三叶青藤叶配方颗粒的质量标准研究及其5种有效成分的含量测定

目的:建立三叶青藤叶配方颗粒的质量标准,并同时测定其中5种有效成分的含量。方法:采用薄层色谱法(TLC)对三叶青藤叶配方颗粒中绿原酸、异荭草苷、异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷进行定性鉴别。采用紫外分光光度法测定3批样品中总黄酮(以异荭草苷计)含量,并对其粒度、水分、溶化性及装量差异进行检查。以异荭草苷为内参物计算其余成分的相对校正因子,采用一测多评法测定样品中新绿原酸、绿原酸、荭草苷、异荭草苷、异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷的含量,并与外标法测定结果进行比较。结果:绿原酸、异荭草苷、异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷TLC图斑点清晰,分离度好,阴性对照无干扰。样品中异荭草苷检测质量浓度的线性范围为7.73~61.82μg/mL(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2%;加样回收率为93.75%~97.85%(RSD=1.41%,n=6)。3批样品不能通过一号筛且能通过五号筛的平均百分率分别为1.51%、1.55%、1.29%(n=3),含水量分别为4.63%、5.18%、4.03%(n=3);颗粒均在5 min内溶化;装量差异为4.8%~5.0%,均符合2015年版《中国药典》(四部)颗粒剂的相关规定。一测多评法测定5种成分质量浓度的线性范围分别为2.325~93μg/mL(r=0.999 9)、5.125~205μg/mL(r=0.999 9)、1.150~46μg/mL(r=0.999 3)、2.625~105μg/mL(r=0.999 9)、4.725~189μg/mL(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3%;加样回收率分别为99.78%~106.13%(RSD=2.33%,n=6)、95.07%~103.32%(RSD=2.72%,n=6)、97.17%~105.43%(RSD=2.98%,n=6)、95.52%~101.33%(RSD=2.46%,n=6)、99.42%~105.56%(RSD=2.34%,n=6)。异荭草苷相对于新绿原酸、绿原酸、荭草苷、异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷的相对校正因子分别为0.731、0.805、0.821、0.590;一测多评法测得5种成分的含量分别为0.828~1.123、2.379~3.118、0.281~0.880、1.039~1.393、2.121~3.209 mg/g,外标法测得的含量分别为0.803~1.099、2.345~3.085、0.269~0.872、1.039~1.393、2.113~3.201 mg/g;两种方法测定结果比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:所建质量标准简便、快速,可用于三叶青藤叶配方颗粒的质量控制;所建一测多评法准确、高效,可用于同时测定三叶青藤叶配方颗粒中5种有效成分的含量。

闽产三叶青地上部分抗炎提取物的急性毒性研究

目的观察闽产三叶青地上部分抗炎提取物的小鼠急性毒性反应,初步评价其用药安全性。方法取昆明小鼠60只,雌雄各半,按体质量随机分为各给药组及空白组;给药组按0.3mL/10g最大给药体积,以0.75g/mL闽产三叶青地上部分抗炎提取物(THAA)的最大浓度药液、0.67g/mL闽产三叶青粗提物(粗提物)的最大浓度药液分组给药;空白组灌服0.3mL/10g蒸馏水。24h内灌胃给药3次,间隔8h,一次性口服灌胃给药,连续观察14d,观察其急性毒性症状谱,记录小鼠累计死亡数及小鼠体质量变化。结果 THAA、粗提物均无法得出半数致死量。观察期间各组小鼠未见中毒反应,无动物死亡;给药14d后解剖肉眼未见脏器异常;空白组与各给药组间的脏器指数评价及小鼠体质量变化比较,差别无统计学意义(P<0.05)。结论 THAA及粗提物的小鼠灌胃给药最大耐受剂量分别为90.0,80.4g·kg^(-1)·d^(-1),分别相当于临床60kg人每公斤体质量日用量的360.0倍及321.6倍。THAA及THAA粗提物口服毒性小,临床剂量下用药安全可靠。

