乳腺癌miRNAs表达谱检测及初步分析

目的制作哺乳动物micro RNAs(miRNAs)检测微阵列,筛选乳腺癌miRNAs表达谱并进行初步分析。方法利用已知的人及小鼠的miRNAs序列,设计了496条探针,制作miRNAs微阵列并验证其可靠性;培养乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A,分别抽提细胞总RNA,分离小分子RNA,经T4RNA连接酶荧光标记后与微阵列杂交,通过芯片扫描和数据分析,获得乳腺癌miRNAs表达谱。结果成功制作哺乳动物miRNAs微阵列,筛选获得57个乳腺癌相关miRNAs,其中,29个为低表达,28个为高表达。结论建立了哺乳动物miRNAs检测微阵列的技术平台,并筛选到乳腺癌miRNAs表达谱,为进一步研究其在乳腺癌发病机制中的作用打下基础。

小鼠肝脏特异的微RNA真核表达载体的构建及鉴定

目的 利用分子克隆技术 ,构建微RNA(microRNA ,miRNA)真核细胞载体。方法 人工合成小鼠肝脏特异的微RNA(miR 1 2 2 )前体基因序列 ,并添加酶切位点及 polyT转录终止序列 ,经退火处理后形成双链结构 ,插入小干涉RNA(smallin terferingRNA ,siRNA)表达载体 pAVU6 +2 7中 ,经酶切鉴定和测序证实后 ,构建成为miR 1 2 2真核表达载体 (pAVU6 +2 7 mir1 2 2 )。结果 合成的基因序列完全正确并成功克隆到真核表达载体pAVU6 +2 7上。结论 miR 1 2 2真核表达载体的构建 ,为进行真核细胞转染及miR 1 2

微RNA研究进展

近年来,相继发现一些具有调控功能的非编码微RNA,长度约22 nt,与基因表达、细胞周期乃至个体发育过程密切相关,可能对基因功能研究、人类疾病防治及生物进化探索有重要意义。

Hepcidin,调节铁代谢平衡的新型抗菌肽

Hepcidin是一种富含半胱氨酸的新型抗菌肽,在哺乳动物肝脏中特异表达,具有抗细菌和真菌等抗菌肽的特性。更重要的是,其在机体铁代谢平衡的调节中起关键作用,并参与多种铁代谢紊乱疾病的发病机制。对Hepcidin的进一步研究,有助于开发治疗铁代谢异常疾病的新药物。

加强医学英语教材建设 推进医学双语教学

医学双语教学是使医学生成为具竞争力的国际化人才的重要手段,而医学英语教学为通向成功的医学双语教学架设了不可或缺的桥梁。目前我国的医学英语教学成效尚不明显,其一大症结便是医学英语教材建设滞后。基于教材建设现状分析和教材编写实践而提出加强医学英语教材建设的对策,有望切实改善医学英语教学,推进医学双语教学。

医学院校研究生专业英语教学初探

通过对医学院校研究生专业英语教学现状进行分析,表明该阶段教学尚需进一步完善,并针对存在的问题提出建议与设想.

临床医学专业本科生医学英语必修课教学初探

近年来,全国各医学院校的医学英语必修课教学蓬勃开展,极大的提高了医学生的整体专业英语水平,有利于培养具有国际竞争力的医学人才。本文结合第三军医大学临床医学专业本科生医学英语必修课教学的实践,从课程的定位、课程的设置和安排、教材的选用、师资队伍的组成、教学的方法与手段等方面,就临床医学专业本科生医学英语必修课的教学进行探讨。

医学论文英文摘要常见误例分析

医学论文摘要包含了最重要的信息和资料，是整篇论文的缩影。英文摘要使作者面向更广泛的读者群，有利于提高资源共享率。如何写好英文摘要，是广大医学工作者普遍面临的课题。初学者在英文摘要写作中，常会犯一些典型的错误，类似的错误在某些公开发行的刊物上也屡见不鲜。影响了论文的质量。笔者选取了在工作及文献阅读中搜集的有代表性的误例，加以归类分析，以期为读者提供借鉴。提高英文摘要的写作水平。

一种新的凋亡抑制蛋白Livin在非小细胞肺癌组织中的表达

目的 探讨一种新的凋亡抑制蛋白 (inhibitorofapoptosisprotein ,IAP)Livin两种异构体Livinα和Livinβ在非小细胞肺癌 (NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC组织类型、放化治疗的关系。方法 采用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)检测NSCLC组织中Livinα和LivinβmRNA的表达 ,并用westernblot分析Livin蛋白的表达。 结果 4 8例NSCLC组织中Livin表达阳性率为 2 2 .9% ,其表达与NSCLC组织学类型相关 ,腺癌中Livin表达阳性率达 4 5 .5 % ,明显高于鳞癌和大细胞癌 (P <0 .0 1 ) ,而癌旁组织和良性疾病肺组织未检出阳性结果 ;Livin表达还与肿瘤治疗相关 ,放化治疗可明显诱导Livin表达 (P <0 .0 1 )。结论 Livin异构体在非小细胞肺癌组织中表达 ,作为肺腺癌的分子标志物 。

