猪伪狂犬病诊断方法与疫苗研究进展

猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)可引起妊娠母猪繁殖障碍和新生仔猪神经症状,可感染人类并引起脑炎,使感染者出现严重的神经症状,直接危害人类健康,因此对该病的研究具有重大意义。近年该病在世界范围内广泛分布,对世界养猪业造成了巨大的经济损失,受到国内外学者的高度关注,对该病的研究也日益深入,在诊断方法及防控机制等方面取得了重要进展。论文就近年来猪伪狂犬病诊断方法及疫苗的发展进行综述,以期为在猪伪狂犬病诊断方法和疫苗选择上提供参考。

猪伪狂犬病病毒感染及复制影响因素的研究

猪伪狂犬病(Porcinepseudorabies,PR)是由PR病毒(PRV)引起猪的病毒性传染病,对世界养猪业造成了重大经济损失。猪作为PRV唯一的自然宿主,可引起母猪产死胎、木乃伊胎和屡配不孕;公猪睾丸萎缩、精液质量下降,丧失种用功能;新生仔猪高热、出现神经症状且两周龄以内的仔猪病死率可达100%[1]。2011年之前,由于Bartha-K61株疫苗在我国的广泛使用,PR在我国得到了较好的控制。但自从2011年PRV出现变异之后,现有的PR商品化疫苗只能对动物机体提供部分的免疫保护作用并且尚无特效药物治疗[2]。基于此,本文对影响PRV感染与复制的各类因素的最新研究进展作综述,以期为开发高效抗PRV的新型药物或疫苗提供参考依据。

日本脑炎病毒免疫逃逸分子机制研究进展

日本脑炎(Japanese encephalitis, JE)是由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)引起的一种蚊媒性人兽共患传染病,虽然已有商品化疫苗,但疫苗的预防具有一定的局限性且至今尚无有效药物治疗,一旦暴发将威胁人们的生命健康和公共安全,造成重大经济损失。JEV含有数量众多具有免疫逃逸功能的编码蛋白,这些蛋白逃逸宿主免疫功能的机制多样且复杂,但其机制仍不完全清楚。同时,JEV复杂的免疫逃逸机制可能是阻碍疫苗免疫保护效果的关键因素。因此,本文主要对JEV通过抑制干扰素反应,调节细胞凋亡、焦亡、自噬及宿主miRNA等多种途径逃逸机体先天免疫和适应性免疫机制进行概述,以期为JEV致病机理的研究和疫苗研发提供思路与理论基础。

日本脑炎病毒感染睾丸间质细胞对干扰素调节因子3相关信号通路的影响

旨在探究日本脑炎病毒(JEV)感染睾丸间质细胞后通过激活视黄酸诱导基因Ⅰ型(RIG-Ⅰ)和Toll样受体3(TLR3)等模式识别受体后引发的先天免疫机制。建立JEV感染睾丸间质细胞模型,利用荧光定量PCR和Western blot技术检测不同感染时段细胞的RIG-Ⅰ、TLR3和干扰素调节因子3(IRF3)的转录和蛋白表达、IRF3的磷酸化以及干扰素β(IFN-β)的转录情况。结果显示:JEV感染后细胞中RIG-Ⅰ和IRF3的mRNA和蛋白表达水平均有显著升高(P<0.05),TLR3蛋白表达水平极显著上调(P<0.01),IRF3磷酸化水平极显著上调(P<0.001),IFN-β转录水平显著升高(P<0.05)。结果表明:JEV感染可激活睾丸间质细胞的RIG-Ⅰ和TLR3受体,进而激活IRF3磷酸化,启动IFN-β的分泌,启动机体的先天性免疫抗病毒免反应。

PRRSV受体蛋白CD163及其表达影响因素的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪出现繁殖障碍及仔猪出现严重呼吸道症状的急性传染病,给养殖业带来了严重的经济损失。众多科研人员通过对PRRSV受体的研究逐步了解到该病毒的受体种类和作用机制,在受体蛋白CD169、硫酸乙酰肝素、波形蛋白、DC-SIGN(CD209)、CD151、CD163和NMHC II-A(或MYH9)中,PRRSV主要是通过CD163受体入侵感染,而这过程中又有很多因素增强或减弱CD163的表达,从而增强或抑制PRRSV的感染。本文通过对PPPSV受体蛋白CD163的功能、CD163结构域与PRRSV感染之间的关系进行总结,进一步了解PRRSV的作用机制,以及通过对影响CD163表达因素的研究进行综述,以期为PRRSV受体蛋白CD163的后续研究提供一些思路及参考。

猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白和非结构蛋白研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要引起以母猪流产、产死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔猪呼吸困难、败血症为特征的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),该病传播快、传染性强,是规模化养猪场常见的接触性传染病之一。PRRSV基因组编码GP2a、E、GP3、GP4、GP5、GP5a、M、N等8种结构蛋白和NSP1α、NSP1β、NSP2-NSP8、NSP9-NSP12等至少13种非结构蛋白。论文从三个角度对PRRSV结构蛋白和非结构蛋白进行综述,包括PRRSV感染宿主后结构蛋白和非结构蛋白发挥的作用、它们对宿主信号通路的影响和基于两类蛋白的检测方法,以期为进一步研究PRRSV的致病机制以及防治猪繁殖与呼吸综合征病毒病奠定理论基础。

JEV感染对小鼠睾丸间质细胞信号通路、炎症因子及睾酮分泌影响的研究

为探究日本乙型脑炎病毒(JEV)感染睾丸间质细胞(LC)后对其信号通路、炎症反应和睾酮分泌水平的影响,本研究以MOI 1的JEV感染小鼠LC(TM3细胞)后不同时间采用荧光定量PCR(qPCR)检测TM3细胞中Toll样受体3(TLR3)、维甲酸诱导基因-Ⅰ(RIG-I)、NF-κB及干扰素调节因子3(IRF3)信号通路相关蛋白基因mRNA的转录水平并确定JEV的最佳感染时间。结果显示,与空白对照组相比,JEV感染后12 h各蛋白基因mRNA的转录水平均显著升高(P<0.05),随着JEV感染时间的延长各蛋白基因mRNA转录水平逐渐降低至与空白对照组无显著差异,因此选择12 h作为后续JEV感染细胞的最佳时间。将JEV感染TM3细胞12 h后,采用western blot检测TM3细胞中TLR3、RIG-I、其下游信号通路相关蛋白NF-κB、IRF3及NF-κB和IRF3的磷酸化水平;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测TM3细胞中NF-κB和IRF3蛋白的入核;通过间接ELISA检测TM3细胞中睾酮的分泌水平。Western blot结果显示,JEV感染TM3细胞后12 h TLR3、RIG-I、NF-κB、IRF3蛋白的表达及NF-κB、IRF3的磷酸化水平均显著升高(P<0.05)。IFA结果显示,空白对照组细胞核形态完整,绿色荧光均弥散分布于细胞和细胞质之中,而JEV感染后12 h出现CPE的TM3细胞核溶解和破碎,有些细胞核变形,绿色荧光出现在细胞核中,且荧光信号明显增强。ELISA结果显示,JEV感染后12 h TM3细胞上清中IL-6、IFN-β分泌水平极显著升高(P<0.01),睾酮分泌水平显著下降(P<0.05)。利用TLR3和RIG-I siRNA转染TM3细胞,以干扰TLR3和RIG-I的表达,采用western blot检测这两个siRNA分别对TLR3和RIG-I的干扰效果;干扰TLR3和RIG-I表达后以MOI 1的JEV感染TM3细胞,12 h后经ELISA检测细胞上清中IL-6、IFN-β和睾酮的分泌水平。SiRNA干扰试验结果显示,与空白对照细胞及转染siNC的细胞相比,目的基因siRNA转染的TM3细胞中TLR3和RIG-I蛋白的表达水平均极显著降低(P<0.01);ELISA结果显示,与JEV感染的细胞相比,siRNA+JEV组细胞中IL-6和IFN-β的含量显著或者极显著降低(IL-6:P<0.05;IFN-β:P<0.01),睾酮分泌水平显著升高(P<0.05)。上述结果表明JEV感染TM3细胞后能够通过刺激TLR3、RIG-I的表达,激活NF-κB和IRF3信号通路,诱导NF-κB和IRF3的磷酸化并入核,刺激细胞炎症因子和干扰素的分泌并降低睾酮的分泌水平。本研究为深入探究JEV感染LC后引起雄性动物生殖障碍的机制奠定了基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对宿主细胞信号转导通路影响的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是动脉病毒科包膜病毒家族的成员,为有囊膜、病毒粒子呈球型的单股正链RNA病毒。该病毒引起母猪以繁殖障碍和呼吸系统症状为特征的一种急性、高度传染性疫病,给中国养猪业造成严重危害。妊娠母猪感染PRRSV后主要表现为繁殖障碍,母猪怀孕前期感染发生流产,怀孕中期母猪感染后会产死胎、木乃伊胎、弱胎、畸形胎,哺乳母猪则表现为产后无乳;公猪感染后表现为性欲减弱、精液质量下降、射精量少等症状;仔猪感染后多表现为呼吸困难、关节肿大、败血症等[1]。PRRSV传播快、传染性强,被世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health,WOAH)列入93种法定报告动物疫病之一。