薏苡仁油的质量分析

目的建立薏苡仁油的总酯量测定和薄层色谱鉴别以及气相色谱含量测定法。方法采用容量滴定法测定薏苡仁油的总酯量;采用薄层色谱法鉴别薏苡仁油中的特征成分;采用气相色谱法,经油酸和亚油酸经衍生化处理,以水杨酸甲酯为内标物按内标法计算油酸及亚油酸含量。结果薏苡仁油中总酯量以甘油三酯计,均不低于95%;薄层色谱鉴别斑点清晰,专属性强;气相色谱法定量分析油酸甲酯在0.054 4-1.087 2mg/mL范围内呈良好的线性关系,平均回收率为97.92%（RSD=1.24%,n=6）,亚油酸甲酯在0.041 5-1.050 8mg/mL范围内呈良好的线性关系,平均回收率为100.4%（RSD=2.23%,n=6）,3批薏苡仁油中油酸含量分别为59.59%,58.29%和58.67%,亚油酸含量分别为25.17%,24.31%和24.77%。结论建立的薏苡仁油总酯量测定法、薄层色谱鉴别法及气相色谱（内标法）含量测定方法操作简便,结果准确,可有效用于薏苡仁油的质量控制。

顶空气相色谱法测定闽产三叶青地上部分抗炎镇痛提取物中大孔吸附树脂有机残留量

目的：建立闽产三叶青地上部分抗炎镇痛提取物中大孔吸附树脂有机残留量的测定方法。方法：采用顶空气相色谱法,DB-WAX石英毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）,程序升温,FID检测器,不分流进样,外标法测定抗炎镇痛提取物中正己烷、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯6种有机溶剂残留量。结果：各有机残留物峰面积与浓度间均呈良好的线性关系（r=0.9973~0.9996）,精密度RSD均小于10.0%,平均回收率均符合要求,各组分检出量均符合规定。结论：该法准确度、精密度和重复性良好,可用于闽产三叶青地上部分抗炎镇痛提取物中大孔吸附树脂有机残留量的控制。

闽产薏苡种皮与薏苡仁的化学成分分析

目的对闽产薏苡种皮进行化学成分预实验,比较其与薏苡仁的化学成分异同。方法用系统预试法合薄层色谱分析,比较薏苡种皮与薏苡仁的水提取液、乙醇提取液、石油醚提取液中的化学成分。结果薏苡种皮与薏苡仁主要化学成分类似,含有油脂、酚类、蛋白质、多糖、内酯、有机酸、黄酮类等化学成分。结论通过分析闽产薏苡种皮的主要成分,可为薏苡种皮的开发利用提供实验依据。

百花含片的急性毒性试验

百花含片系由中药药对百合LilimubrownieFE．Brownvar．viridulumBaker及款冬花Tussilagofar。faraL．制成的中药复方制剂，具有润肺止咳功效．为评价百花含片的安全性，本实验依据中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则，采用最大给药量试验法，即通过最大给药浓度及最大小鼠灌胃体积给药，观察小鼠的急性毒性反应，评价百花含片的口服用药安全性。

鹅不食草油的薄层色谱鉴别及气相色谱含量测定

目的建立鹅不食草油的质量控制方法。方法用薄层色谱法鉴别鹅不食草油,气相色谱内标法测定鹅不食草油中的乙酸菊烯酯及麝香草酚含量。程序升温:70℃,5℃/min升至160℃,再以3℃/min升至180℃,再以8℃/min升至240℃,保持10 min。结果鹅不食草油供试品色谱在与乙酸菊烯酯、麝香草酚对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;乙酸菊烯酯、麝香草酚在0.1305~1.044 mg/m L和0.0630~0.5040 mg/m L范围内线性关系良好,标准曲线分别为Y=7.776X-3.1×10^(-2)r=0.9997,Y=9.595X-2.1×10^(-2) r=0.9994;平均回收率分别为101.4%、100.9%。结论建立的鹅不食草油薄层色谱鉴别法及气相色谱含量测定法,准确度、重复性好,可为鹅不食草油的后续开发利用提供质量控制依据。

三叶青地上部分总黄酮提取物制备工艺优化研究

目的优化三叶青地上部分总黄酮提取物(THAA)制备工艺。方法以三叶青地上部分总黄酮含量为评价指标,通过单因素试验结合正交试验法,采用醇提取法,考察溶剂乙醇的浓度、料液比、提取时间,优化THAA提取工艺;采用大孔吸附树脂法,考察树脂种类、洗脱溶剂种类、上样量等条件,优化THAA纯化工艺。结果优化后THAA最佳制备工艺为,三叶青藤叶粗粉按料液比1∶25,用60%乙醇回流提取3次,每次2 h,合并提取液,浓缩干燥,得THAA粗粉;采用HPD-100树脂,径高比1∶8装柱,配制3 mg/mL THAA上样液(稀盐酸调pH=3),上样流速2 BV/h,先4 BV水冲洗,再用40%乙醇为洗脱剂,0.5~2.0 BV洗脱,收集洗脱液,浓缩干燥,即得棕黄色THAA粉末。结论最佳工艺制备的THAA总黄酮含量高于60%,且工艺简单、稳定,适用于三叶青地上部分总黄酮提取物制备,为THAA药效物质基础及制剂研究奠定质量稳定的原料药基础。