Livin异构体特异性siRNA表达载体的构建及其在SPC-A1细胞中的稳定表达

目的利用基因转染和RNA干涉(RNAinterference,RNAi)技术在肺腺癌SPC-A1细胞株中分别建立2种Livin异构体的基因沉默体系,旨在进一步体外观察两种异构体基因沉默诱导SPC-A1细胞凋亡效应。方法构建Livin两种异构体小干涉RNA(small interfering RNA,si RNA)表达载体;以电穿孔法转染SPC-A1细胞,经G418筛选获得稳定转染的细胞克隆;通过半定量RT-PCR和Western blot验证Livin异构体在SPC-A1细胞中的基因沉默效率,建立高效Livin异构体基因沉默体系。结果成功获得Livin异构体si RNA表达载体,经基因转染以及G418抗性筛选,成功建立Livin异构体特异基因沉默SPC-A1细胞克隆。结论RNAi能高效特异阻断两种Livin异构体表达,为进一步研究其不同的抗凋亡生物学功能,探讨其作为诱导肺癌细胞凋亡治疗分子靶点以及提高肺癌细胞放化疗敏感性打下基础。

Livin异构体特异性基因沉默诱导肺腺癌SPC-A1细胞凋亡

目的:利用基因转染和RNA干涉(RNAi)技术,在SPC-A1细胞中建立Livin异构体α和β特异的基因沉默体系,探讨其在诱导SPC-A1细胞凋亡效应中的不同作用及价值。方法:在肺腺癌SPC-A1细胞中稳定表达Livinα+β、Livinα和Livinβ特异性小干涉RNA(siRNA),观察SPC-A1细胞形态、增殖等生物学行为的改变,TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:Livinα+β、Livinα和Livinβ基因沉默后,SPC-A1细胞克隆形成能力较对照组显著下降(P<0.05);转染后SPC-A1细胞发生凋亡,TUNEL法显示细胞凋亡指数分别为(9.20±1.90)%、(6.75±1.20)%和(4.82±1.20)%,(流式细胞仪检测)细胞凋亡率分别为(7.48±1.30)%、(5.50±0.90)%和(4.16±0.70)%。结论:Livinα和β两种异构体均能作为诱导肺癌细胞凋亡的分子靶点,Livin基因沉默靶向诱导肺癌细胞凋亡可能作为手术、化疗、放疗等传统治疗的辅助手段。

基于基因芯片的乳腺癌干细胞miRNAs检测分析

目的利用流式细胞仪(FACS)细胞分选技术从乳腺癌细胞株MCF-7中分选乳腺癌干细胞,并利用基因芯片进行其miRNAs表达谱分析。方法利用已知的乳腺癌干细胞的表面分子标志(CD44+ESA+CD24-/low),以相应的荧光标记抗体对细胞加以标记,FACS细胞分选获得乳腺癌干细胞,NOD-SCID移植瘤实验进行干细胞功能鉴定;分别提取细胞总RNA以及小分子RNA,经荧光标记后与miRNAs基因芯片杂交,获得乳腺癌干细胞miRNAs表达谱。结果从MCF-7中分选到约1%的CD44+ESA+CD24-/low细胞,NOD-SCID移植瘤实验表明其具有干细胞特性,基因芯片杂交获得20个乳腺癌干细胞相关miRNAs,其中4个为低表达,16个为高表达。结论乳腺癌干细胞具有自身特征性miRNAs,为进一步从干细胞层面研究乳腺癌发病机制及靶向治疗打下基础。

RNA干涉分子机制研究进展

RNA干涉 (RNAinterference ,RNAi)是生物体内的一种通过双链RNA (dsRNA)来抵抗病毒入侵和抑制转座子活动的自然机制 .双链RNA与同源mRNA互补结合而使特定基因失活 ,这一过程已经在包括拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到揭示 .近来研究表明 ,2 1～ 2 5nt的小干涉RNA (smallinterferenceRNA ,siRNA)可介导哺乳动物细胞特异性基因沉默 .RNAi具有高效性和高度特异性 。

凋亡抑制蛋白Livin两种异构体真核表达载体的构建及表达鉴定

目的构建凋亡抑制蛋白Livin两种异构体(Livinα和β)真核细胞表达载体pcDNA3.1-Livinα和pcDNA3.1-Livinβ。方法利用分子克隆技术,首先设计合成扩增Livin基因异构体全长cDNA序列的特异性PCR引物,以肺腺癌SPC-A1细胞总RNA为模板,RT-PCR获得Livin基因异构体全长cDNA序列,TA克隆将Livin全长cDNA序列克隆到T载体上,用限制性内切酶HindⅢ和XbaⅠ双酶切取所需目的片段,然后将该片段插入真核表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,最后对产生的重组子进行双酶切、PCR鉴定,并经过测序证实后,构建成为Livin基因异构体表达载体(pcDNA3.1-Livin)。电穿孔法获得稳定表达Livinα和β的A549细胞克隆,Westernblot验证Livin蛋白在转染细胞中的表达情况。结果成功获得Livinα和Livinβ全长cDNA序列,并克隆到真核表达载体pcDNA3.1上;基因转染后,阳性细胞分别表达Livinα和β。结论Livin基因两种异构体真核表达载体的构建及在细胞中的表达鉴定,为进一步研究Livin异构体功能及在肺癌细胞中的抗凋亡效应奠定了基础。

