冻融胚胎移植周期中不同发育阶段胚胎妊娠结局比较

目的探讨冻融胚胎移植周期中不同发育天数胚胎的发育潜能,为进一步提高FET妊娠率提供依据。方法627例患者830个复苏周期胚胎,根据冷冻时间不同,分为D3冷冻组（n=385）,D5冷冻组（n=300）和D6冷冻组（n=145）,待患者内膜达到8~12 mm时,复苏18~20 h（D3胚胎）或2~3 h（D5/D6）后移植。结果移植胚胎数,D3组显著高于D5和D6组（P〈0.05）,D5冷冻组的临床妊娠率和着床率均显著高于D6冷冻组（61.67%vs 51.03%,46.37%vs 37.94%,P〈0.01）和D3冷冻组（61.67%vs 40.26%,46.37%vs 24.57%,P〈0.01）,多胎妊娠率,D5〉D6〉D3组（P〈0.01）。结论在患者有较多胚胎的情况下,进行囊胚培养冷冻,选择囊胚进行冷冻周期移植能够取得更好的临床结局。

蔗糖浓度对分裂期冷冻胚胎移植结局的影响

目的:采用不同的解冻流程解冻同一玻璃化法冷冻的分裂期胚胎,比较两种解冻方法对FET治疗结局的影响。方法:玻璃化冷冻的107个周期,解冻液以蔗糖为解冻溶质,其中51例采用商品化试剂解冻,蔗糖浓度为1.0、0.5、0mol/L(组1);56例采用自配的溶液,5个蔗糖浓度梯度,浓度为0.8、0.6、0.33、0.2、0mol/L(组2)。比较胚胎存活率,全胚胎存活率,解冻胚胎发育率,妊娠率及植入率等情况。结果:在胚胎解冻存活率,全胚胎存活率及妊娠率方面,组2显著高于组1(87.0vs.98.6%,P=0.000;71.0vs.82.0%,P=0.043;27.5vs.46.4%,P=0.048),但是在植入率方面没有差异(17.7vs.25.6%,P=0.138)。结论:玻璃化冷冻分裂期胚胎,适当增加解冻溶质浓度梯度,有助于胚胎解冻存活率,妊娠等临床治疗结局。

胚胎碎片的形成机制和影响因素

胚胎碎片的产生是体外胚胎发育过程中常见的现象,碎片的多少、大小和分布是胚胎评级的主要条件之一,与辅助生殖(artificial reproductive technology,ART)的着床率和临床妊娠率密切相关。碎片的生成是细胞凋亡的征象,当胚胎受到自身原因或体外环境压力时,会产生DNA修复机制,排出对机体有害的细胞成分,导致碎片的生成。本文就胚胎碎片的形成机制和影响碎片生成的因素进行综述。

Cryoleaf和Cryoloop冷冻载体冻融胚胎移植结局

目的:比较Cryoleaf和Cryoloop两种玻璃化冷冻载体对冻融胚胎移植(FET)周期妊娠结局的影响。方法:采用回顾性研究方法,将本中心不同冷冻阶段(day3分裂期胚胎,day5/6囊胚期)的胚胎,根据冷冻载体不同分为Cryoleaf组和Croloop组,比较FET的妊娠结局。结果:分裂期胚胎,Cryoleaf组的胚胎存活率、着床率和临床妊娠率均低于Cryoloop组(P<0.05);囊胚期Cryoleaf组的胚胎着床率低于Cryoloop组(P<0.05),胚胎存活率和临床妊娠率与Cryoloop组比较无差异(P>0.05)。结论:FET周期中,采用cryoloop作为冷冻载体较Cryoleaf能获得更好的妊娠结局。

超促排卵后不同取卵时间对昆明小鼠卵子质量、体内成熟率和体外受精率的影响

目的提高超促排卵KM小鼠卵子质量、体内成熟率和体外受精率。方法对100只KM小鼠进行超促排卵,并观察超促排卵后获得卵子的卵核与第一极体位置及卵周隙变化、卵子形态、卵子体内成熟率和体外受精率。结果注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)后12 h、14 h取卵,卵子质量最好;注射hCG后13 h所取卵的体内成熟率和体外受精率最高。结论 KM系小鼠体外受精的最佳取卵时间为超促排卵后13 h。