三叶青地上部分抗炎提取物固体纳米晶肠吸收动力学研究

目的:探究三叶青地上部分抗炎提取物(THAA)固体纳米晶肠吸收动力学特性。方法:采用超高效液相色谱-质谱联用技术,CORTECS^(TM)UPLC-C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.6μm),乙腈(A)-水(含0.1%甲酸,5%甲醇)(B)梯度洗脱,建立同时测定大鼠在体肠灌流液中THAA固体纳米晶9个特征效应组分的定量分析方法。以大鼠在体单向肠灌流模型,考察比较THAA固体纳米晶、原料、普通颗粒剂中特征效应组分群在大鼠不同肠段的累积吸收量、最佳吸收部位及可能的转运机制。结果:大鼠在体肠灌流液中效应组分群的定量分析方法精密度及准确度良好,可用于肠吸收动力学研究;固体纳米晶保留了THAA效应组分群的肠吸收特性,十二指肠、回肠为最佳吸收部位;新绿原酸、绿原酸的肠吸收机制可能是促进扩散过程;异荭草苷-2’-O-鼠李糖苷、牡荆苷-2’-O-鼠李糖苷、异牡荆苷-2’-O-鼠李糖苷可能是被动吸收过程;荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷在高浓度时吸收可能存在饱和性抑制现象,存在被动吸收过程及主动转运和易化扩散。固体纳米晶组效应组分群在各肠段的表观吸收系数(P_(app))、吸收速率常数(K_(a))、累积吸收百分比(P_(%))均显著高于普通颗粒剂组及原料组(P均<0.05);肠吸收效率由高至低的顺序为THAA固体纳米晶、普通颗粒剂、原料。结论:固体纳米晶递药系统因粒子纳米化而显著提高了效应组分群在不同肠段及不同浓度水平条件下的肠吸收效率,适用于难溶性中药有效部位口服吸收的改善。

闽产三叶青地上部分提取物体内抗炎镇痛作用研究

目的研究闽产三叶青地上部分提取物体内抗炎镇痛作用。方法分别采用低、中、高剂量的闽产三叶青地上部分提取物,抗炎作用实验以二甲苯致小鼠耳肿胀急性炎症模型并以醋酸泼尼松为阳性药、角叉菜胶致大鼠足肿胀急性炎症模型并以醋酸地塞米松为阳性药、大鼠棉球肉芽组织增生慢性炎症模型并以醋酸地塞米松为阳性药,镇痛作用实验以化学刺激法(扭体法)及热刺激法(热板法)并以罗通定为阳性药。结果与模型组比较,闽产三叶青地上部分提取物中、高剂量组及粗提物组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用(依次为P<0.05,P<0.01,P<0.05),耳肿胀抑制率分别为22.86%,38.79%,20.62%;提取物中、高剂量组及粗提物组对角叉菜胶致大鼠足肿胀急性炎症有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01);提取物低、中、高剂量组及粗提物组均能显著减少大鼠棉球肉芽组织增生慢性炎症模型中大鼠肉芽肿的重量(依次为P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01),其抑制率分别为28.12%,46.41%,59.58%,44.50%。与模型组比较,在60,90 min,提取物高剂量组能有效提高小鼠的痛阈值延长率(P<0.05,P<0.01),痛阈值延长率最高达65.58%;提取物中、高剂量组及粗提物组能有效抑制醋酸致痛的小鼠扭体次数(依次为P<0.05,P<0.01,P<0.05),小鼠扭体潜伏期明显延长(依次为P<0.05,P<0.01,P<0.05),扭体次数明显减少(依次为P<0.05,P<0.01,P<0.05),镇痛抑制率最高达51.80%。结论闽产三叶青地上部分提取物具有明显的体内抗炎镇痛作用。

