小干扰RNA抑制肝癌细胞株BEL7402 ICAM-1基因表达的研究

目的研究小干扰RNA(siRNA)抑制肝癌细胞系BEL7402基因ICAM-1表达的可行性。方法根据ICAM-1基因设计shRNA片断,构建pGenesil-1/ICAM-1表达载体,转染BEL7402细胞,实时定量PCR和免疫组织化学方法检测肝癌细胞中ICAM-1基因表达抑制情况。结果该实验已成功构建了针对I-CAM-1基因的pGenesil-1/ICAM-1质粒。实时定量PCR检测结果显示,BEL7402细胞经特异性siRNA作用后ICAM-1基因的表达受抑制,其Ct值由28.8降低到21.6,免疫组织化学结果显示:RNA干扰(RNAi)能特异而有效地抑制BEL7402细胞中ICAM-1基因的表达。结论构建的pGenesil-1/ICAM-1重组质粒能有效抑制ICAM-1基因在肝癌细胞株BEL7402中的表达,为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。

肝癌细胞与淋巴结细胞体外药敏试验的相关性研究

探讨肝癌患者淋巴结细胞与肿瘤细胞体外药敏试验的相关性。采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)体外药敏试验,检测了27例肝细胞癌患者淋巴结细胞和肿瘤细胞对10种临床常用化疗药物的敏感性。肝细胞癌患者淋巴结细胞与肿瘤细胞对其中10种化疗药的抑制率间呈正相关(r=0.803,P=0.0062)。肝细胞癌患者淋巴结细胞与其肿瘤细胞对化疗药物的敏感性具有良好的正相关性,对临床选择化疗药物具有重要参考价值。

预测肝细胞癌术后复发转移的研究进展

肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，全球发病率、病死率都高。经过几十年的努力，肝癌术后生存率有明显提高，但在近十年来肝癌术后生存率已难以再提高，其主要原因是肝癌术后复发转移．因此研究肝癌切除术后复发防治措施是当前肝癌诊治的重点和难点。如何能在肝癌尚未出现复发转移前及早预测、诊断．并及时采取有效措施进行防治就成为能否进一步提高肝癌治疗效果的关键．

短发夹RNA对肝癌细胞细胞间粘附分子-1基因表达的影响

目的利用小片段干扰RNA(siRNA)在肝癌细胞内诱导RNA干扰(RNAi),抑制细胞间粘附分子-1(ICAM-1)基因表达,在体外进行RNAi对肝癌治疗的实验研究。方法根据ICAM-1基因设计shRNA片断,构建pGenesil-1/ICAM-1表达载体,转入E.coli菌,并用Lipofectamine tm2000转染HepG2细胞,通过MTT方法检测细胞活性状态,应用免疫组织化学的方法检测肝癌细胞中ICAM-1基因蛋白质表达抑制情况。结果本实验已成功构建了针对ICAM-1基因的pGenesil-1/ICAM-1质粒,免疫组织化学结果显示:RNA干扰(RNAi)能特异而有效地抑制HepG2细胞中ICAM-1基因的表达。结论构建的pGenesil-1/ICAM-1重组质粒能有效抑制ICAM-1基因在肝癌细胞株HepG2中的表达和瘤细胞增殖。

1号染色体扩增区MEF2D基因在肝细胞癌组织中的表达

目的探讨1号染色体扩增区基因MEF2D mRNA在正常肝组织、肝癌细胞系及肝细胞癌(HCC)与癌旁组织中的表达并探讨其意义。方法利用逆转录聚合酶链反应方法对正常肝组织、13个肝癌细胞系及40例HCC癌组织与癌旁组织中MEF2D mRNA的表达情况进行初步分析。结果MEF2D mRNA在正常肝组织、13个肝癌细胞系及40例HCC癌组织与癌旁组织中均为高表达,其表达阳性率分别为100.0%(2/2)、92.3%(12/13)、95.0%(38/40)和97.5%(39/40)。MEF2D在各组的表达阳性率与-βactin相类似,差异无统计意义,均为P>0.05。结论染色体扩增区域常常存潜在的癌基因,由于染色体具有不稳定性,1号染色体扩增区MEF2D基因非HCC发生的癌基因,MEF2D mRNA高表达与HCC发生、发展无相关性。