精子激动剂对无精子症患者的精子活力及胚胎发育参数的影响

目的探讨了精子激动剂Sper Magic在无精子症患者中实施卵胞浆内单精子注射(ICSI)对精子活力和胚胎发育参数的影响。方法选择纳入移植周期的95例无精子症患者,在ICSI当日,依据是否添加精子激动剂Sper Magic和精子来源分为A、B、C、D组,分别为20例、54例、21例和647例。比较四组患者在年龄、不孕年限、促性腺激素用量、促性腺激素使用天数等临床关键参数指标和获卵数、精子活力、受精率、2PN率、卵裂率、D3优胚率、可利用胚胎率、临床妊娠率、着床率等实验室关键参数指标的差异。结果四组患者在年龄、不孕年限、促性腺激素用量、促性腺激素使用天数及获卵数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。C组患者在精子活力、受精率、2PN率、卵裂率、D3优胚率、可利用胚胎率、临床妊娠率和着床率上明显低于其他三组患者(P<0.01)。D组在D3优胚率上明显高于其他三组患者(P<0.01)。添加精子激动剂Sper Magic后,无论新鲜还是解冻精子,A、B组在临床妊娠率和着床率上均显著高于C组(P<0.05),且A、B组与D组比较具有相同的妊娠结局。结论在无精子症患者中实施ICSI时,在精液中添加精子激动剂Sper Magic后可以明显提高精子活力,改善妊娠结局。

卵子激活剂对无精子症患者冻融睾丸精子ICSI后妊娠结局的影响

目的研究卵子激活剂CultActive在临床中能否提高无精子症患者冻融睾丸精子行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)后的妊娠结局。方法选择2015年1月~2019年12月我院收治的188例行冻融睾丸精子ICSI助孕治疗的无精子症患者作为研究对象,按照患者ICSI后是否进行应用卵子激活剂CultActive随机分为冻融睾丸精子组(n=107)和卵子激活组(n=81),对照组为新鲜睾丸精子组(n=129),分别比较了三组患者在年龄、不孕年限、促性腺激素用量、促性腺激素使用天数等临床资料的差异以及获卵数、受精率、2PN率、分裂率、优胚率、可利用胚胎率、临床妊娠率等胚胎发育情况的差异。结果三组患者在年龄、不孕年限、促性腺激素用量、促性腺激素使用天数、获卵数上均无统计学差异(P>0.05)。B组在2PN率、优胚率、可利用胚胎率上均高于A、C组,但无统计学差异(P>0.05)。三组患者在分裂率上也无统计学差异(P>0.05)。B组在受精率上明显高于C组(P<0.05),且显著高于A组(p<0.01)。B组在临床妊娠率上显著高于A、C组(p<0.01)。结论卵子激活剂CultActive可以提高冻融睾丸精子ICSI效率,值得在临床中推广。

卵母细胞的脱颗粒时间对短时受精后胚胎质量和妊娠结局的影响

目的探讨运用短时受精进行体外受精In vitro fertilization(IVF)时,去除卵子周围颗粒细胞的不同时间对短时受精后胚胎发育质量和妊娠结局影响。方法选择行IVF助孕的原发和继发不孕,且本周期移植的患者323例,按照卵母细胞不同的脱颗粒时间分为A组103例和B组220例。A组移植短时受精后3h去除颗粒细胞发育的胚胎;B组移植短时受精后20h后去除颗粒细胞发育的胚胎,比较两组胚胎的临床指标和发育参数。结果在年龄、不孕年限、原发/继发、Gonadotropin(Gn)用量、Gn使用天数、移植日的内膜厚度等临床资料及卵母细胞数、meiosis II(MII)卵数、2PN卵数、3 PN卵数、1-pronuclei(1 PN)卵数、2-pronuclei(2PN)分裂数、优质胚胎数、移植胚胎数、种植率等胚胎发育参数方面两组间没有显著性差异(P>0.05);但在3-pronuclei(3PN)卵数上两组间差异极显著(P<0.01),在种植率和临床妊娠率上两组间差异显著(P<0.05)。结论短时受精过程中,在确保患者正常受精的情况下,将剩余的卵母细胞保留颗粒细胞可以改善妊娠结局。

应变诱导BMSCs腱向分化的实验研究

目的研究大鼠BMSCs与小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)复合后,施加动态应变刺激能否使BMSCs在体外分化为肌腱细胞(tenocytes,TCs)。方法取1周龄SD大鼠骨髓,采用贴壁培养法分离培养大鼠BMSCs,并用多向分化诱导法和流式细胞仪检测进行鉴定。用生物力学试验机行SIS的拉伸破坏实验,计算SIS的弹性应变。将分离纯化后的第2代BMSCs以2.5×105个/cm2细胞密度种植于3cm×1cm大小的SIS上,形成BMSCs-SIS复合物,固定于应变培养装置对其进行静态培养2d后,施加应变刺激(拉伸频率为0.02Hz,作用时间为15min/h、12h/d,应变幅度为5%)动态培养5d,作为实验组;BMSCs-SIS复合物持续静态培养作为对照组;采用组织块法分离培养SD大鼠鼠尾TCs,用第2代TCs与SIS复合,相同条件下静态培养作为阳性对照组。扫描电镜观察应变培养后BMSCs形态变化,ELISA法检测培养后细胞上清液中2种TCs标志蛋白Scleraxis和Tenomodulin的含量。结果分离培养的SD大鼠BMSCs经多向分化诱导后,可以分化为成骨细胞和脂肪细胞,且流式细胞仪检测示表面标志抗原CD34、CD45为阴性,CD90为阳性,符合BMSCs生物学特性。SIS拉伸破坏实验结果显示,SIS平均弹性应变为39.5%。扫描电镜观察示实验组材料上细胞具有类TCs形态;ELISA法检测示,实验组应变培养后细胞上清液中Scleraxis和Tenomodulin含量分别为(3.56±0.91)μmol/L和(4.27±1.10)μmol/L,阳性对照组分别为(14.73±2.30)μmol/L和(10.65±1.51)μmol/L,对照组分别为(0.23±0.14)μmol/L和(0.16±0.10)μmol/L;3组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论适当的应变刺激培养可在体外诱导BMSCs向TCs方向分化,尚需进一步研究最佳的应变刺激诱导条件。