一测多评法同时测定玳玳果黄酮滴丸中4个活性成分的含量

目的：建立一测多评法同时测定玳玳果黄酮滴丸中活性成分柚皮苷、新橙皮苷、橙皮内酯水合物及枳属苷的含量。方法：采用高效液相色谱法,使用250-4 lichrocart C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈（A）-0.2%醋酸水溶液（B）,线性梯度洗脱（0-10 min,22%A;10-20 min,22%A→35%A;20-25 min,35%A→48%A;25-30 min,48%A→22%A）,流速1.0 m L·min-1,检测波长284 nm,柱温25℃,进样量20μL。柚皮苷、新橙皮苷、橙皮内酯水合物及枳属苷的色谱峰分离度R〉1.5,理论塔板数按柚皮苷计〉3 000。建立测定代表性成分柚皮苷含量并以其为内参物,通过柚皮苷与新橙皮苷、橙皮内酯水合物和枳属苷的相对校正因子计算新橙皮苷、橙皮内酯水合物和枳属苷含量的一测多评法,实现多指标成分的同步测定;同时与外标法分别测定玳玳果黄酮滴丸上述4个成分含量的结果比较。结果：柚皮苷质量浓度在119.40-477.60μg·m L-1、新橙皮苷质量浓度在122.20-488.80μg·m L-1、橙皮内酯水合物质量浓度在7.62-22.86μg·m L-1、枳属苷质量浓度在3.00-21.00μg·m L-1范围内线性关系良好;柚皮苷、新橙皮苷、橙皮内酯水合物、枳属苷平均加样回收率（n=3）分别为98.67%（RSD=1.5%）、98.20%（RSD=0.50%）、101.9%（RSD=1.7%）、100.9%（RSD=0.35%）;柚皮苷与新橙皮苷、橙皮内酯水合物、枳属苷的相对校正因子分别为1.153、0.434、0.893,RSD（n=6）分别为2.7%、3.1%、1.2%;外标法与一测多评法含量测定结果无显著性差异。结论：以柚皮苷为内参物,利用相对校正因子一测多评法同时测定玳玳果黄酮滴丸活性成分柚皮苷、新橙皮苷、橙皮内酯水合物与枳属苷含量的结果准确,为以中药有效部位为原料制备的中药制剂实现多指标成分群质量控制评价提供了可借鉴的方法。

玳玳果黄酮降脂滴丸大鼠体内口服生物利用度及药动学研究

目的建立UPLC-MS同时测定大鼠血浆中玳玳果黄酮降脂滴丸药效组分新橙皮苷和柚皮苷的定量分析方法,比较玳玳果黄酮降脂滴丸与玳玳果总黄酮降脂提取物在大鼠体内的药动学特性。方法采用UPLC-MS联用分析技术,测定大鼠血药浓度及拟合药-时曲线;大鼠分别灌胃给药玳玳果总黄酮降脂提取物、玳玳果黄酮降脂滴丸,分析比较其体内药动学过程,考察玳玳果黄酮降脂滴丸口服生物利用度的改善情况。结果药动学试验结果表明,含药血浆中新橙皮苷的ρ_(max)分别为(1.68±0.02)_(提取物)和(5.54±0.09_(滴丸)mg·L^(-1),柚皮苷的ρ_(max)分别为(1.50±0.05)提取物和(4.83±0.10_(滴丸)mg·L^(-1),玳玳果黄酮降脂滴丸的ρmax、AUC_(0-∞)显著高于玳玳果总黄酮降脂提取物(P<0.05);滴丸的MRT、t_(1/2)相比于玳玳果总黄酮降脂提取物明显缩短;以玳玳果总黄酮降脂提取物为参比,滴丸中新橙皮苷和柚皮苷的相对生物利用度分别提高了278.52%和258.59%。结论玳玳果黄酮降脂滴丸明显改善了玳玳果总黄酮降脂提取物中药效成分新橙皮苷和柚皮苷的口服生物利用度。

