牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞软骨分化的蛋白组学分析

背景:前期研究发现牛膝醇提物具有诱导骨髓间充质干细胞定向软骨细胞分化的作用,但具体作用蛋白靶点和网络机制不详。目的:观察牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞软骨分化的蛋白质组学分析及蛋白质相互作用网络构建。方法:采用密度梯度离心联合细胞贴壁法分离培养新西兰大白兔骨髓间充质干细胞,取第3代细胞随机分成5组:空白组、对照组、牛膝醇提物低、中、高剂量组,连续成软骨诱导培养21 d后,用qRT-PCR检测Ⅱ型胶原mRNA表达及甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞形成,应用绝对定量同位素标记(iTRAQ)结合双向液相色谱-串联质谱(2DLC-MS/MS)技术对各组差异表达蛋白质进行鉴定,并对差异蛋白进行GO分析、KEGG分析及蛋白质网络相互作用分析。结果与结论:(1)qRT-PCR结果显示牛膝醇提物高剂量组较其他组Ⅱ型胶原mRNA表达明显增高(P<0.05),牛膝醇提物高剂量组甲苯胺蓝染色阳性,蛋白组学分析共鉴定到1354个差异蛋白点,上调蛋白633个,下调蛋白721个。(2)根据qRT-PCR结果对空白组、牛膝醇提物高剂量组、对照组3组差异表达蛋白进行生物信息分析。GO分析发现这些差异表达蛋白参与代谢、细胞分化、细胞周期与凋亡、炎症反应、免疫调控、氧化应激、磷酸化、泛素化、癌相关等;KEGG分析获得与骨关节病最相关的10个典型信号通路:白细胞介素17信号通路,Toll样受体信号通路,Wnt信号通路,PI3K-Akt信号通路,mTOR信号通路,Jak-STAT信号通路,NF-kappa B信号通路,MAPK信号通路,AMPK信号通路,HIF-1信号通路;根据组间差异蛋白,使用Cytoscape3.6.0软件成功构建蛋白互作网络图。(3)结果表明,牛膝醇提物可以通过调控氧化、细胞周期与凋亡、细胞结构改变、细胞分化、代谢及炎症损伤等环节诱导兔骨髓间充质干细胞成软骨分化,具有多靶点、多中心的网络调控作用,其具体作用机制有待进一步研究。

木瓜蛋白酶与石膏制动建立兔膝骨关节炎模型的比较

目的比较木瓜蛋白酶关节腔注射与关节石膏伸直位制动建立兔膝骨关节炎模型的效果。方法将21只实验兔采用随机区组分组法分为正常组、木瓜蛋白酶组及石膏组,每组7只。木瓜蛋白酶组予6%木瓜蛋白酶生理盐水溶液于实验开始第1、4、7天行右膝关节腔注射,注射结束4周后造模完成;石膏组予膝关节伸直位固定6周;记录实验期间动物不良情况发生率,造模完成后处死实验兔,取软骨标本进行大体观察、Pelletier评分、Mankin's评分,免疫组化测定软骨Ⅱ型胶原蛋白含量,ELISA法检测血清和关节液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)以及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的含量。结果大体观察显示木瓜蛋白酶组与石膏组均出现关节肿胀、关节间隙变窄、软骨缺损、滑膜增生硬化、炎症改变、骨赘形成;Pelletier评分、Mankin's评分、Ⅱ型胶原蛋白含量、血清和关节液中TNF-α、COMP以及MMP-3的含量,木瓜蛋白酶组、石膏组与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);木瓜蛋白酶组与石膏组比较,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。木瓜蛋白酶组动物不良情况发生率明显低于石膏组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论木瓜蛋白酶关节腔注射与石膏关节伸直位制动均能成功建立膝骨关节炎模型,但木瓜蛋白酶关节腔注射法更为快捷、简便,并发情况少,可行性好。