实时定量PCR检测miR-373*、miR-200c在乳腺癌干细胞中的表达及其靶基因预测

目的分析miR-373*、miR-200c在乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells,BCSCs)和MCF-7乳腺癌细胞株中的差异表达。方法 Trizol法分别抽提乳腺癌干细胞和MCF-7细胞总RNA,实时定量PCR检测miRNAs表达,对表达差异显著的miRNAs进行潜在靶基因预测。结果 miR-373*在乳腺癌干细胞中较MCF-7细胞高表达(6.684±0.548),而miR-200c在乳腺癌干细胞中较MCF-7细胞低表达(0.345±0.031)。通过软件分析预测,miR-373*与TP53INP2、CASP8、EIF4A1、EEF1A1等基因均具有可能靶位点,miR-200c与TCF2、TDE2、SYVN1、PDCD10、RAP2C等基因均具有可能靶位点。结论 miR-373*在乳腺癌干细胞中高表达,可能是一个潜在的癌基因。miR-200c在乳腺癌干细胞中低表达,可能是一个潜在的抑癌基因。

小鼠肝脏特异的微RNA在HeLa细胞中的转染与表达

目的 观察miR 12 2在HeLa细胞内表达情况。方法 将构建的miR 12 2真核表达质粒pAVU6+ 2 7 mir12 2以电穿孔法转染HeLa细胞 ,经G418筛选获得稳定转染的细胞克隆 ,通过Northern杂交和点杂交验证miR 12 2在HeLa细胞中的表达。结果 阳性转染细胞与小鼠肝脏细胞Northern杂交及斑点杂交均出现放射自显影 ,而转染空质粒的HeLa细胞则无放射显影。结论 miR 12 2在HeLa细胞中获得正确表达。

MicroRNA调控造血干细胞发育

造血干细胞是目前研究最为深入的成体干细胞,是极富应用前景的研究领域,然而其维持自我更新以及多向分化潜能的分子机制尚不明.MicroRNA(miRNA)是一类崭新的调控性非编码小分子RNA,在监控生物体个体发育和细胞增殖、分化进程中起着重要作用.miRNA参与包括胚胎干细胞和多种成体干细胞的发育进程,人类造血干细胞及其发育过程中也存在特征性miRNA表达谱,参与调控造血干细胞发育进程,以miRNA为分子靶点的防治造血功能低下疾患的研究具有广阔的应用前景.

NF-κB参与小鼠β-防御素3基因急性时相表达的转录调节

目的 分析急性时相反应时调节小鼠 β 防御素 3基因表达的转录因子。 方法 通过腹腔注射外源性脂多糖(LPS)建立小鼠急性时相反应 ,经Northernblot方法检测mBD3mRNA在组织中的表达 ;EMSA和Southwesternblot分析细胞核蛋白中的转录因子。结果 内毒素注射后仅在肝脏组织中检测到mBD3mRNA ;肝脏细胞核蛋白中有与mBD3基因调节区特异DNA片段结合的转录因子 ,分子量在 ( 4 3 0～ 66 2 )× 10 3之间。结论 小鼠急性时相反应时NF κB参与 β 防御素

mmu-miR-294调控MMP3靶基因对LLC细胞侵袭迁移的影响

目的预测并验证小鼠mmu-miR-294调控的靶基因,探讨其在肺癌发生发展中的生物学功能。方法生物信息学预测mmu-miR-294可能调控的靶基因金属蛋白酶(MMP3),双荧光素酶检测验证mmu-miR-294调控MMP3的真实性;脂质体2000介导转染mmu-miR-294模拟物进入Lewis(LLC)细胞株,通过Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力的改变。结果重组质粒经XbaⅠ单酶切能获得约5 000 bp和100 bp的酶切片段,阳性克隆测序,双荧光素酶报告基因检测证明合成寡核苷酸链序列插入正确;脂质体2000介导转染mmu-miR-294模拟物,过表达实验组MMP3蛋白水平较对照组明显降低。转染mmu-miR-294模拟物后LLC细胞的侵袭迁移能力显著降低(P<0.01)。结论低表达mmu-miR-294有助于维持LLC的侵袭转移特性,增加其表达水平可以有效抑制LLC的侵袭迁移能力。mmu-miR-294可能通过调控其靶基因MMP3表达而发挥功能。

生物医学研究生英文科技论文写作课的合作教学模式探讨

随着跨国界交流的增加和生物医学领域的快速发展,用英文撰写和发表生物医学论文成为国际学术交流的重要途径。但对于母语为非英语的中国医务工作者而言,用英文撰写和发表论文并非易事。研究生作为中国科研团体中的新生力量,同样面临着撰写和发表英文论文的压力。为了缓解这种压力,英语教师和国际期刊编辑可以携手开展合作式英文科技论文写作课。他们之间优势互补的合作可以从源头上提高研究生英文科技论文撰写能力,从而推动中国生物医学的进步。