冷藏凡纳滨对虾肌肉软化的生化特性及生物标记物

【目的】探究冷藏凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)质构品质劣变生化变化特性并识别生物标记物。【方法】测定凡纳滨对虾4℃冷藏期间肌肉质构参数,检测肌肉组织中糖原与乳酸含量、ATP水平,以及Ca^(2+)-ATP酶、酸性与碱性磷酸酶(ACP、AKP)活性,分析无氧代谢特征和磷酸化调控酶活性动态变化,解析各指标间相互联系。【结果与结论】4℃冷藏期间对虾质构指标迅速下降,冷藏72 h后硬度显著下降至(2947±113)g(P<0.05),肌原纤维小片化指数(MFI)与质构指标呈显著负相关(P<0.01);新鲜对虾冷藏24 h后磷酸果糖激酶(PFK)活性显著下降至(20.82±0.38)U/mg(P<0.05),且PFK活性与糖酵解各指标相关性最强,其调控的糖酵解是触发和加速肌肉快速软化的关键前期生化事件;ATP含量调控磷酸酶和Ca^(2+)-ATP酶活性,ACP活性和AKP活性在冷藏96 h显著上升至(16.39±1.17)U/mg和(0.86±0.05)U/mg(P<0.05),Ca^(2+)-ATP酶活性24 h后降至(0.50±0.01)U/mg(P<0.05)。随时间延长,Ca^(2+)-ATP酶活性下降诱导内质网释放Ca^(2+)诱导磷酸酶开启去磷酸化进程,蛋白质降解信号暴露被泛素化标记,肌原纤维蛋白进而被降解;相关性分析结合生化基本原理初步判定,Ca^(2+)-ATP酶为质构劣化的生物标记物。

4种提取方法对对虾肌原纤维蛋白提取率、空间结构和热稳定性的影响

【目的】获取提取率高且结构完整的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肌原纤维蛋白。【方法】通过0.5 mol/L KCl、53 kHz超声辅助0.5 mol/L KCl、53 kHz超声辅助质量分数5%十二烷基硫酸钠(SDS)和RIPA裂解液这4种提取方法提取对虾肌原纤维蛋白,以肌原纤维蛋白提取率和结构完整性为评价指标,采用光谱学和凝胶电泳生化,评价四种提取方法对对虾肌原纤维蛋白提取率、空间结构和热稳定性的影响。【结果】53 kHz超声辅助0.5 mol/L KCl、0.5 mol/L KCl、53 kHz超声辅助5%SDS和RIPA裂解液4种方法所得提取率分别为(87.99±3.08)%、(53.76±3.90)%、(75.59±0.95)%和(95.46±4.49)%。53 kHz超声辅助0.5 mol/L KCl提取的蛋白中肌钙蛋白和原肌球蛋白蛋白丰度较高,0.5 mol/L KCl和53 kHz超声辅助质量分数5%SDS提取的肌球蛋白重链和肌动蛋白蛋白丰度较高;相较于0.5 mol/L KCl,超声辅助提取可最大限度保持肌原纤维蛋白天然结构,α-螺旋结构保留完好;0.5 mol/L KCl提取可较好维持肌原纤维蛋白的酰胺Ⅰ带结构。RIPA裂解液提取对肌原纤维蛋白二级结构有明显破坏,热稳定性仅为原蛋白的(60.63±4.46)%。【结论】综合提取率、空间结构和热稳定性结果,采用53 kHz超声辅助5%SDS提取可获得质量最佳的凡纳滨对虾肌原纤维。本研究可为后续深入解析冷藏对虾品质劣变和开发高效控制技术提供高质量的肌原纤维蛋白。

湛江市市售对虾汞污染情况分析

为了解广东省湛江市市售对虾中汞污染的情况,本文以5个不同品种的市售对虾为研究对象,采用微波消解-电感耦合等离子体质谱法分析各品种对虾的虾头、虾肉、虾壳中的总汞含量变化,并结合单因子指数评价法对虾肉中的汞污染情况进行评价。结果表明,5种对虾的虾头中总汞含量最高,其次为虾肉和虾壳;宽沟对虾和中国对虾较日本对虾、南美白对虾和刀额新对虾更易发生汞污染;虾肉的污染指数均小于0.2,表明汞污染程度低,消费者可安全食用。