基于特征图谱表征的玳玳黄酮滴丸组分群同步释药特性评价

目的基于特征图谱整体性表征中药组分群的优势,研究玳玳黄酮滴丸药效组分群的体外溶出行为,评价组分群的同步释药情况。方法建立HPLC特征图谱法及特征活性成分测定法,并采用转篮法评价玳玳黄酮滴丸组分群在4种不同p H值溶出介质(p H 1.2的盐酸溶液、p H 4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液、p H 6.8的磷酸盐缓冲液和蒸馏水)中的溶出度及释药特性,分别运用单指数方程模型、威布尔方程模型、对数分布方程模型拟合溶出曲线。结果玳玳黄酮滴丸特征图谱中的9个共有峰成分溶出曲线的相似因子(f2)均大于50,且特征药效成分新橙皮苷及柚皮苷溶出曲线的f2为94.86,表明玳玳黄酮滴丸组分群具有相似的溶出曲线及同步释药特性,特征图谱的9个共有峰活性成分组分群较符合威布尔方程模型的溶出机制。结论所建立的基于特征图谱评价中药有效部位制备的玳玳黄酮滴丸组分群的溶出及同步释药特性的方法可行,为提高其内在质量评价奠定了实验基础。

玳玳果黄酮降脂滴丸的肠吸收动力学特性

目的:考察玳玳果黄酮降脂滴丸的肠吸收特性并探讨其作用机制。方法:采用大鼠外翻肠囊模型,建立同时测定大鼠肠吸收液中玳玳果黄酮降脂滴丸特征药效成分新橙皮苷和柚皮苷含量的液-质联用(UPLC-MS)分析法,比较玳玳果黄酮降脂滴丸与原料玳玳果黄酮降脂提取物在大鼠不同肠段的累积吸收量,分析不同质量浓度大鼠空肠段的吸收过程,探讨其肠吸收部位及机制。结果:玳玳果黄酮降脂滴丸特征药效成分新橙皮苷和柚皮苷90 min时的累积吸收量由多到少依次是空肠、十二指肠、回肠和结肠;玳玳果黄酮降脂滴丸在高、中、低剂量下空肠的累积吸收量随时间的增加而增加,相关系数r>0.95,且随着药液质量浓度的增加新橙皮苷和柚皮苷的Ka均增加,符合一级药动学过程;在等剂量给药下,玳玳果黄酮降脂滴丸中新橙皮苷和柚皮苷的累积吸收量约是玳玳果黄酮降脂提取物的1.6倍。结论:玳玳果黄酮降脂滴丸在全肠道均有吸收,小肠的上中段为最佳吸收部位,新橙皮苷和柚皮苷吸收可能为被动吸收循环入体,制成的玳玳果黄酮降脂滴丸可显著改善提取物在肠道的吸收,提高其口服生物利用度。

UPLC-MS法研究薏苡仁油纳米粒离体肠吸收机制及特性

目的:考察薏苡仁油纳米粒在大鼠小肠的吸收特性,探讨薏苡仁油纳米粒的吸收部位及吸收机制。方法:采用大鼠离体外翻肠囊模型,以莪术醇为内标,薏苡仁油纳米粒药效特征成分甘油三油酸酯为评价指标,超高效液相色谱-质谱联用分析法测定大鼠肠吸收液中甘油三油酸酯的浓度,并比较在相同质量浓度下薏苡仁油原料、薏苡仁油纳米粒在大鼠十二指肠、空肠、回肠和结肠等不同肠段的累积吸收量,以及不同给药剂量下大鼠空肠的吸收情况,探讨薏苡仁油纳米粒的吸收机制。结果:薏苡仁油纳米粒中特征成分甘油三油酸酯在不同肠段中90 min时的累积吸收量按十二指肠、空肠、回肠、结肠依次下降,除回肠与结肠两者之间以外,均存在显著性差异(P<0.05);在高、中、低3种不同给药剂量条件下,在空肠段的吸收随着时间的增加而增加,以肠囊内甘油三油酸酯浓度的对数值lnC对取样时间t做线性回归,相关系数r大于0.990,表现出一级吸收动力学过程,吸收速率常数(K_a)均随药物剂量的增加而增加;在相同剂量下,薏苡仁油纳米粒特征成分在大鼠空肠90 min的累积吸收量是薏苡仁油原料的1.1倍。结论:大鼠小肠上中段是薏苡仁油纳米粒的最佳吸收部位,为被动吸收,其吸收呈一级动力学过程;与薏苡仁油原料相比,薏苡仁油纳米粒可明显改善薏苡仁油甘油三油酸酯的肠吸收。