牛膝醇提物对兔骨关节炎模型的疗效比较

目的比较牛膝醇提物(AEAB)与硫酸氨基葡萄糖和双醋瑞因对于兔骨关节炎(OA)的疗效。方法将35只实验兔采用随机区组分组法分为正常组、模型组、AEAB组、硫酸氨基葡萄糖组和双醋瑞因组,每组7只。石膏固定制动6周制备OA模型,造模后,分别以蒸馏水、AEAB、硫酸氨基葡萄糖及双醋瑞因灌胃,正常组不予处理,6周后处死实验兔,取软骨标本进行大体观察、Pelletier评分、Mankin评分,用免疫组化测定软骨Ⅱ型胶原蛋白含量,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清和关节液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)以及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的含量。结果 AEAB组、硫酸氨基葡萄糖组和双醋瑞因组Pelletier评分、Mankin评分、Ⅱ型胶原蛋白含量、血清和关节液中TNF-α、IL-1β以及MMP-3的含量分别与正常组、模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);AEAB组与硫酸氨基葡萄糖组及双醋瑞因组比较,上述指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 AEAB可以促进兔OA模型的软骨修复,其疗效与硫酸氨基葡萄糖及双醋瑞因相当,具有较高的临床应用价值。

牛膝醇提物对兔骨关节炎软骨细胞体外增殖及糖胺聚糖的干预作用

目的观察牛膝醇提物对兔骨关节炎软骨细胞体外增殖及对糖胺聚糖(GAG)形成的影响。方法骨关节炎造模成功后提取、分离兔骨关节炎软骨细胞,用甲苯胺蓝染色确定软骨细胞的存在,将软骨细胞接种于5组:空白对照组、牛膝醇提物低剂量组、牛膝醇提物中剂量组、牛膝醇提物高剂量组、经典软骨增殖组。倒置相差显微镜观察软骨细胞形态,用CCK-8法检测软骨细胞增殖率,免疫细胞学检测Ⅱ型胶原蛋白荧光表达,q RT-PCR检测软骨细胞标记基因Ⅱ型胶原m RNA表达水平,邻联甲苯胺(DMB)染色法检测细胞内GAG含量。结果牛膝醇提物高、中、低剂量组与空白对照组比较Ⅱ型胶原蛋白荧光明显阳性表达;牛膝醇提物高、中剂量组与空白对照组比较软骨细胞标记基因Ⅱ型胶原m RNA明显增加(P<0.05),其中牛膝醇提物高剂量组效果最佳(P<0.01),与经典软骨增殖组比较差异无统计学意义(P>0.05);空白对照组GAG含量与经典软骨增殖组及不同剂量牛膝醇提物组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中牛膝醇提物高剂量组GAG最多(P<0.01),牛膝醇提物高剂量组与经典软骨增殖组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论牛膝醇提物中药含药血清可促进体外软骨细胞的增殖和蛋白合成,具体作用机制有待进一步探讨。

牛膝醇提物对人膝骨关节炎软骨细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的研究牛膝醇提物对人膝骨关节炎软骨细胞增殖、周期及凋亡的影响,探讨牛膝醇提物对软骨细胞的保护作用。方法取膝骨关节炎行膝关节置换患者及因严重创伤需截肢患者的膝关节软骨,进行膝关节软骨细胞原代培养,不同剂量的牛膝醇提物含药血清作用于软骨细胞,镜下观察细胞形态,甲苯胺蓝染色鉴定细胞,运用CCK-8试剂盒测软骨细胞增殖活力,流式细胞术测定软骨细胞周期及凋亡率。结果镜下观察模型组细胞较正常组细胞生长缓慢;甲苯胺蓝染色显示,模型组异染颗粒较正常组少;与正常组比较,模型对照组细胞活力减弱、G0/G1期比例增加、S期细胞比例下降、G2/M期比例上升、细胞凋亡率增加(P<0.01);与模型对照组比较,牛膝醇提物不同剂量组细胞增殖活力增强、G 0/G 1期比例降低、S期细胞比例增加、细胞凋亡率降低(P<0.05),且高剂量组作用显著(P<0.01)。结论牛膝醇提物通过增加人膝骨关节炎软骨细胞的增殖活力、降低细胞生长阻滞、增加细胞DNA合成、减少细胞凋亡来促进软骨细胞的生长,对人膝骨关节炎软骨细胞具有保护作用。