香蕉皮提取物通过调节肠道菌群和肠神经递质水平提高便秘模型小鼠肠动力

探究香蕉皮提取物对便秘小鼠肠动力的干预作用。本研究采用混合抗生素溶液构建便秘小鼠模型。用香蕉皮提取物溶液对便秘小鼠进行干预,并测定其对便秘小鼠的肠道菌群、肠神经递质水平和肠动力的影响。结果表明,高浓度香蕉皮提取物组小鼠的粪便含水量增加了137.5%、小肠推进率增加了3.4倍、首粒黑便排出时长减少了73.7%(P<0.05),且基本恢复到空白组小鼠水平。便秘模型小鼠菌群紊乱,部分有益菌缺失,经低浓度香蕉皮提取物干预后,属水平上Trabulsiella(特布尔西菌属)和Unclassified-f-Enterobacteriaceae的相对丰度增加了6倍,肠道Bacteroides(拟杆菌属)的相对丰度减少了94.4%。在神经递质中,低浓度香蕉皮提取物组小鼠的去甲肾上腺素、多巴胺、γ-氨基丁酸、乙酰胆碱的浓度显著增加了6.1%、17.6%、63.7%、52.6%。以上结果表明,香蕉皮提取物可调节肠道菌群和肠神经递质水平提高便秘小鼠肠动力。

液相色谱-串联质谱法测定烟叶中的玉米赤霉烯酮

建立了液相色谱-串联质谱法测定烟叶中玉米赤霉烯酮的方法。样品经无水乙醚提取,正己烷净化,采用多反应检测扫描方式(MRM),ESI负离子模式,确定了玉米赤霉烯酮的分子离子峰为(m/z)317.30,定量离子为(m/z)175.15,定性离子为(m/z)131.10,273.25。玉米赤霉烯酮在0~10ng/mL范围内线性关系良好(R>0.999),方法检出限为0.42μg/kg;平均回收率为96.4%~101.1%,日内精密度RSD为2.5%,日间精密度RSD为9.05%。采用该方法满足烟叶中玉米赤霉烯酮的低含量检测。

腌制时间对低钠盐腌制红鳍笛鲷鱼干感官及质构品质的影响

【目的】揭示腌制时间对低钠盐腌制红鳍笛鲷(Lutianus erythropterus)鱼干(下称“红鱼干”)感官品质及质构状态的影响,为优质低钠盐腌制红鱼干的加工工艺优化提供理论依据。【方法】以NaCl和KCl分别按照质量分数85%和15%的比例制备低钠盐,再以鱼体质量30%的用量,通过覆抹式干腌、清水脱盐、自然日晒等加工工艺制备红鱼干,考察不同腌制时间(2、4、6、8、10 h)对低钠盐腌制红鱼干成品的感官、色度、质构、肌肉纤维结构、盐分及水分质量分数、水分分布和迁移等指标的影响。【结果】随着腌制时间的递增,红鱼干的咸度、鲜味、腌腊味、硬度、嚼劲和金黄色泽等感官品质均显著提高(P<0.05),此时盐分的增多使鱼干内部的水分逐渐向外迁移,蛋白与水分的结合力增强,肌纤维最终收缩密集;腌制时间超出8 h后,红鱼干的亮黄色度、咀嚼性、NaCl质量分数和水分整体自由度均显著下降(P<0.05),灰绿色度明显上升。【结论】低钠盐腌制时间对红鱼干的感官及质构品质具有显著影响。本研究条件下,8h的腌制时间可保证低钠盐腌制红鱼干处于较优的感官品质及质构状态。

一种CAS-镉(Ⅱ)平板覆盖法鉴别微生物分泌铁载体对镉的螯合能力

为了更加直观和稳定地鉴别微生物分泌铁载体螯合镉的能力,采用铬天青S(chrome azurol S,CAS)-铁(Ⅲ)平板培养法确认菌株洋葱伯克霍尔德菌具有产铁载体能力,并在CAS-铁(Ⅲ)检测液的工作原理上改良得CAS-镉(Ⅱ)检测液。在CAS-镉(Ⅱ)检测液基础上分别采用菌上清液检测法、平板法和平板覆盖法尝试鉴别该菌分泌的铁载体是否具备螯合镉的能力。结果显示洋葱伯克霍尔德菌具有产铁载体的能力,液体检测法存在干扰因素,平板法则无法检测和培养细菌,唯独平板覆盖法能确保微生物生长,并在处理12 h后的菌落周围观察到明显的镉螯合褪色圈,说明通过CAS-镉(Ⅱ)平板覆盖法能够清晰稳定地鉴别微生物螯合镉的能力。该研究成果佐证了微生物分泌的铁载体对镉的螯合作用,为筛选螯合重金属的微生物提供了新方法和思路。

