微小RNA-146a-5p在新生隐球菌、脂多糖诱导THP-1细胞中表达的对比分析

目的为探讨微小RNA-146a-5p(miR-146a-5p)在新生隐球菌所致隐球菌性脑膜炎中的调控作用及机制奠定基础。方法把体外培养的人单核细胞系THP-1细胞分成新生隐球菌刺激组和脂多糖(LPS)刺激组,分别用与细胞数量相同的灭活新生隐球菌(WM148)和浓度为1 mg/L的LPS刺激THP-1细胞,分别于0、3、6、9、12 h收集上清液和细胞。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6的表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞miR-146a-5p的表达情况。结果新生隐球菌诱导后,细胞中miR-146a-5p的表达对比对照组(0h)明显升高(P<0.05),3 h达到最高值,随后逐渐下降;上清液中TNF-α的表达在诱导后12 h达到最高值,IL-6的表达各时间点变化不明显。LPS诱导后,miR-146a-5p的表达逐渐升高,12 h达到最高值;上清液中TNF-α的表达3 h后一直处于峰值;IL-6的表达逐渐增加,12 h达到最高值。结论新生隐球菌、LPS诱导THP-1细胞炎性反应后,miR-146a-5p表达随时间延长呈现不同的规律,TNF-α、IL-6的动态变化表现不同的特点。表明miR-146a-5p参与新生隐球菌、LPS诱导THP-1炎性反应存在不同的调控机制。

微小RNA-146a在新生隐球菌、格特隐球菌诱导THP-1细胞炎性反应中的机制研究

目的观察并分析微小RNA-146a(miR-146a)在新生隐球菌(标准株WM148)、格特隐球菌(标准株R265)刺激人单核巨噬细胞系(THP-1细胞)中表达的差异,探讨miR-146a在隐球菌所致隐球菌脑膜炎中的调控作用及机制。方法体外培养的人单核巨噬细胞系THP-1细胞分成新生隐球菌诱导组、格特隐球菌诱导组,按灭活菌数∶THP-1=5∶1的比例与THP-1细胞共孵育0、3、6、9和12 h后离心收集上清液和细胞沉淀。采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术检测各组细胞miR-146a的表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的释放量。结果新生隐球菌诱导组细胞中miR-146a表达量与0 h相比明显升高(P<0.01),且在3 h达到峰值,随后呈下降趋势;上清液中TNF-α的表达量在诱导后12 h达到最高值,IL-6的表达各时间点没有明显变化。格特隐球菌诱导后,miR-146a的表达逐渐升高,12 h达到最高值,但3 h、6 h点变化与0 h比较差异并无统计学意义;上清液中TNF-α的表达12 h到达峰值;IL-6的表达逐渐增加,12 h达到最高值,变化无统计学意义。结论新生隐球菌、格特隐球菌刺激THP-1细胞炎性反应后,miR-146a表达随时间延长呈现不同的规律,TNF-α、IL-6的动态变化表现不同的特点。研究表明新生隐球菌、格特隐球菌诱导THP-1炎性反应可能存在不同的调控机制。