三叶青地上部分抗炎提取物效应组分群不同生理状态在体肠吸收动力学及转运机制研究

目的:考察三叶青地上部分抗炎提取物(THAA)在不同生理状态大鼠体内的吸收特性和转运机制。方法:采用大鼠在体肠单向灌流模型,建立同时测定THAA效应组分群绿原酸,荭草苷,异荭草苷,异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷,牡荆苷,异牡荆苷,牡荆苷-2″-O-鼠李糖苷7个组分含量的液-质联用(UPLC-MS/MS)法,考察比较THAA效应组分群在不同生理状态大鼠不同肠段的累积吸收量,探讨其最佳吸收部位及转运机制,同时选择吸收较好的肠段,考察P-gp外排转运蛋白对THAA肠吸收的影响。结果:正常生理状态,荭草苷、异荭草苷、异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷、牡荆苷、异牡荆苷、牡荆苷-2″-O-鼠李糖苷6个组分在各肠段吸收顺序为十二指肠>回肠>空肠>结肠,其中异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷、牡荆苷-2″-O-鼠李糖苷在十二指肠及回肠吸收更好(Papp均大于或等于0.2×10-4cm·s-1);绿原酸各肠段吸收顺序为回肠≥十二指肠>空肠>结肠,不过吸收均相对较差(Papp均小于0.2×10-4cm·s-1);同一肠段中各组分的吸收均无显著性差异(P>0.05)。炎症病理状态与正常组比较,THAA效应组分群在各肠段的吸收均有增加;其中荭草苷、异荭草苷、异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷、牡荆苷-2″-O-鼠李糖苷在十二指肠及结肠的吸收显著增加;绿原酸、牡荆苷、异牡荆苷在各肠段的吸收略有提高;效应组分群在各肠段的吸收顺序与正常组无显著性差异(P>0.05)。荭草苷等6个组分肠道吸收受外排转运蛋白P-gp影响显著,炎症病理状态下影响更为明显;绿原酸可能不是P-gp的底物,但在炎症病理状态时,可使其吸收参数Papp、Ka、P%增大,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:小肠中上段是THAA效应组分群的主要吸收部位;荭草苷等6个主要特征效应组分可能是P-gp的底物,其肠吸收存在饱和性抑制现象,在体内的吸收机制可能不仅为单纯的被动吸收,还存在主动转运和易化扩散等吸收特征;其中绿原酸在肠道中的吸收可能为促进扩散式。炎症病理状态下,各组分所表现的肠吸收动力学特性及机制与正常生理状态相似,不过肠吸收Papp、Ka、P%均有一定增加,提示炎症病理状态可能因机体内的菌群发生一定变化、因应激促进效应组分群吸收增加而使转运过程产生变化。

三叶青地上部分抗炎提取物质量控制研究

目的建立三叶青地上部分抗炎提取物(anti-inflammatory extracts of Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg’s aerial part,THAA)质量控制方法。方法采用薄层色谱法鉴别THAA;采用比色法测定THAA总黄酮含量;建立HPLC同时测定THAA 7个效应组分含量,并在此基础上建立了以异荭草苷为内参物,同步测定7个效应组分的HPLC一测多评法。结果6批THAA供试品色谱,在与三叶青地上部分对照药材及混合对照品色谱相应位置上,显相同颜色的荧光斑点,各组分分离良好;建立的比色法在9.63~57.79μg·mL^-1内呈良好的线性关系,回归方程为A=1.120×10^-2C-2.400×10^-3,r=0.9995,3批THAA总黄酮平均含量为60.02%~60.32%。HPLC测得THAA中绿原酸、荭草苷、异荭草苷、异荭草苷-2’-O-鼠李糖苷、牡荆苷、异牡荆苷、牡荆苷-2’’-O-鼠李糖苷的平均含量分别为21.64%,8.04%,6.61%,19.51%,2.03%,1.59%,4.03%;一测多评法同时测定THAA中7个抗炎效应组分含量与外标法分别测定的含量结果无显著性差异。结论所建立的薄层色谱鉴别法,总黄酮的含量测定法以及7个效应组分HPLC含量测定法及一测多评法,可为THAA内在质量控制提供参考。

三叶青地上部分抗炎提取物效应组分群不同生理状态体内组织分布规律及特性研究

研究采用UPLC-MS/MS技术,以正负离子切换,多反应监测模式(MRM)分别同时测定正常生理状态与炎症病理模型大鼠灌胃给药三叶青地上部分抗炎提取物(THAA)后组织中7个抗炎效应组分含量变化,比较不同生理状态下抗炎效应组分群组织分布差异,探讨THAA效应组分群在机体组织器官的分布规律及特性。研究发现,在正常大鼠及炎症病理模型大鼠中,7个效应组分在心、脑、小肠、胃4个脏器组织中均具有较大的药-时曲线下面积(AUC),提示三叶青地上部分抗炎提取物中效应组分群均能透过血脑屏障,且在胃肠道分布较多,推断胃肠道重吸收可能是药物血液分布药-时曲线出现双峰现象的成因之一;与正常大鼠相比,三叶青地上部分抗炎提取物效应组分群在炎症病理模型大鼠的心、脑、小肠、胃、肝、脾、肺、肾、肌肉中,均具有更高的AUC;其中效应组分群在心、脑、小肠、胃中分布较多,提示在病理状态下,机体内脏器组织与三叶青效应组分的结合力可能发生改变且缔合增强,心、脑、小肠、胃可能是THAA在机体内产生抗炎作用的靶效组织;不同生理状态大鼠,THAA效应组分群在各脏器组织中的滞留时间均较短,且相差不大,提示各效应组分在体内均无蓄积作用,炎症病理状态并不影响效应组分群在体内的起效时间。该研究为阐明三叶青地上部分抗炎提取物在机体内靶效组织分布转运规律及特性并进一步指导临床应用提供了实验基础。

鹅不食草油鼻用微乳温敏凝胶释药系统鼻黏膜刺激性及主要脏器影响研究

目的考察鹅不食草油鼻用微乳温敏凝胶剂对大鼠鼻腔黏膜的刺激作用及主要脏器的形态学变化。方法大鼠随机分成空白对照组、空白微乳温敏凝胶组及鹅不食草油鼻用微乳温敏凝胶组,考察大鼠鼻腔给药后鼻黏膜及主要脏器形态学结构变化,评价鹅不食草油鼻用微乳温敏凝胶的初步安全性。结果大鼠鼻黏膜组织切片显示各组的鼻中隔软骨上均有完整纤毛和正常的黏膜细胞存在,未见明显的血管充血现象,也均未见明显的黏膜、组织细胞坏死、脱落及出血现象;主要脏器组织切片图结构显示大鼠鼻腔给药后与空白对照组及空白微乳温敏凝胶组一样均未见组织细胞结构病变、水肿、坏死等变化。结论鹅不食草油鼻用微乳温敏凝胶释药系统对大鼠鼻黏膜无明显刺激性,对主要脏器未见明显损伤,提示其应用具有用药的安全性。

三叶青地上部分抗炎提取物固体纳米晶生物利用度及药动学研究

目的:建立同时测定大鼠血浆中三叶青地上部分抗炎提取物(THAA)9个效应组分的超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS/MS)定量分析方法,评价THAA固体纳米晶血药浓度、药动学特性及口服生物利用度。方法:采用UPLC-MS/MS,CORTECS^(TM) UPLC-C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm),流动相为乙腈(A)-水(含0.1%甲酸,5%甲醇)(B),梯度洗脱,建立同时测定大鼠血浆中THAA固体纳米晶主要效应组分新绿原酸、绿原酸、荭草苷、异荭草苷、异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷、牡荆苷、牡荆苷2′-O-鼠李糖苷、异牡荆苷、异牡荆苷2′-O-鼠李糖苷血药浓度定量分析方法,考察比较大鼠分别灌胃给药THAA固体纳米晶、THAA原料、THAA普通颗粒剂后的血药浓度、药动学参数及口服生物利用度。结果:与灌胃THAA原料或普通颗粒剂相比,灌胃THAA固体纳米晶后,9个效应组分的达峰时间t_(max)显著缩短;半衰期t_(1/2)分别是原料的1.06~5.36倍,颗粒剂的1.16~5.31倍;达峰浓度C_(max)分别是原料的1.74~2.69倍,颗粒剂的1.61~2.45倍;AUC_(0-∞)分别是原料的1.32~2.66倍,颗粒剂的1.18~2.52倍;相对生物利用度比原料提高了131.93%~266.06%,比颗粒剂提高了117.86%~251.55%,且均呈显著性差异(P<0.05)。结论:构建的THAA固体纳米晶使THAA效应组分群起效更快,血药浓度水平显著增加、维持时间更长,改善并提高了THAA效应组分群的口服生物利用度。