玻璃化冻存组织工程肌腱体内植入实验研究

目的探讨玻璃化冻存组织工程肌腱植入大鼠体内修复跟腱缺损后不同时期,大鼠的免疫排斥反应及对肝、肾、心血管功能的影响。方法抽取1周龄SD大鼠尾腱,采用组织块法培养肌腱细胞。取第2～4代肌腱细胞,以5×106个/mL细胞密度接种至长1.5cm生物衍生肌腱材料,复合培养构建组织工程肌腱。采用21%DMSO作为玻璃化冻存保护液,Eurocollins solution作为4℃条件下预冷液和洗脱液的基础液体,按自制的玻璃化冻存方法冻存。健康SD大鼠72只,雌雄不限,体重210～230g。随机分成A(n=32)、B(n=32)、C(n=8)3组。A、B组实验动物于跟腱中段制备长约0.5cm肌腱缺损模型,分别将玻璃化冻存后及未冻存的组织工程肌腱移植修复缺损肌腱;C组大鼠未手术,为正常对照。术后2、4、6、8周,行大体观察、肝、肾及心血管功能检测;术后2、4、6周行血清免疫学检测。结果A、B组植入部位均未见组织坏死、积液及化脓感染;术后2周,A、B组均出现粘连现象,4～6周逐渐好转,8周未见明显粘连,新生组织连续性完整,肌腱桥接部已愈合,与正常肌腱类似。术后2、4、6周,血清中IgG和IgM含量A、B、C组组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。肝功能检测:A组术后4周,B组术后4、6周,谷草转氨酶均低于C组,差异有统计学意义(P<0.05);其余各时间点A、B组谷草转氨酶与C组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。各时间点A、B组谷丙转氨酶、ALP、直接胆红素和总胆红素与C组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。肾功能检测:术后2周,A组血清白蛋白和B组肌酐明显下降,与C组比较差异均有统计学意义(P<0.05);术后4、6、8周,A、B组各指标浓度与C组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。心血管功能检测:A组各时间点血糖、甘油三酯、胆固醇与C组比较差异均无统计学意义(P>0.05);B组术后8周甘油三酯与C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论玻璃化冻存的组织工程肌腱植入大鼠体内修复跟腱缺损,未引起明显免疫排斥反应,对肝、肾及心血管功能无明显影响。

玻璃化冷冻保存组织工程肌腱大鼠体内植入对血液免疫及生化指标的影响

目的研究组织工程肌腱体内植入修复跟腱缺损的同时,根据细胞与支架材料的选择、工程化组织构建与保存方式所引起的体内毒性反应特征,从血液免疫和生化学指标方面评价玻璃化冷冻保存组织工程肌腱材料对机体的安全性影响。方法随机将72只SD大鼠分为3组,A、B两组各32只,C组8只。手术造成A、B两组大鼠一侧跟腱0.5cm缺失,分别植入1cm长的玻璃化冷冻保存与非玻璃化冷冻保存组织工程肌腱材料,C组不经任何手术。三组大鼠分批于术后第2、4、6、8周股动脉放血处死,收集全血分离血清,采用双抗体夹心ELISA、速率、双缩脲、溴甲酚绿、尿酶紫外速率、苦味酸、已糖激酶、氧化酶、DMSO、Diaso法测定血液相关免疫及生化指标。结果 A、B两组各项指标在相同植入期比较,差异无统计学意义(P>0.05);A、B两组与C组比较,除A组4周、B组4周和6周AST值及A组2周ALB值、B组2周CREA值明显低于C组相应指标外(P<0.05),其他指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论玻璃化冷冻保存组织工程肌腱大鼠体内植入后血液免疫及生化各项指标与非手术大鼠基本一致。证实了玻璃化冷冻保存组织工程肌腱用于肌腱缺损修复是安全可靠的,未发现免疫排斥反应,对肝肾功能无明显影响。