罗望子单体香料开发及在卷烟中的应用研究

为研究罗望子单体香料成分及其对卷烟吸食品质的影响,采用乙醇回流提取法,从罗望子中提取浸膏,并通过比较不同产地的罗望子,选择云南西双版纳的小粒罗望子作进一步的研究;改进传统的提取方法,采用乙醇重复回流提取法提取罗望子浸膏;对罗望子浸膏具有挥収性的化学成分进行气相色谱质谱分析,鉴定出38种化合物,主要包括5-羟甲基糠醛、D-松醇、糠醛、棕榈酸等。罗望子浸膏应用于卷烟加香试验的结果显示,当加料量为0.2‰时,能增加卷烟香气量和提升香气质,同时能减少刺激性改善卷烟口感。罗望子浸膏含有多种香味成分,在卷烟加香中具有较好的应用价值。

基于LC-MS/MS和比较基因组学技术解析海洋源解淀粉芽孢杆菌CMT-9产抗菌脂肽的分子机理

为探究海洋源解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CMT-9产抗菌脂肽的分子机理。采用高效液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术检测CMT-9发酵液的主要组分,结合Illumina高通量测序解析CMT-9的全基因组信息,并将其与B.velezensis CMT-6、B.amyloliquefaciens DSM7T、B.velezensis FZB42和B.subtilis 168中脂肽合成相关的代谢通路和关键基因进行比较分析。结果表明,CMT-9的发酵液含有表面活性素、伊枯草菌素、芬荠素3种脂肽。全基因组测序分析发现,CMT-9菌株染色体的基因组全长为3928149 bp,G+C含量为43.39%,tRNA数量为83,rRNA为9。通过GO、KEGG、COG数据库比对,其差异基因主要富集在碳水化合物代谢和氨基酸代谢等合成脂肽的相关通路;脂肽谱相近的菌株CMT-9、CMT-6、FZB42在基因组组分、G+C含量、共线性、同源性和共有基因中均表现出高度的一致性。该研究通过LC-MS/MS和比较基因组学技术联用解析芽孢杆菌脂肽谱的差异及其分子机理,以期为脂肽高产菌株的筛选及基因库的构建提供理论基础。

对虾T-2毒素微胶囊毒饵料的制备和效果评价

T-2毒素微胶囊是制备虾毒饵料研究该毒素在对虾食品链中传递规律的前提技术,从T-2毒素微胶囊毒饵料的性状、包埋率及对虾利用率3个方面对其进行评价。采用微胶囊技术,以复合蛋白制剂为壁材,20 ng T-2毒素和对虾饲料为混合芯材,采用均质和物理加热法使复合蛋白制剂包裹混合心材,再用恒温干燥法使其硬化,形成颗粒状对虾T-2毒素微胶囊毒饵料,建立了T-2毒素微胶囊毒饵料的制备工艺。采用LC-MS/MS技术检测T-2毒素,普通毒饵料、微胶囊毒饵料抽提水样中T-2的毒素含量分别为2.661、0.654 ng/mL,微胶囊毒饵料的包埋率达96.73%,其利用率是普通毒饵料的1.7倍。研究表明T-2毒素微胶囊毒饵料可以解决对虾口服难溶于水的T-2毒素的问题,并提高了T-2毒素的利用率,为研究T-2毒素对对虾的作用提供技术支撑。

纳豆菌脂肽对分离于对虾养殖环境中产T-2毒素镰孢菌抑制效应的研究

为了探明纳豆菌脂肽对对虾养殖环境中的产T-2毒素镰孢菌分离株的控制效应,实验采用扫描电镜观察了镰孢菌孢子超微结构、普通显微镜观察了菌丝形态、荧光显微镜观察了菌丝通透性。结果显示,脂肽浓度为1 mg/mL时,脂肽对镰孢菌孢子萌发的抑制率达78.8%,镰孢菌培养到第3天的生物量为不加脂肽对照的24.5%。扫描电镜观察结果表明,1 mg/mL的脂肽可以使镰孢菌的孢子呈念珠状;普通显微镜观察结果显示,1 mg/mL脂肽处理能使菌丝隔膜消失;荧光显微镜观察结果表明,脂肽能增加镰孢菌菌丝细胞膜的通透性。

