d]。药物干预结束后,运用跳台仪检测各组行为学改变;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)与Western印迹分别检测各组海马神经β-catenin、GSK-3β mRNA和蛋白表达变化;免疫组化及免疫荧光检测海马DG区BrdU阳性细胞表达量的差异。结果 与正常对照组比较,AD模型组痴呆症状明显,学习与记忆各测试指标均明显变差,海马β-catenin mRNA及蛋白表达水平均明显下降,GSK-3β mRNA及蛋白表达水平均明显升高,海马DG区BrdU免疫组化及免疫荧光阳性细胞数量均明显减少(均P<0.01)。与AD模型组比较,CPA组痴呆症状明显改善,学习与记忆各测试指标均明显好转,海马β-catenin mRNA及蛋白表达水平均明显升高,GSK-3β mRNA及蛋白表达水平均明显下降,海马DG区BrdU免疫组化及免疫荧光阳性细胞数量均明显增多(均P<0.01)。与CPA组比较,IWR-1-endo组痴呆症状严重,学习与记忆各测试指标均明显变差,海马β-catenin mRNA及蛋白表达水平均明显下降,GSK-3β mRNA及蛋白表达水平均明显升高,海马DG区BrdU免疫组化及免疫荧光阳性细胞数量均明显减少(均P<0.01)。结论 CPA可通过激活AD小鼠海马神经Wnt/β-catenin信号通路促进NSCs增殖发挥治疗AD作用。

基于Wnt信号通路的中药治疗脑缺血/再灌注损伤研究进展

Wnt信号通路可以调控神经干细胞增殖与分化、神经细胞生长与发育,与缺血性脑卒中后的脑缺血/再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)治疗机制有着密切联系。研究表明,一些具有补肾滋肝、益气养阴、活血行气、祛瘀化痰等功效的单味中药及中药复方能激活脑内Wnt信号通路发挥治疗CIRI作用,其中医本质是针对CIRI的肝肾阴虚、气血衰少、血瘀痰毒核心病机进行辨证施治。该文总结了枸杞、山茱萸、姜黄、丹参等单味中药及脑络欣通、丹龙醒脑方、益气活血方、补肾生髓方、黄精丸等中药复方通过调控脑内Wnt信号通路治疗CIRI的研究结果,并分析得出中药补肾生髓、益气填精其现代医学实质与激活Wnt信号通路后促进机体脑血管新生与重塑、刺激脑内特定区域神经干细胞增殖分化有着密切相关性,活血祛瘀、化痰清毒则与激活Wnt信号通路后改善脑部血液供应,发挥抗炎、抗自由基、抗氧化等功能有关。

针刺对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮质细胞焦亡的影响

目的 观察针刺对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠大脑皮质形态结构、NLRP3表达、caspase-1蛋白表达及活性和血清白介素-1β(IL-1β)含量的影响,以阐明针刺减轻CIRI的作用机制。方法 将100只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(IR组)和针刺组(ACU组)。采用线栓法栓塞大脑中动脉,并于2 h后再灌注以制备CIRI模型,针刺组给予针刺“百会”“大椎”“足三里”穴治疗,每日1次,20 min/次,共4次(即再灌注后2 h、24 h、48 h、72 h);HE染色法观察大脑皮质形态结构;Western blot技术检测大脑皮质NLRP3和caspase-1表达;比色法检测大脑皮质caspase-1活性;放射免疫分析法测定血清IL-1β含量。结果与Sham组相比,IR组大鼠脑梗死灶增大,大脑皮质细胞排列疏松,可见大量炎细胞浸润,NLRP3和caspase-1蛋白表达显著增多(P<0.05),大脑皮质caspase-1活性升高(P<0.05),血清IL-1β含量增加(P<0.05);与IR组相比,ACU组大鼠脑梗死灶减小,大脑皮质细胞排列较致密,炎细胞浸润较少,NLRP3和caspase-1(P<0.05)蛋白表达减少,大脑皮质caspase-1活性降低(P<0.05),血清IL-1β含量减少(P<0.05)。结论 针刺可能通过降低大脑皮质NLRP3和caspase-1蛋白表达、降低caspase-1活性和减少IL-1β含量,减少大鼠大脑皮质细胞焦亡,从而减轻脑缺血再灌注损伤。

黄精丸对学习记忆障碍小鼠海马神经元自噬的影响

目的:观察黄精丸(CHP)对D-半乳糖联合东莨菪碱所致学习记忆障碍小鼠海马神经自噬的影响,探讨其可能的作用机制。方法:将90只8周龄雄性昆明小鼠随机分为正常组、模型组、多奈哌齐组、CHP低、中、高剂量组。除正常组外,前3周各组小鼠每日颈背部皮下注射1次0.14 g·kg^(-1)D-半乳糖、后2周改为每日腹腔注射1次2 mg·kg^(-1)东莨菪碱复制学习记忆障碍小鼠以模拟阿尔茨海默病(AD)。造模开始1周后,多奈哌齐组给予0.65 mg·kg^(-1)多奈哌齐,CHP低、中、高剂量组分别给予1.25、2.5、7.5 g·kg^(-1)CHP提取液,模型组给予生理盐水0.5 mL,每天灌胃1次,连续4周。以水迷宫装置观察各小鼠行为学改变,尼氏染色分析各小鼠海马形态学变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各小鼠海马组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、自噬效应蛋白-1(Beclin-1)及泛素结合蛋白p62(p62)的mRNA表达水平差异,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠海马组织mTOR、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、p62的蛋白表达水平差异,免疫组化探测各组小鼠海马神经元Beclin-1阳性表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠学习记忆障碍、痴呆症状明显,其海马结构紊乱、神经元数量减少(P<0.01),mTOR、Beclin-1的mRNA及蛋白表达水平均显著降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著降低,p62的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,多奈哌齐组及CHP各组小鼠痴呆症状及学习记忆好转,海马神经结构紊乱有所改善、神经元数量增加(P<0.05,P<0.01),mTOR、Beclin-1的mRNA及蛋白表达水平均明显升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显升高,p62的mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:CHP能促进海马神经元自噬发挥治疗AD的作用,其机制可能与激活mTOR信号通路有关。

全蝎防治神经系统类疾病的研究进展

全蝎为我国传统中药之一,具有广泛的药理作用。本文综合了国内外学者对全蝎及全蝎提取物防治神经系统疾病的相关研究,得出全蝎可通过调控神经细胞关键信号通路及基因表达、离子通道及离子水平、SOD等抗氧化酶活力、胶质活性、纤溶酶原系统、等机制发挥防治神经系统疾病的作用,其在防治抽动症、癫痫、脑血管疾病、惊厥、头痛显示出较好的效果,表明该药具有较好的神经保护作用,值得深入研究与开发。