膝关节镜联合六味骨痹丸治疗中老年退行性半月板损伤患者的临床疗效

目的观察膝关节镜联合六味骨痹丸治疗中老年退行性半月板损伤患者的临床疗效。方法将74例接受膝关节镜手术治疗的中老年退行性半月板损伤患者随机分为对照组和观察组,每组37例。对照组患者术后常规性行股四头肌及膝关节功能锻炼,观察组在对照组基础上给予口服六味骨痹丸。比较两组患者术前、术后1个月、术后3个月、术后6个月的膝关节疼痛视觉模拟量表(VAS)评分及Lysholm膝关节评分;比较两组患者术后6个月的治疗效果。结果观察组患者膝关节VAS评分降低程度、膝关节Lysholm升高程度均优于对照组(均P<0.05),其中观察组治疗1个月、3个月及6个月后VAS评分均低于对照组,Lysholm评分均高于对照组(均P<0.05)。术后6个月,两组患者临床有效率差异无统计学意义(P>0.05),但观察组临床显效率高于对照组(P<0.05)。结论膝关节镜联合六味骨痹丸治疗中老年退行性半月板损伤患者疗效显著,可有效缓解术后疼痛,利于膝关节功能恢复。

牛膝醇提物干预BMSC-Exos对OA模型兔局部骨组织超微结构及炎症小体的影响

目的:观察牛膝醇提物含药血清培养的骨髓间充质干细胞来源外泌体对实验兔骨关节炎模型关节局部骨组织超微结构及炎症小体的影响。方法:将20只健康实验兔按照随机数字表法分为空白组、模型组及牛膝醇提物低、中、高剂量组,每组4只,分别予等量蒸馏水及牛膝醇提物低、中、高剂量灌胃1周后采血制备含药血清,用牛膝醇提物不同浓度含药血清连续培养骨髓间充质干细胞7 d,在第7天时从骨髓间充质干细胞上清液中提取外泌体,再将外泌体通过关节穿刺的方法注射到不同组别兔膝骨关节炎模型内,1次/周,连用3周,注射第6周后进行膝关节软骨组织病理HE染色、关节活动度评分及关节粘连改善度评分,用microCT检测膝关节局部周围骨组织超微结构及骨量,采用qRT-PCR检测滑膜组织中炎症小体关键分子NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、Toll4 mRNA、NF-κB mRNA表达水平。结果:实验兔膝关节腔注射外泌体后第6周,与模型组比较,低、中、高剂量组兔膝关节活动度和粘连改善度评分均明显升高(P<0.01),且与剂量呈正相关。模型组兔膝关节软骨基质染色变浅,软骨细胞数量明显减少,关节面凹凸不平,血管入侵潮线结构;低、中、高剂量组兔膝关节软骨基质染色逐渐恢复正常,软骨细胞数量较模型组增多,软骨细胞呈卵圆形,关节面恢复平整,潮线结构依次恢复正常。microCT检测提示,与模型组比较,低、中、高剂量组兔膝关节的Mean、BMD、Conn.Dn.、BV/TV均明显升高(P<0.05),BS均明显降低(P<0.05),而BS/BV、BS/TV、Tb.N、Tb.Sp、DA组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05),其中Mean、BMD、Conn.Dn.、BV/TV、BS与剂量呈相关性。qRT-PCR检测结果显示,模型组兔滑膜组织NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、Toll4mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均明显高于空白组(P<0.01),低、中、高剂量组兔滑膜组织NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、Toll4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均明显低于模型组(P<0.05),且与剂量呈正相关。结论:牛膝醇提物能改善OA模型兔局部骨组织骨含量及骨微结构,能降低炎症小体通路关键分子NLRP3 mRNA、Caspase-1mRNA、Toll4 mRNA、NF-κB mRNA表达。