联合检测AFP与ICAM-1在原发性肝癌根治性切除术后复发的意义

目的测定血清甲胎蛋白(AFP)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在肝细胞肝癌(HCC)复发前后的变化,探讨其在复发监测中的价值。方法对手术后复发的44例肝癌患者的血AFP与ICAM-1水平进行回顾性研究分析。结果当确诊为肝癌复发时,AFP的水平明显低于术前(P<0.01),ICAM-1的水平低于术前(P<0.05);AFP阳性例数为23例,Ⅰ- CAM-1阳性例数为36例,ICAM-1的阳性率高于AFP(P<0.01),两者中任一项阳性病例共42例,高于ICAM-1(P<0.05)或AFP(P<0.05)单独的阳性率。结论肝癌复发早期诊断中,ICAM-1的意义大于AFP,尤其是AFP阴性的患者,两者联合检测的价值高于两者任何之一。

AFP、AFU和SA联合检测在肝细胞癌诊断中的价值

目的探索检测AFP、AFU、SA三种血清学指标以提高对肝细胞癌（HCC）检查的敏感性。方法对肝细胞癌患者50例，良性肝病患者50例，健康体检者62例进行3种血清学指标检测。结果肝细胞癌组3项指标与良性肝病组比较均有显著性差异（P〈0．01～0．05）。肝细胞癌组单项AFP、AFU、SA阳性检出率分别是66％、78％、72％．3项联合检测敏感性达96％。结论联合测定血清AFP、AFU、SA可提高肝细胞癌的血清学诊断灵敏度。

MHC Ⅱ类分子在肝细胞癌组织的细胞定位与术后复发关系的研究

目的研究MHCⅡ类分子在肝细胞癌(HCC)组织中的细胞定位,探讨MHCⅡ类分子在HCC组织中的表达与术后复发的关系。方法采用双重免疫组化方法对术后3年内复发和不复发HCC患者的原发瘤组织石蜡切片染色,随机选取视野检测MHCⅡ分子表达,然后统计分析。结果 MHCⅡ分子在术后3年内不复发HCC组织的表达高于1～3年内复发组织(38.5%vs 12.2%,P<0.05),MHCⅡ分子在HCC组织中主要表达在浸润的巨噬细胞、淋巴细胞、树突状细胞(dendritic cell,DC)等。MHCⅡ分子表达与HCC患者的性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤数目、有无包膜、门静脉癌栓、乙肝表面抗原、Edmonson分级等因素无明显相关(P>0.05)。结论 MHCⅡ分子与HCC的术后3年内是否复发风险密切相关,HCC组织中MHCⅡ分子高表达患者3年内不易复发。提示MHCⅡ分子可能可以作为HCC判断预后的分子指标之一。

HCC患者血清AFP、ICAM-1、乙肝标志物的表达变化及意义

目的探讨肝细胞癌(HCC)患者血清甲胎蛋白(AFP)、细胞间黏附分子(ICAM)-1与乙型肝炎病毒(HBV)感染的关系。方法采用化学发光免疫分析和ELISA法分别检测120例HCC患者(HCC组)、40例健康查体者(对照组)血清AFP、ICAM-1水平;采用ELISA法检测其五项HBV血清标志物水平。结果HCC组中107例HBV五项标志阳性,HBV总感染率为89.2%,以HBsAg、抗-HBe和抗-HBc-IgG阳性模式多见,占44.9%。HCC组AFP、ICAM-1水平明显高于对照组(P均<0.01)。AFP与ICAM-1水平呈正相关(r=0.627,P=0.0081)。结论HBV感染是HCC发生的一个重要的危险因素,AFP、ICAM-1联合检测有助于HCC的早期诊断。

凋亡抑制因子survivin在肝细胞肝癌的表达及临床意义

目的:探讨survivin mRNA在肝细胞肝癌(HCC)及癌旁组织的表达及意义。方法:用逆转录聚合酶链反应测定32例HCC癌组织及癌旁组织中survivin mRNA的表达。结果:Survivin mRNA在HCC组织中高度表达,阳性率为65.6%,癌旁组织中未见表达,Survivin mRNA的表达与HCC门静脉癌栓发生密切相关(P<0.05),而与其它指标无明显差异。结论:Survivin mRNA高表达可以作为判断HCC侵袭性和进展的一个潜在重要指标。