高效液相色谱-串联质谱法测定3种水产品中的T-2毒素与HT-2毒素

建立高效液相色谱-串联质谱定量快速检测罗非鱼、南美白对虾和黄金贝中的T-2毒素与HT-2毒素方法。以10 mL乙酸乙酯作为提取溶剂,振荡提取,无水硫酸钠除水,定量移取5 mL提取液氮气吹干后用1 mL含有0.1%甲酸的甲醇-5 mmol/L乙酸铵溶液（3∶7,V/V）复溶,正己烷脱脂净化,基质匹配法外标定量。3种水产品中T-2毒素和HT-2毒素的检出限分别为2μg/kg和4μg/kg。T-2毒素质量浓度为2～100 ng/mL,HT-2毒素质量浓度为4～200 ng/mL,范围内线性良好。在3种样本中进行3个水平添加实验（n=6）,T-2毒素回收率为84.3%～109.9%,HT-2毒素的回收率为90.9%～103.2%。T-2毒素的相对标准偏差为2.0%～8.7%,HT-2毒素的相对标准偏差为2.6%～10.6%。本方法简便快速、准确度好、精密度高,适用于3种代表性水产品中T-2与HT-2毒素的同时检测。

水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的HPLC-UVD法测定

建立同时检测水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的HPLC-UVD法。以2%碱性乙酸乙酯作为提取溶剂,正己烷脱脂后直接经高效液相色谱进行分析。氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考在0.10～10.00mg/L范围内有良好的线性关系。在添加浓度为0.25～5.00mg/kg时,平均回收率在81.00%～102.93%之间,RSD在1.95%～7.10%之间。氯霉素的检出限为0.01mg/kg,甲砜霉素和氟苯尼考的检出限为0.02mg/kg。

盐酸氯苯胍在红笛鲷体内的药代动力学及残留消除规律

在水温(28±2)℃、盐度28条件下,将盐酸氯苯胍(Robenidine hydrochloride,ROBH)按30 mg/kg的剂量口灌红笛鲷(Luthjanus sanguineus),用HPLC-MS/MS法研究ROBH在红笛鲷体内的药代动力学和残留消除规律。结果表明:单剂量口灌给药后,红笛鲷血浆中ROBH的药时数据符合一级吸收二室模型,药物在血浆中的达峰时间t_p为1.79 h,血药浓度峰值C_(max)为211.38μg/L,药时曲线下面积(AUC_(0-∞))为5 229.16μg/(L·h),消除半衰期(t1/2β)为46.99 h。ROBH在红笛鲷其他组织中分布较广,消除速度较慢,肌肉、肝脏和肾脏的C_(max)分别为37.58、863.02、1 063.24μg/kg,t_p均为1.5 h,AUC0-∞分别1 017.03、20 841.20、30 743.04μg/(kg·h);t1/2β分别为26.35、14.05和24.31 h。连续5 d口灌给药后,红笛鲷血浆、肌肉、肝脏和肾脏中的药物消除半衰期t1/2分别为46.14、36.11、28.62、26.92 h。以10μg/kg为最高残留限量,肌肉作为食用靶组织,在本试验条件下,建议休药期不少于7 d。

高效液相色谱-串联质谱法测定纺织品中的克莱范残留量

建立了高效液相色谱-串联质谱定量测定纺织品中克莱范（Kelevan）残留的分析方法。样品经甲醇-乙腈（1∶1）混合溶液超声提取，弗罗里硅柱净化，ESI负离子模式下多反应监测（MRM）模式测定。待测物经Hypersil GOLD C18色谱柱分离，以甲醇-5 mmol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱，外标法定量。结果显示，克莱范在1.0-200.0 μg/L 范围内线性关系良好，定量下限（以信噪比≥10计）为0.025 mg/kg，以0.025、0.250、0.625 mg/kg浓度进行加标后测得回收率为90.6%-103.4%，相对标准偏差为3.3%-5.2% 。本实验建立的方法简便、准确、可操作性强，弥补了国内纺织品中克莱范检测方法的空白。

甲砜霉素在眼斑拟石首鱼体内的药代动力学研究

在水温(20±2)℃条件下,以10 mg/kg的剂量对健康眼斑拟石首鱼(Sciaenops ocellatus)腹注和口灌甲砜霉素,采用HPLC-MS/MS方法测定组织中的药物浓度,研究甲砜霉素在该鱼种体内的代谢动力学。结果显示,两种给药方式下眼斑拟石首鱼血浆药时数据均符合一级吸收二室模型;腹注给药后血浆、肾脏、肝脏和肌肉的药物峰值(C_(max))分别为5.50μg/m L、10.96μg/g、6.61μg/g和3.50μg/g,达峰时间(tp)分别为1.2、1.5、2.0和6.0 h,消除半衰期(t1/2β)分别为44.82、17.27、29.39和26.99 h;口灌给药后血浆、肾脏、肝脏和肌肉的Cmax分别为4.62μg/m L、7.11μg/g、4.99μg/g和3.58μg/g,tp分别为2.4、4.0、4.0和4.0 h,t1/2β分别为14.67、27.34、37.68和32.65 h。腹注给药方式下甲砜霉素在眼斑拟石首鱼体内的吸收快于口灌给药,在肾脏、肝脏和和肌肉中的消除快于口灌给药,在血浆中的消除则慢于口灌给药。