牛膝醇提液透入疗法治疗膝关节滑膜炎的疗效观察

目的:观察牛膝醇提液透入疗法治疗膝关节滑膜炎的临床疗效。方法:将80例膝关节滑膜炎患者随机分为两组,治疗组40例使用牛膝醇提液透入治疗,对照组40例使用正清风痛宁注射液透入治疗,连续治疗3周,观察比较两组治疗前后患膝B超积液量、关节肿胀评分、关节活动度评分及WOMAC量表中视觉模拟评分(VAS)。结果:治疗后两组各项临床评分指标均较治疗前改善(P<0.05);治疗后两组VAS评分差异无统计学意义(P>0.05),治疗组患膝B超积液量、关节肿胀评分、关节活动度评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:牛膝醇提液透入疗法治疗膝关节滑膜炎有较好疗效,能改善关节活动度,减少患膝B超积液量,减轻膝关节肿胀。

基于多组学整合分析牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞软骨分化的生物网络机制研究

目的:观察牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)软骨分化的多组学生物网络机制。方法:将12只实验兔随机分为空白组、牛膝醇提物组、阳性对照组,每组4只,制备含药血清。再用密度梯度离心联合骨髓贴壁法分离培养兔BMSCs,取P3代细胞随机分成3组:空白组、牛膝醇提物组、阳性对照组,用不同组别含药血清连续诱导培养21 d后,用同位素标记相对和绝对定量(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantification,iTRAQ)结合双向液相色谱-串联质谱技术测定不同组别差异表达蛋白质,用转录组测序筛选不同组别差异表达基因。采用生物信息学进行三组整合韦恩分析、基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析及网络拓扑学分析,并构建生物网络蛋白质-蛋白质相互作用图。结果:韦恩分析显示牛膝醇提物组vs.空白组共有14个蛋白/基因,阳性对照组vs.空白组共有48个蛋白/基因,阳性对照组vs.牛膝醇提物组共有25个蛋白/基因;富集分析显示牛膝醇提物组vs.空白组共富集到7个GO功能或KEGG通路,阳性对照组vs.空白组共富集到21个GO功能或KEGG通路,阳性对照组vs.牛膝醇提物组共富集到10个GO功能或KEGG通路;网络拓扑学分析显示在网络中节点3种网络拓扑性质计算得分Top10的节点基因方面,牛膝醇提物组vs.空白组是ISG15、HSPA5、HYOU1、HSP90B1、ERO1A、MANF、SLC3A2、DDX58、PRKRA、RAB39B,阳性对照组vs.空白组是HSPA5、HSP90B1、PDIA4、CTSB、VCL、LDHA、HYOU1、PHGDH、LGALS3、TFRC,阳性对照组vs.牛膝醇提物组是LGALS3、CTSB、FABP4、ANPEP、HP、ACAN、CD9、TFRC、LCP1、NID2。结论:牛膝醇提物诱导兔BMSCs成软骨分化具有多靶点、多中心的网络调控作用,其具体的作用机制有待进一步验证研究。