HCC选用敏感化疗药物行TACE治疗前后血清指标评价

【目的】探讨肝细胞肝癌(HCC)患者选用敏感化疗药物行肝癌经导管动脉灌注化疗栓塞术(TACE)治疗前后血清甲胎蛋白(AFP)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平的变化。【方法】采用化学发光免疫分析和酶联免疫法(ELISA)测定了30例HCC患者TACE治疗前后血清AFP、ICAM-1水平的变化,并与36名正常健康人作比较。【结果】TACE治疗前后HCC患者血清AFP、ICAM-1水平均非常显著地高于正常健康人(P均<0.01),TACE治疗后血清AFP、ICAM-1含量明显下降(P<0.01)。【结论】可根据药敏试验指导临床用药,血清AFP、ICAM-1水平对评价HCC患者行TACE治疗效果和观察病情具有一定的临床参考价值。

肝细胞癌血清血管内皮生长因子和细胞间粘附分子-1的测定及其临床意义

目的观察血清血管内皮生长因子(VEGF)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在肝细胞癌(HCC)手术前后的变化,探讨其在肝癌诊断中的价值。方法应用酶联免疫分析法测定56例HCC手术患者VEGF及ICAM-1水平,并与60例正常对照组进行比较。结果肝癌患者血清中VEGFI、CAM-1含量明显高于正常对照组(P<0.001),HCC患者手术后血清中VEGFI、CAM-1含量明显下降(P<0.01)。结论血清ICAM-1及VEGF水平的升高与HCC病情的发展,预后判断及疗效观察关系密切。

RNA干扰对肝癌细胞株SMMC7721中STAT3基因表达的抑制作用

目的:研究小片段干扰RNA(siRNA)对肝癌细胞系SMMC7721的化疗敏感性。方法:根据信号转录及转录活化因子3(STAT3)基因设计siRNA序列,通过经脂质体Lipo-fectamineTM2000以siRNA转染SMMC7721细胞。用实时定量PCR检测SMMC7721细胞中STAT3基因表达的抑制。将细胞以10μmol/L5-氟脲嘧啶(5-FU)作用后,用MTT比色法检测细胞生长的抑制率。结果:成功地构建针对STAT3基因的siRNA表达载体。实时定量PCR检测结果显示,SMMC7721细胞经特异性siRNA转染后,STAT3基因的表达受到抑制。RNA干扰(RNAi)能特异、有效地抑制SMMC7721细胞中STAT3基因的表达。MTT比色法检测结果显示,经siRNA作用后SMMC7721细胞抑制率明显增加。结论:设计合成的siRNA表达载体能有效抑制STAT3基因在肝癌细胞系SMMC7721中表达,增强其对化疗药物5-FU的敏感性,为肿瘤的生物学治疗提供了实验依据。

纯化及非纯化法培养肝癌细胞对化疗药物敏感性的测定

采用纯化法及非纯化法分别培养肝癌细胞,并进行7种化疗药物的敏感性测定。结果显示,7种化疗药物对纯化法培养肝癌细胞的平均抑制率均高于非纯化法培养的肝癌细胞,但同一种化疗药物对非纯化和纯化法培养的肝癌细胞抑制率相比,P均>0.05,两者呈正相关(r=0.715,P<0.01)。认为非纯化与纯化法所培养的肝癌细胞对化疗药物的敏感性测定结果都能为肝癌患者实施个体化化疗提供实验依据。

DNA甲基化和非编码RNA在肝细胞癌转移复发中的研究进展

转移和复发是影响肝细胞癌(肝癌)患者生存的主要因素,目前,肝癌的复发转移机制取得了一些进展,表观遗传学调控在DNA甲基化/羟甲基化修饰、组蛋白修饰、染色质重塑及非编码RNA表达等方面起重要作用,其中DNA甲基化和非编码RNA在肝癌转移复发中的作用研究较多,笔者简要综述DNA甲基化和非编码RNA在肝癌转移复发中的研究进展。

