中国南方地区作物根结线虫种和小种的鉴定

对采自中国南方地区34种作物的根结线虫83个种群进行了单卵块纯化和培养,在形态学研究的基础上,结合利用全自动快速水平电泳系统测定了雌虫的酯酶和苹果酸脱氢酶,鉴定出南方根结线虫(Meloido-gyne incognita)、爪哇根结线虫(M.javanica)、花生根结线虫(M.arenaria)和番禺根结线虫(M.panyuensis)。其中南方根结线虫是最主要的根结线虫。鉴别寄主试验表明,南方根结线虫的优势小种是1号小种。

根结线虫食道腺细胞表达的基因及其应用潜力

根结线虫是国际公认的最为重要的植物病原线虫,研究其食道腺细胞表达的基因是了解其寄生性和致病性的基础。近年来国际上已从根结线虫食道腺细胞分离基因22个,其基因产物主要包括β-1,4内切葡聚糖酶、果胶酸裂解酶、分支酸变位酶、钙网蛋白、类毒液过敏蛋白等。本文对上述工作的研究进展作简要评述,并对今后的应用潜力进行了讨论。

根结线虫属一新种─—海南根结线虫

在海南省琼中县水稻根上，发现根结线虫属新种海南根结线虫Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅｈａｉｎａｎｅｎｓｉｓｓｐ．ｎｏｖ．（根结科Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｉｄａｅ）．该新种雌虫唇盘与中唇不形成典型的哑铃状结构；会阴花纹结构为卵圆形至圆形，线纹细密，平滑，背纹与腹纹相连，形成同心圆状，尾尖区花纹极细密，成波浪至锯齿状皱褶，且种内会阴花纹形态变异很小，雄虫中唇外缘有缺裂；侧区一般具４条侧线，具网纹饰。２龄幼虫体长，尾长和口针长分别为４８１．９８（４４２．００～５３６．６０）μｍ，６６．８２（５７．２０～７５．４０）μｍ和１２．８２（１０．４０～１５．１０）μｍ；尾渐细，尖削。雌虫酯酶Ｒ１＝０．３６，属ＶＳＩ表型。它主要寄生水稻和小麦。

万强对花生根结线虫发育的影响及防治效果

利用室内培养和盆栽试验的方法，研究了万强对花生根结线虫（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅａｒｅｎａｒｉａ）发育的影响。结果表明：万强对胚胎发育无明显影响，但能延缓孵化时间，减慢线虫胚后发育的速度，减低雌虫的比例。田间小区试验表明：万强有减少土中２龄幼虫数量的作用，并有显著的防病增产效果。增产幅度为１９．６６％～２４．８３％。

海南根结线虫个体发育的研究

详细描述了海南根结线虫胚胎发育和胚后发育各阶段的过程和形态变化。在平均温度２６℃时，完成胚胎发育需１４．５～１７．５ｄ；在平均温度２５．４℃时，完成胚后发育约需３０ｄ。上述实验结果，为在海南控制水稻根结线虫病。

益舒宝的加工及其效果测定

通过比较和筛选实验 ,总结出适合我国实际的益舒宝 10 %颗粒剂加工生产技术 ,产品价格大为降低 .该产品防治花生根结线虫病 (Meloidogynearenaria)的效果与进口益舒宝相当 .目前该杀线剂正被大量加工 。

哈蜜瓜根结线虫病的发生及其控制研究

1993～ 1994年通过对广东肇庆绿洲公司大棚温室调查 ,发现其基质栽培的哈蜜瓜存在根结线虫的严重危害情况 ,春瓜发病率高达 5 0 % ,病情指数达 0 8.夏瓜发病稍轻 .病原线虫鉴定为南方根结线虫〔Meloidogyneincognita (Kofold&White ,1919)Chitwood .1949〕 .杀线剂试验表明 :克线磷、溴甲烷、益舒宝均对哈蜜瓜根结线虫病有良好的控制效果 .其中 ,以克线磷的效果最好 ,持效期最长 .

胡萝卜肾形肾状线虫病的发生及药剂控制试验

从广东省番禺市胡萝卜根系及根际土分离到１ 种线虫，经鉴定为肾形肾状线虫Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｌｕｓ ｒｅｎｉｆｏｒｍｉｓ。该线虫在胡萝卜的生长期内，以１０～１１ 月份虫口密度最大，主要分布于０ ～１５ ｃｍ 土壤层。该线虫危害胡萝卜，是国内胡萝卜上的１ 种新病害。药剂试验表明供试的几种杀线剂均对肾形肾状线虫有较好的控制作用。

抑线3号种衣剂对花生根结线虫病的控制作用

网室盆栽和田间试验结果表明，种衣剂抑线３号能减少花生根结线虫（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅａｒｅｎａｒｉａ）对花生的侵染，减轻发病程度，并有明显的增产效果．使用剂量以３ｋｇ／１００ｋｇ种子为宜。如在播种时再用２２．５ｋｇ益舒宝（１０Ｇ）／１００ｈｍ￣２处理土壤，则防效明显提高．在推荐用量下，未见产生任何药害．

广东省和海南省象耳豆根结线虫的鉴定

运用线虫比较形态学、结合同工酶、mtDNA-PCR、rDNA-IGS-PCR技术,对采自中国广东和海南2个省的根结线虫进行鉴定。在海南省定安的木豆(Cajanus cajan)、海南省海口的木豆和番石榴(Psidium guajava)、广东省番禺的辣椒(Capsicum annuum)和南瓜(Cucurbita moschata)及广东省遂溪的豇豆(Vigna sinensis)上发现象有耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)。这是首次在海南省外发现象耳豆根结线虫,同时还发现该线虫的2个新寄主,即木豆和南瓜。

根结线虫种群的线粒体DNA分析

在同工酶和形态学鉴定的基础上, 利用引物#C2F3和#1108对42个根结线虫种群线粒体DNA(mtDNA)中的COII和LrRNA间区域进行特异性PCR扩增, 35个种群的扩增产物约为1. 7kb,其中29个是南方根结线虫, 6个是爪哇根结线虫; 3个花生根结线虫种群的扩增产物约为1. 1kb; 1个种群的扩增产物约为0. 7kb,为根结线虫属在中国的新记录种; 3个北方根结线虫种群的扩增产物约为0. 5kb。用单条2龄幼虫提取物作模板得到的结果与大量提取DNA作模板的结果相同。为了区分产生相同大小片段的南方根结线虫和爪哇根结线虫,用限制性内切酶HinfⅠ对扩增产物进行酶切,结果表明:所有供试的南方根结线虫都可以被HinfