豆蔻天竺葵的组织培养

以豆蔻天竺葵的叶片、茎段为外植体进行试管培养。结果表明,培养基MS+6-BA 1.0 mg.L-1+NAA 0.2 mg.L-1最适于叶片愈伤组织的诱导。茎段丛生芽诱导的最适培养基为MS+6-BA 1.0 mg.L-1+NAA 0.2mg.L-1,最佳芽增殖及继代培养基为MS+6-BA 1.0 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1,最佳生根培养基为MS+NAA 0.2mg.L-1。快繁途径可选择以茎段作为外植体,诱导获得丛生芽并进行增殖,最后获得大量再生植株。

石斛属RAPD分析及鉴定铁皮石斛的特异性引物设计

目的 :对石斛属植物亲缘关系进行分析 ,并设计一对能方便准确地鉴别铁皮石斛的特异性引物。方法 :用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对石斛属内 2 6个种和金石斛属的 1个种进行了基因组DNA多态性分析 ,并构建聚类树状图。根据筛选到的DNA片段序列 ,将Sangon18引物从 3’端延长至 2 0bp ,得到所要的特异性引物。结果和结论 :设计成的特异性引物能方便快捷地鉴别出铁皮石斛。此技术为药材的分子鉴定提供了一个新思路。

8种不同地域铁皮石斛农艺性状及多糖和纤维素分析

测定了8种不同地域铁皮石斛的株高、茎粗、叶面积和叶长宽比等农艺性状及其含水量、总多糖、水溶性多糖和纤维素含量.结果发现存在农艺性状的地域差异,其中雁荡品种和云南品种株形中等,茎较粗,多糖含量较高,是适于浙江省推广的品种之一,但浙江引种云南品种时必须大棚种植.

创建有效班级管理的支柱理念和具体方法

班级是学校教育和管理的基本单位,班级管理的支柱理念是调动学生参与班级管理的主动性和积极性,使学生成为学习、生活和班务管理的主人。基本方法是组建班委、强化沟通、制定公约、贯彻落实。

解决高中生学习物理知识存在困难的策略

常听师生反映高中物理难教、难学、考试难，这令很多教师感到头疼，下面我就高中生学习物理知识存在困难的教学策略进行探讨。

植物人工种子的概况

综述了近 2 0年来植物人工种子的研究概况。结合前人在这方面的研究 ,系统阐述了人工种子的概念、制作流程及研究的意义。提出了人工种子应解决的问题及相应对策 :体细胞胚的质量及大规模生产、人工种皮内膜包裹材料的选择、人工种子的防腐和贮藏运输等。展望了人工种子的开发利用前景。

靶向敲除问号钩端螺旋体鞭毛相关fliN基因及其突变株致病性变化

目的了解问号钩端螺旋体（简称钩体）鞭毛相关Ⅲ型分泌系统∥洲基因产物的致病性。方法构建基因打靶载体p2NIL fliN-amp，采用基于自杀质粒与染色体同源序列重组的靶基因敲除技术构建不表达FliN的问号钩体赖型56601株突变株，采用PCR、测序和Westernblot对FliN-突变株进行鉴定。采用动力试验、MTT、Fontana镀银染色法和流式细胞术，对FliN-突变株的迁移能力、培养物上清对小鼠单核-巨噬样细胞株J774A．1的细胞毒性、黏附及诱导J774A．1细胞凋亡能力的改变进行分析。结果PCR、测序和Westernblot结果均证实成功构建了FliN‘突变株，该突变株能在含100μg/ml氨苄青霉素的Korthof培养基中生长及繁殖。FliN。突变株在Korthof半固体培养基上菌落直径（2—3mm）明显小于野生株（6～8mm），表明该突变株动力消失。FliN一突变株培养物上清作用J774A．1细胞72h时虽显示有细胞毒性，但明显低于野生株（P〈0．05）。FliN。突变株作用J774A．1细胞60rain时的黏附率（25．5％）明显低于野生株（47．5％）（P〈0．05），其引起J774A．1细胞坏死和细胞凋亡率（30．6％和22．7％）也明显低于野生株（48．2％和35．2％）（P〈0．05）。结论．fliN基因产物与问号钩体黏附细胞、分泌毒力因子和诱导细胞凋亡密切相关。采用基于自杀质粒基因敲除技术可用于研究问号钩体靶基因产物的致病机制。

问号钩端螺旋体鞭毛蛋白相关蛋白FliH／I／Y／N基因原核表达和膜定位

目的克隆问号钩端螺旋体（简称钩体）鞭毛相关蛋白编码基因fliH、fliI、fliY和fliN并构建其原核表达系统，制备表达产物抗血清并了解其蛋白的定位。方法以苯酚-氯仿法提取的问号钩体黄疸出血群赖型赖株基因组DNA为模板，用PCR扩增全长fliH、fliI、fliY和fliN基因片段，T-A克隆后测序，继而构建上述目的基因克隆的原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图像分析系统检查重组蛋白rFliH、rFliI、rFliY和rFliN的表达情况，Ni-NTA亲和层析法提纯目的表达产物。皮下免疫家兔获得4种目的重组蛋白抗血清，用ELISA和Western blot分别检测抗血清效价并了解抗血清与相应抗原结合的能力。采用免疫电镜技术对fliH、fliI、fliY和fliN进行定位。结果PCR扩增获得大小分别为924、1365、1065和318 bp的全长fliH、fliI、fliY和fliN基因片段，与报道的序列比较，其核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％。所构建的原核表达系统均能有效地表达目的重组蛋白，其产量均约为20％。rFliH、rFliI、rFliY和rFliN蛋白免疫家兔后能产生抗体，其兔抗血清ELISA效价达到1：100000以上，并分别识别钩体相应重组蛋白和膜蛋白提取物而出现明显的Western杂交条带。fliH、fliI、fliY和fliN蛋白分布于问号钩体内膜、外膜或内外膜之间。结论本研究成功地构建了能高效表达问号钩体鞭毛相关蛋白fliH、fliI、fliY和fliN的原核表达系统，并获得了能有效识别上述蛋白抗原的高效价抗血清。鞭毛相关蛋白fliH、fliI、fliY和fliN是问号钩体内膜或外膜蛋白成分。