术前不同引流方式减黄对梗阻性黄疸大鼠部分肝切除术后肝功能和肝再生的影响

目的了解术前不同引流方式减黄对梗阻性黄疸(OJ)SD大鼠部分肝切除术(PH)术后肝功能和肝再生的影响。方法建立OJ不同引流方式减黄70%部分肝切除SD大鼠动物模型。并在术后0、1、2、4、12、24、48和72h收集大鼠血液及肝脏组织标本,测定血清TBIL、ALB、ALT、AST水平,计算残肝重量、肝再生率,免疫组化法观察肝脏组织PCNA表达,ELISA法检测血清TNF-α水平。结果 PH术后各时段内引流(ID)组和外引流(ED)组TBIL、ALT、AST水平较OJ组均偏低。各时段ID组ALB水平较OJ组、ED组偏高。72 h肝再生率ID组高于ED组,ED组高于OJ组。3组PCNA水平均于12 h明显升高,ID组于24 h达高峰,OJ组、ED组高峰延迟至48 h且峰值偏低。PH术后各组血清TNF-α水平均呈上升趋势,ID组于12 h达高峰,OJ组、ED组均于24 h达高峰,各时段OJ组、ED组血清TNF-α水平较ID组均偏高。结论内外引流术均可改善OJ所致的高胆红素血症和肝功能,并改善OJ大鼠残肝再生能力,但内引流效果更明显,且内引流术可以有效降低血清TNF-α水平。

肝硬化大鼠肝部分切除后IL-6/STAT3信号通路的变化

目的了解白细胞介素-6(IL-6)/信号转导及转录活化因子3(STAT3)信号通路在肝硬化大鼠肝部分切除后残肝再生障碍中的作用。方法采用皮下注射四氯化碳(CCl4)法建立肝硬化大鼠模型。正常大鼠为对照组。对照组及肝硬化组均行70%肝切除后,于不同的时间点收集残肝组织及血液标本,检测血清IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)及活性STAT3蛋白表达。结果肝切除后24 h,肝硬化组大鼠有丝分裂细胞数及PCNA阳性细胞数均明显小于对照组。肝切除后的前12 h,肝硬化组大鼠IL-6表达水平明显低于对照组。术后2 h,对照组残肝组织的活性STAT3蛋白远远高于肝硬化组。结论肝硬化肝切除术后早期IL-6的低表达导致STAT3蛋白活化不足是肝硬化大鼠肝部分切除术后残肝再生障碍的重要原因之一。

血清AFP临界值判断对肝癌诊断的影响

为探讨血清AFP诊断肝癌的合理临界值,本研究收集肝癌患者35例、正常对照者35例。血清AFP检测采用电化学发光法和酶联免疫吸附法(ELISA)定量,结果用t检验和χ2检验进行统计学分析。2种方法检测血清AFP水平显著相关,相关系数为0.978,检测值无显著性差异,P>0.05。二者ROC曲线下面积分别为0.890、0.880,说明血清AFP水平对肝癌诊断价值较高。按照约登指数最大原则确定血清AFP电化学发光法诊断肝癌的临界值为3.25μg/L,其敏感度为74.3%,特异度为94.3%,准确度为84.3%;ELISA法诊断肝癌的临界值为1.118μg/L,其敏感度为62.9%,特异度为100%,准确度为81.4%。而以目前常规临界值20μg/L来分析,则电化学发光法检测AFP诊断肝癌的敏感度仅为45.7%,特异度100%,准确度72.9%;ELISA法敏感度48.6%,特异度100%,准确度74.3%。因此合理降低临界值可有效提高血清AFP水平对肝癌的诊断价值。

STAT3、MMP-2在肝细胞癌中的临床意义

目的:探讨STAT3与MMP-2在肝细胞癌中的临床意义。方法:应用免疫组化法检测肝细胞癌组织及癌旁组织中STAT3与MMP-2的表达,分析STAT3、MMP-2与病理分化、TNM分期、生存期的关系。结果:STAT3与MMP-2在肝癌组织表达阳性率分别为71.4%、73.2%,癌旁组织中阳性率分别57.1%、80.4%,肝癌组织STAT3与癌旁组织中MMP-2的表达呈正相关(r=0.483,P<0.01)。结论:STAT3与MMP-2参与肝癌的发生发展过程,可作为评估肝细胞癌转移、侵袭及术后预后的指标。