一株长颈鹿金黄色葡萄球菌感染的分离鉴定

最近几年来葡萄球菌感染现象急剧升高引起人们的广泛关注,自然环境中极为广泛地分布着葡萄球菌,细菌能透过多个途径传染,裂开、受损皮肤,黏膜是主要的入侵途径。严重时可造成菌血症、败血症。在葡萄球菌属中,金黄色葡萄球菌是一种最主要的病原体。

一例长颈鹿支原体感染的诊断

支原体又称霉形体,天然无细胞壁,细胞柔软,高度多形性,其大小介于细菌和病毒之间,具有三层膜结构,可通过200~450纳米孔径的滤膜,以二分裂方式生长繁殖,在液体或固体培养基中生长较慢,一般在5%CO_(2)细菌培养箱中培养3~7天,染色其形状呈典型的“油煎蛋”样,革兰氏染色阴性但着色效果不佳,姬姆萨染色良好。支原体于1961年在美国首次于病牛患有乳腺炎的病料中分离出,我国在1983年首次在患有牛乳腺炎的牛奶中分离到牛支原体。

猪瘟病毒新型检测技术的研究进展

猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)是一种能引起猪只急性、热性和全身性败血性疾病的RNA病毒,妊娠母猪、种用公猪感染后分别表现为繁殖障碍和精液带毒,仔猪感染后出现神经症状。我国是生猪养殖和消费大国,生猪养殖量和存栏量均占全球总量一半以上,加上生猪养殖规模化程度低,生猪调运频次高、数量多,一旦爆发猪瘟会给我国生猪养殖业带来重大经济损失。笔者总结了近年来CSFV的检测技术,传统检测技术包括酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),新型检测技术包括免疫层析试纸条、免疫色谱横向流动检测(immuno-chromatographic lateral flow assay,LFA)、抗原捕获酶免疫分析(antigen-capture enzyme immunoassay,EIA)、化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassays,CLIA)、环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、重组酶介导扩增(recombinase-aid amplifacation,RAA)、微滴式数字PCR(microdroplet digital PCR,ddPCR)及其他新型检测技术等,分析上述检测方法的优缺点,以期为临床上检测猪瘟病毒提供可靠有效的方法指导。

微生物群对PRRSV与PCV2混合感染的影响

PRRS与PCV2常入侵猪免疫系统,可导致一系列继发感染,给养殖业带来重大损失。同时一些有益微生物如乳酸杆菌、双歧杆菌等对疫病的发展过程有积极作用。所以本文主要综述一些微生物对两种病毒感染产生的影响,为控制有害微生物对疫病的影响提供一些思路。

一例犬冠状病毒性腹泻的诊疗

犬冠状病毒性腹泻又称犬冠状病毒病,是由犬冠状病毒引起的一种临床上以呕吐、腹泻、脱水及易复发为特征的高度接触性传染病.该病对幼犬危害尤其严重,病死率很高,是目前对养犬业危害较大的疾病之一.本文通过对一例犬冠状病例的治疗,说明犬冠状防控的治疗方案、预防措施的制定与应用.

