生殖支原体GroEL蛋白的生物信息学分析、表达纯化及致炎分析

为了解生殖支原体(Mycoplasma genitalium,Mg)GroEL蛋白的致病机制,本研究运用生物信息学软件对MgGroEL蛋白结构和功能进行预测和分析,构建pET-28a-GroEL重组质粒,使用0.2 mmol/L IPTG诱导蛋白表达,通过Ni-亚氨基二乙酸(iminodicitic acid,IDA)柱亲和纯化获得Mg rGroEL蛋白。将浓度为2μg/mL的Mg rGroEL蛋白作用于人单核细胞白血病THP-1细胞,通过ELISA检测细胞上清液中炎症因子IL-1β和TNF-α的含量,使用全自动化学发光仪检测细胞上清液中炎症因子IL-6的含量,通过细胞免疫荧光和Western blotting观察NF-κB信号通路激活情况。结果表明,Mg GroEL蛋白是含有543个氨基酸的酸性带负电荷蛋白,相对分子质量为58.44 kDa,等电点为5.68,分子式为C_(2568)H_(4300)N_(700)O_(825)S_(8),为稳定的亲水性蛋白;二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主;MgGroEL蛋白存在12个B细胞优势抗原表位和10个T细胞优势抗原表位。与肺炎支原体、无乳支原体、关节炎支原体、猪肺炎支原体和牛支原体的GroEL蛋白高度同源;Mg rGroEL蛋白能激活THP-1细胞NF-κB信号通路并促进IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌。这些结果表明Mg GroEL具有较好的抗原性,能诱导宿主细胞发生炎症反应,本研究为进一步研究GroEL蛋白在Mg中的功能及其致病机制奠定了理论基础。