β-1,4-内切葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达研究

根据芽孢杆菌β-1,4-内切葡聚糖酶基因序列设计引物,以pHBM102为模板,扩增得到β-1,4-内切葡聚糖酶GluD基因片段,克隆至毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pHBM905上,获得重组毕赤酵母表达载体pHBM905D,将此质粒分别转化毕赤酵母GS115,KM71和SMD1168菌株,筛选获得GS115(pHBM905D),KM71(pHBM905D),和SMD1168(pHBM905D),平板诱导培养表明,GS115(pHBM905D)所产生的水解圈最大,酶活力最高.摇瓶诱导培养,表达β-1,4-内切葡聚糖酶,此酶的最适反应温度为65℃,最适反应pH值6.4,在诱导8 d后酶活力达到最高为0.185 8 U/mL.

β-1,4-内切葡聚糖酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

运用选择性培养基LBCMC从环境土样中分离得到一株能利用羧甲基纤维素的芽孢杆菌Bacillus sp.NW-2004 a,并运用“鸟枪”克隆法构建了其基因组文库,且从此基因组文库中筛选得到两个阳性克隆.对其中一阳性克隆中插入的DNA片段(命名为GLUD)进行序列测定,发现了一长度为2 502 bp的开放阅读框(ORF),可编码834个氨基酸.BLAST分析结果表明,该基因与Bacillus sp.KSM-S237来源的纤维素酶基因AB018420具86%相似性,所编码的多肽与Bacillus sp.KSM-64来源的β-1,4-内切葡聚糖酶具89%的相似性,故该基因是一新发现的β-1,4-内切葡聚糖酶基因.该序列已收录于Genebank,登录号AY663839.另外,以CpoI andNotI限制性内切酶双酶切衍生于质粒pGEX的大肠杆菌表达载体pHBM625,然后将经T4 DNA polym erase处理后的β-1,4-内切葡聚糖酶基因克隆至载体pHBM625中得到重组质粒pH-BM625G lu,最后通过平板检测及SDS-PAGE凝胶电泳,均检测到该基因在大肠杆菌XL10-G lod中的表达.

针对本科生实践创新能力培养的生物化学实验教学改革探索

实验教学是培养学生实践创新能力的重要环节。在生物化学实验教学中,我们以学生为中心,在验证型实验基础上,结合教师科研项目与大学生创新创业项目,将实验教学与科学研究有机融合,通过自主设计型实验项目的开展、线上线下相结合、优化评价体系等举措,着力培养学生的创新意识、自主学习和实践创新能力。同时通过改革探索,教学效果显著提升。

产葡萄糖异构酶菌株的筛选及酶学性质研究

以土壤为材料,经过初筛平板富集培养,分离纯化得到了能正常生长的28株细菌和35株放线菌;再分别进行液体发酵,用改进的硫酸-咔唑法测定胞内、外酶活,筛选出了一株产胞外葡萄糖异构酶活力最高的细菌株菌XJ-27.对该菌株进行形态特征和16S rDNA序列比对分析,并对其胞外葡萄糖异构酶进行了部分性质研究.结果表明:该菌株酶活力为242.1 U·mL^-1,属于芽孢杆菌属(Bacillus),70℃测得最适pH为7.0~7.8;在pH 7.4时其最适反应温度为70~80℃;Mg^2+和Co^2+对其酶活力有显著提高,Mg^2+的效果最明显.