抗鸽巴氏杆菌的中药有效成分筛选

本文旨在筛选中药有效成分用于抗鸽巴氏杆菌。筛选菊芋、苦参碱、银杏叶黄酮粗提物等9种中药成分,采用药敏纸片法对鸽巴氏杆菌进行体外抑菌试验,然后选出其中抗菌活性较强的中药成分,通过二倍体试管稀释法测出中药有效成分对多杀性巴氏杆菌的最低抑菌浓度。药敏试验结果显示,硫酸黄连素等5种中药成分对鸽巴氏杆菌具有显著的抑菌效果,白头翁提取物等4种中药成分无明显抑菌效果。其中,硫酸黄连素、盐酸小檗碱、艾叶提取物、黄芩苷、苦参碱最低抑菌浓度依次为26.25、0.16、0.47、0.25、6.25mg/ml。结论:本试验筛选了5种效果较好的抗巴氏杆菌中药有效成分,其中盐酸小檗碱和黄芩苷抑菌效果最好,为临床防治鸽巴氏杆菌病提供新的治疗方法。

猪圆环病毒2型检测技术研究进展

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)属圆环病毒科、圆环病毒属,病毒基因组为单股负链环状DNA,病毒呈二十面体对称,无囊膜结构,是迄今为止发现的一种最小的动物病毒。猪圆环病毒依据其致病性和基因组差异分为无致病性的猪圆环病毒1型(Porcine Circovirus 1,PCV1)和有致病性的猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus 2,PCV2)。

猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白功能研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种小的有包膜病毒,基因组约为15 kb,包含11个已知的开放阅读框(ORF)。病毒基因组的3′近端四分之一编码四种包膜糖蛋白(GP2a、GP3、GP4和GP5)、三种非糖基化跨膜蛋白(E、ORF5a和M)和核衣壳蛋白(N)。本文就PRRSV结构蛋白的功能进行综述,以期为接下来的PRRS预防疾病和开发新药提供帮助。

日本脑炎病毒复制及感染影响因素的研究进展

日本脑炎(Japanese encephalitis,JE)是一种蚊媒传播的自然疫源性人畜共患传染病,对世界养猪业造成了重大经济损失,还能感染人类。日本脑炎简称“乙脑”,其病原为日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),是动物疫病防控中最重要的传染病之一。目前,防控JEV的有效措施为生物预防及疫苗免疫。然而,由于JEV存在猪-蚊-人的传播途径,给该病的防控带来严峻挑战,现有的JE商品疫苗只能对动物机体提供部分保护。目前也无有效的抗JEV的药物,抗JEV的有效药物开发成为研究的热点。基于此,本文对影响JEV复制与感染的各类因素的最新研究进展进行综述,以期为开发高效防制JE的新型药品提供参考依据。

猪日本乙型脑炎病毒新型检测方法研究进展

日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是人兽共患病日本乙型脑炎的病原,对世界养猪业造成了巨大的经济损失。因此,建立快速可靠的JEV检测方法,有利于及时检测JEV和采取措施防控日本乙型脑炎。本文总结了近年来检测JEV的新型方法,包括分子生物学检测、免疫学检测、生物传感器检测等技术,以期为有效诊断及防治JEV感染提供技术指导。

检测PRRSV及鉴别HP-PRRSV毒株的二重PCR与二重TaqMan荧光定量PCR方法

为了实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)早期检测及快速鉴别高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)变异株,利用HP-PRRSV Nsp2蛋白第481位和532~560位氨基酸缺失的特性设计2对引物,优化反应条件建立二重PCR检测方法,同时针对PRRSV M基因和HP-PRRSV Nsp2基因设计特异性引物和探针,优化反应条件建立二重TaqMan荧光定量PCR方法,并评估这2种方法的敏感性、特异性、重复性。敏感性试验结果显示:二重PCR方法的检测下限分别为0.058 ng/μL(PRRSV)和4.7 ng/μL(HP-PRRSV);二重TaqMan荧光PCR方法的检测下限分别为10 copies/μL(PRRSV)和100 copies/μL(HP-PRRSV)。这2种方法与其他猪病病原均不发生非特异性反应,重复性试验结果良好。经131份临床样品检测,可得到PRRSV的阳性率约12.2%(16/131)、HP-PRRSV的阳性率约17.6%(23/131)、二者的混合感染率约8.4%(11/131)。证实,本研究成功建立了二重PCR和二重TaqMan荧光定量PCR检测方法,可为临床上猪繁殖与呼吸综合征的防控提供技术支持。

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对宿主细胞信号转导通路影响的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)的病原,能够引起猪的繁殖障碍和呼吸系统疾病,目前尚未完全了解其致病机制。近年来,人们对于PRRSV感染后引起的相关信号通路变化进行了深入研究,许多信号通路传导机制不断被阐释,但仍缺乏系统性的探究,通过对PRRSV感染宿主后引起的相关信号通路变化研究做综述总结,以期为PRRSV研究提供新的思路。