带袢钢板与锁骨钩钢板治疗肩锁关节脱位效果比较的Meta分析

目的系统评价带袢钢板与锁骨钩钢板治疗肩锁关节脱位的效果。方法计算机全面检索The Cochrane Library、PubMed、CNKI、Wanfang、CBM数据库(检索时间从建库至2017年11月),由2位研究员独立完成文献筛选、质量评价和资料提取,并将提取数据采用Review Manager 5.3进行Meta分析。据据治疗方式分为带袢钢板和锁骨钩钢板组。结果最终33篇文献符合纳入标准,共纳入患者1718例。其中带袢钢板组825例,锁骨钩钢板组893例。Meta分析结果显示,带袢钢板组在术后肩关节功能Constant-Murley评分[WMD=6.64,95%CI(3.70,9.57),P <0. 000 01]、肩关节Karlsson分级[OR=3.92,95%CI(2.72,5.66),P <0.000 01]、肩关节活动度恢复[WMD=13.85,95%CI(10.36,17.34),P <0. 000 01]、术中出血量[WMD=-11.38,95%CI(-18.22,-4.54),P=0. 001]方面均优于锁骨钩钢板组,但在手术时间[WMD=1.28,95%CI(-4.38,6.94),P=0.66]方面,两组比较差异无统计学意义(P> 0.05)。结论与锁骨钩钢板内固定治疗肩锁关节脱位比较,带袢钢板内固定能更好地改善肩关节功能,提升肩关节活动度,减少术中出血量,是一种有效、安全的手术方式。

牛膝对人软骨细胞体外增殖的影响

目的:探讨牛膝对人关节软骨细胞体外增殖的影响。方法:膝骨关节炎患者口服不同浓度牛膝醇提物,收集不同浓度牛膝含药血清,取膝骨关节炎行关节置换手术患者的关节软骨,剪碎后,采用Ⅱ型胶原酶溶解消化软骨细胞,甲苯胺蓝染色确定软骨细胞的存在。将第3代软骨细胞分别接种于4组:空白对照组、含药血清高剂量组、含药血清中剂量组、含药血清低剂量组。荧光倒置相差显微镜观察软骨细胞形态和结构,采用CCK-8法检测软骨细胞增殖情况,RT-PCR法分析软骨细胞基因Ⅱ型胶原mRNA表达水平。结果:牛膝含药血清高、中剂量组细胞增殖率高于对照组(P<0.05),含药血清低剂量组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);RT-PCR法检测结果显示牛膝含药血清高、中、低剂量组均高于空白对照组(P<0.05)。结论:牛膝含药血清能促进人软骨细胞体外培养增殖和Ⅱ型胶原的合成。

“六味骨痹汤”治疗膝骨关节炎疗效及安全性的临床研究

目的:观察、评价"六味骨痹汤"治疗膝骨关节炎的疗效及安全性。方法:将60例肝肾亏虚型膝骨关节炎患者随机分为2组,每组30例。治疗组接受"六味骨痹汤"治疗,对照组接受硫酸氨基葡萄糖治疗,连续治疗6周。采用VAS评分、Lequesne指数作为疗效评价标准,比较两组患者服药前后主观疼痛变化,观察膝关节症状(包括休息痛、运动痛、压痛、肿胀、晨僵和行走能力)的改善程度,并记录用药期间不良反应、生命体征及实验室生化指标等。结果:治疗后两组各项临床评分较治疗前均显著好转,与治疗前差异有统计学意义(P<0.05),治疗后两组间差异无统计学意义(P>0.05);治疗组无明显不良反应发生,不良反应率低于对照组,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:"六味骨痹汤"可有效降低VAS评分及Lequesne指数,对膝骨关节炎疗效良好,安全性高,值得临床推广使用。

