丹参饮复方提取物-A对心肌缺血大鼠的保护作用研究

目的:研究丹参饮复方提取物-A对冠脉结扎心肌缺血大鼠的保护作用。方法:采用大鼠冠脉结扎手术制备心肌缺血大鼠模型,观察不同剂量丹参饮复方提取物-A对心肌缺血大鼠血清心肌酶学、心肌组织形态学及心肌超微结构的影响,评价其对缺血心肌的保护作用。结果:丹参饮复方提取物-A能显著降低心肌缺血大鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性,升高心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,降低丙二醛(MDA)含量;改善心肌病理形态及心肌细胞超微结构的损伤。结论:丹参饮复方提取物-A可降低心肌缺血大鼠血清心肌酶学水平,抑制机体氧化应激反应,保护受损心肌细胞,进而发挥对缺血心肌的保护作用。

丹参饮在正常与心肌缺血大鼠体内的药动学研究

目的:比较丹参饮中丹参酮Ⅱ_(A)、隐丹参酮、丹酚酸B、丹参素4个成分在正常及心肌缺血模型大鼠体内的药动学参数。方法:将健康大鼠连续3 d腹腔注射5 mg/kg盐酸异丙肾上腺素,建立心肌缺血模型。造模成功后,大鼠随机分为单次给药模型组、多次给药模型组,另设单次给药正常组、多次给药正常组。单次给药组给药1 d,多次给药组连续给药7 d,各组于末次给药后0.083、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、12 h眼底静脉丛取血,LC/MS测定丹参酮Ⅱ_(A)、隐丹参酮、丹酚酸B、丹参素血药浓度,PK solver 2.0软件计算药动学参数。结果:建立的丹参酮Ⅱ_(A)、隐丹参酮、丹酚酸B、丹参素血药浓度测定方法学考察结果符合生物样品的定量分析要求;单次给药后,与正常组相比,模型组大鼠体内丹参酮Ⅱ_(A)的C_(max)、AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)及隐丹参酮的C_(max)、AUT_(0-t)升高(P<0.05或P<0.01),丹酚酸B的AUC_(0-t)有所下降,MRT、t_(1/2)缩短;多次给药后,与正常组相比,模型组大鼠体内丹参酮Ⅱ_(A)、隐丹参酮、丹酚酸B的C_(max)、AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)升高(P<0.01),t_(1/2)、MRT延长,丹参素的T_(max)降低,C_(max)、AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)升高。结论:心肌缺血状态下,药物的吸收情况要比正常状态下好,多次给药可以提高药物在体内的血药浓度,增加生物利用度。

基于转录组学筛选左归丸促进MC3T3-E1细胞成骨细胞增殖分化的关键基因

目的探讨左归丸治疗骨质疏松(OP)多靶点的分子机制。方法采用0、100、200、400、1000μg/mL浓度的左归丸溶液干预MC3T3-E1细胞,Western Blot检测总β-连环蛋白(β-catenin)、活性β-catenin、成骨细胞特异性转录因子2(Runx2)、成骨细胞特异性转录因子(Osx)蛋白表达,qPCR检测Runx2、Osx、Ⅱ型α胶原蛋白基因(Col2a1)、骨钙蛋白(Ocn)、β-catenin mRNA表达,CCK-8检测MC3T3-E1细胞增殖活力,碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红染色(ARS)检测MC3T3-E1细胞成骨细胞分化能力,RNA-Seq筛选左归丸促进MC3T3-E1细胞成骨细胞增殖分化的差异基因并进行qPCR验证。结果不同浓度左归丸溶液(100、200、400、1000μg/mL)干预MC3T3-E1细胞48 h,成骨标志基因(Runx2、Osx、Col2A1、Ocn、β-catenin)表达水平明显升高(P<0.05),MC3T3-E1细胞增殖率明显升高(P<0.05),ALP、ARS染色明显增强(P<0.05),其中以400μg/mL左归丸溶液干预效果最明显。当左归丸溶液干预浓度达到1000μg/mL,MC3T3-E1细胞成骨分化能力显著下降(P<0.05)。采用400μg/mL左归丸溶液干预MC3T3-E1细胞48 h,RNA-seq筛选出10个差异最大基因,其中6个上调基因和4个下调基因,qPCR验证发现,EF-Hand钙结合域9(Efcab9)、叉头框蛋白J1(Foxj1)mRNA表达水平升高(P<0.05),Ras蛋白特异性鸟嘌呤核苷酸释放因子1(RasGRF1)、生长分化因子-9(GDF9)、Ⅳ型胶原蛋白α-3链(Col4a3)mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论左归丸溶液(400μg/mL)能够调节Efcab9、FOXj1、RasGRF1、GDF-9、Col4a3 mRNA表达水平,促进MC3T3-E1细胞成骨细胞增殖分化。

丹参饮提取物A通过PI3K-Akt信号通路抗细胞凋亡机制的研究

目的探讨丹参饮提取物A(Danshen Yin's extracts A,DSYEA)抗心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的作用机制。方法采用大鼠冠脉结扎手术制备心肌缺血大鼠模型。取70只大鼠随机分为正常组、模型组、复方丹参滴丸组(含生药量78.7 g·kg^(-1))、尼可地尔组(含生药量2.91 g·kg^(-1))及丹参饮提取物A(DSYEA)低、中、高剂量组(含生药量3.88,7.76,15.52 g·kg^(-1)),正常组和模型组灌胃等量蒸馏水。给药30 d后,TUNEL法测定细胞凋亡指数;免疫组化法检测Bax/Bcl-2蛋白的表达;Westen Blot法检测Caspase-3、P-AKT、p-GSK-3β蛋白的表达。结果与模型组比较,DSYEA中、高剂量组可下调心肌细胞凋亡指数及Bax蛋白、Caspase-3蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01),促进Bcl-2蛋白、P-GSK-3β、P-Akt蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论DSYEA可降低心肌缺血大鼠心肌细胞的凋亡,其机制可能与通过PI3K-AKt信号通路调控凋亡蛋白有关。