水产品中盐酸小檗碱的高效液相色谱-串联质谱法测定

建立检测水产品中盐酸小檗碱残留量的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）方法。样品经酸化甲醇（含体积分数1%甲酸）提取,正己烷脱脂,离心后,用高效液相色谱-串联质谱仪分析。以选择反应监测（SRM）正离子模式分析,定性离子对为336/320和336/292,定量离子对为336/320,盐酸小檗碱质量浓度在1-100 ng/mL范围内线性关系良好,线性相关系数为0.999 7,检出限为0.001 mg/kg。样品盐酸小檗碱的添加剂量为5-100μg/kg时,平均加标回收率为81.29%-104-06%,相对标准偏差为2.97%-7.87%,可满足水产品中盐酸小檗碱残留检测和药代动力学的研究需要。

HPLC-MS/MS法同时测定水产品中的诺氟沙星、盐酸小檗碱、盐酸氯苯胍残留

建立了一种同时测定水产品中诺氟沙星、盐酸小檗碱和盐酸氯苯胍残留量的HP LC-MS/MS法。样品经1％甲酸甲醇提取，正己烷脱脂，冷冻、离心后，用高效液相色谱-串联质谱仪，选择反应监测（ SRM）、正离子模式进行定性和定量分析。结果表明：诺氟沙星、盐酸小檗碱和盐酸氯苯胍在1～100 ng/mL范围内线性关系良好，线性相关系数≥0．9996，检出限为1 ng/g。诺氟沙星、盐酸小檗碱、盐酸氯苯胍在5、50和100 ng/g三个添加水平下，三种水产品肌肉的平均加标回收率在79．83％～104．06％之间，相对标准偏差在2．97％～9．15％之间。本方法重现性好，灵敏度高，能够满足水产品中诺氟沙星、盐酸小檗碱和盐酸氯苯胍的残留检测和药代动力学的研究需要。

氟苯尼考在红笛鲷体内的药代动力学研究

为研究氟苯尼考在红笛鲷体内的药代动力学特征,在水温(20±2)℃条件下,氟苯尼考以10 mg/kg单剂量腹注和口灌健康红笛鲷(Lutjanus sanguineus),采用HPLC-MS/MS测定组织中的药物浓度,数据用DAS3.0软件分析。结果显示,两种给药方式下红笛鲷血浆药时数据均符合一级吸收二室模型;腹注给药后血浆、肝脏、肾脏和肌肉的峰浓度(C_(max))分别为10.62μg/m L、8.36、22.57和4.76μg/g,达峰时间(T_(max))分别为1.2、1.0、1.0和6.0 h,消除半衰期(t_(1/2β))分别为29.76、17.84、17.23和19.48 h;口灌给药后血浆、肝脏、肾脏和肌肉的C_(max)分别为2.35μg/m L、1.45μg/g、4.06μg/g和1.73μg/g,T_(max)分别为2.69、1.5、1.5和4.0 h,t_(1/2β)分别为40.59、12.29、37.78和47.34 h。结果表明,腹注给药方式下氟苯尼考在红笛鲷体内的吸收快于口灌给药,在血浆和肝脏中的消除快于口灌给药,在肌肉和肾脏中的消除则慢于口灌给药。研究结果为氟苯尼考在临床上的合理应用提供了科学依据。

纳豆菌发酵制作鱼内脏有机肥与抑制立枯丝核菌的应用

为了探索纳豆菌有机肥对作物的生长作用及其提高作物对茎基腐病原菌-立枯丝核菌的抗性能力,以纳豆菌作为发酵菌兼功能菌制作鱼内脏有机肥,将成品有机肥进行作物对立枯丝核菌的抗性应用实验:将番茄和辣椒种子播种于感染立枯丝核菌的园土及原园土中,对比植株在两种园土中的生长情况,并进行纳豆菌与立枯丝核菌平板对峙培养试验。结果发现,成品有机肥对两种种子发芽的作用都不明显,两种作物在两种园土中加肥组的植株生长量均达到无肥组的3倍左右,染菌园土中不加肥的番茄和辣椒苗茎基腐病苗率分别是55%和50%,加肥组的番茄和辣椒苗茎基腐病苗率分别是11%和17%;平板对峙培养的菌落状况显示立枯丝核菌生长受到抑制。结果表明,纳豆菌对立枯丝核菌生长具有抑制作用,用纳豆菌发酵制作的有机肥提高番茄和辣椒的生长量,并减少这两种作物的茎基腐病苗率。