牛膝总皂苷含药关节液对骨关节炎体外软骨细胞增殖及凋亡的实验研究

目的:观察牛膝总皂苷(TSA)含药关节液对兔骨关节炎(OA)体外软骨细胞增殖及凋亡的影响。方法:将30只兔分为TSA组、硫酸氨基葡萄糖组、空白对照组,每组10只,分别予TSA、硫酸氨基葡萄糖、蒸馏水灌胃7d后制备含药关节液;进行OA造模,鉴定OA造模成功后体外提取关节软骨细胞进行培养、鉴定。将P3代软骨细胞分为TSA组、硫酸氨基葡萄糖组、空白对照组、经典软骨增殖组,分别用10%TSA含药关节液+10%FBS+DMEM∶F12(1∶1)培养液、10%硫酸氨基葡萄糖含药关节液+10%FBS+DMEM∶F12(1∶1)培养液、10%空白含药关节液+10%FBS+DMEM∶F12(1∶1)培养液、10%FBS+DMEM∶F12(1∶1)培养液进行培养,对培养后的软骨细胞进行细胞形态学观察,用CCK-8法检测细胞增殖情况,免疫荧光染色检测Ⅱ型胶原蛋白表达,Annexin V-PE/7-AAD双染流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:OA软骨细胞体外分离成功,经甲苯胺蓝染色鉴定细胞为软骨细胞来源;CCK-8法观察四组细胞生长曲线,绘制的生长曲线符合Logistic生长曲线规律,TSA组在第2～7天细胞增殖速度明显高于其它3组,差异有统计学意义(P<0.05);连续培养7d后,与空白对照组比较,TSA组Ⅱ型胶原蛋白表达显著,差异有统计学意义(P<0.01),硫酸氨基葡萄糖组、经典软骨增殖组Ⅱ型胶原蛋白表达明显,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测显示,与空白对照组(总凋亡率为17.61%±1.19%)比较,经典软骨增殖组(总凋亡率为16.50%±1.42%)细胞凋亡减少不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,TSA组(总凋亡率为5.15%±1.96%)、硫酸氨基葡萄糖组(总凋亡率为7.76%±1.72%)细胞凋亡减少明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:TSA含药关节液能有效提高细胞活力、促进软骨细胞增殖、提高Ⅱ型胶原蛋白表达,且降低软骨细胞早期、晚期凋亡率,对证实TSA是牛膝作用于软骨细胞的主要物质基础具有重要意义。

六味骨痹汤对兔骨关节炎滑膜组织的影响及与软骨修复的相关性研究

【目的】通过观察六味骨痹汤对骨关节炎(OA)模型兔关节液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)含量,滑膜、关节软骨形态及软骨Ⅱ型胶原蛋白表达的影响,探讨其对OA滑膜组织的修复作用及与关节软骨修复的相关性。【方法】将32只新西兰兔随机分为正常组、模型组、六味骨痹汤组和硫酸氨基葡萄糖组,每组8只。采用木瓜蛋白酶关节注射法建立兔OA模型。成功造模后,前2组每日给予10 mL生理盐水灌胃,后2组每日分别对应给予六味骨痹汤(剂量为3.8 g·kg-1·d-1)及硫酸氨基葡萄糖胶囊(剂量为77.0 mg·kg-1·d-1)灌胃。给药6周后,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测各组实验兔关节液中TNF-α、IL-1β、MMP-13含量,按照Krenn标准及改良Mankin’s法分别对滑膜炎症程度及软骨损伤程度进行评分,并评价软骨标本中Ⅱ型胶原蛋白表达情况,最后分析关节滑膜炎症程度与软骨修复的相关性。【结果】六味骨痹汤组和硫酸氨基葡萄糖组关节液中TNF-α、IL-1β、MMP-13含量,滑膜炎症Krenn评分,关节软骨Mankin’s评分均较模型组显著降低(P<0.01),Ⅱ型胶原蛋白表达评分显著升高(P<0.05);2给药组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。各组滑膜炎症的缓解与软骨的修复程度成较强的正相关性。【结论】六味骨痹汤对兔OA模型滑膜炎症有缓解作用,并且这种改变与Ⅱ型胶原蛋白高表达及OA软骨的修复程度相关。本研究明确了补肝肾、强筋骨类方药治疗OA滑膜炎的疗效及与软骨修复的相关性,也为中药治疗滑膜炎及软骨损伤性疾病提供数据支持及新的思路。

六味骨痹汤对兔骨关节炎软骨的修复作用及其机制初探

目的:观察六味骨痹汤对兔骨关节炎模型关节软骨形态、Ⅱ型胶原蛋白表达及体液中胶原酶3(MMP-13)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)的影响,探讨其对骨关节炎(OA)软骨的修复作用及其可能机制。方法:取2~3月龄清洁级新西兰兔32只,体质量(2.42±0.23)kg,采用木瓜蛋白酶关节注射法建立兔OA模型,随机区组法分为六味骨痹汤组、硫酸氨基葡萄糖(GS)组和模型组,另设正常组。前两组分别予六味骨痹汤3.83g/(kg·d)、硫酸氨基葡萄糖胶囊77mg/(kg·d)溶于生理盐水10mL灌胃,模型组和正常组均予生理盐水(10mL/d)灌胃。6周后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清及关节液中MMP-13,TNF-α及COMP的含量;处死实验兔,按Pelletier原则对关节软骨大体形态评分;取软骨病理标本,部分予苏木精-伊红染色后用改良Mankin's法予组织形态学观察评分,其他标本免疫组化染色后对其Ⅱ型胶原蛋白表达情况进行观察评分。结果:与模型组相比,六味骨痹汤组血清和关节液中MMP-13,TNF-α及COMP的含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);关节软骨Pelletier评分和改良Mankin's评分显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅱ型胶原蛋白表达有所增加,差异有统计学意义(P<0.05).与GS组相比,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05).结论:六味骨痹汤可促进兔OA模型软骨修复,其机制可能是通过降低兔血清和关节液中MMP-13,TNF-α等因子的含量抑制软骨破坏,从而提高Ⅱ型胶原蛋白的表达来发挥作用。

牛膝醇溶液透药联合硫酸氨基葡萄糖治疗膝骨关节炎的临床观察

目的:观察牛膝醇溶液透药联合硫酸氨基葡萄糖治疗膝骨关节炎的疗效。方法:将75例膝骨关节炎患者采用随机数字表法随机分为3组,每组25例。A组为治疗组,接受牛膝醇溶液透药及口服硫酸氨基葡萄糖治疗,B,C组为对照组,B组只接受牛膝醇溶液透药治疗,C组只口服硫酸氨基葡萄糖治疗,连续治疗6周,透药为每5d后休息2d.观察、比较3组治疗前后视觉模拟系统(VAS)评分、西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC评分)及膝关节肿胀评分。结果:治疗后3组各项临床评分较治疗前均显著好转(P<0.05);其中3组间的VAS评分差异无统计学意义(P>0.05),而在WOMAC评分、膝关节肿胀评分上A组优于B,C组,且差异有统计学意义(P<0.05),B组和C组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:牛膝醇溶液透药联合口服硫酸氨基葡萄糖,较单用牛膝醇溶液和硫酸氨基葡萄糖,对膝骨关节炎疗效更佳,值得临床推广。

消瘀散及其拆方治疗急性软组织挫伤的实验研究

目的:观察消瘀散及其拆方对急性软组织挫伤的疗效差异,选取治疗急性软组织挫伤最优的中药复方。方法:通过正交t值法主药分析表将消瘀散拆方分为12组(其中拆方组11组为A^E和G^L组,全方组为F组),将72只新西兰大白兔造成急性软组织挫伤模型后,随机分配到12组中,各组用药后第3,5天做大体观察评分、光镜下组织病理评分、血液流变检测和血清IL-1β及IL-6含量测定,评分数据用SPSS 17.0统计软件统计。结果:第3,5天各组间的大体观察评分、光镜下组织病理评分、血液流变检测和血清IL-1β及IL-6含量测定均有不同程度的降低,其中B组、K组及全方F组明显优于其余拆方组(P<0.01),K组、F组优于B组(P<0.05),K组、F组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:B组、K组及全方组对治疗急性软组织挫伤均有较好的疗效,其中K组及全方F组疗效更佳。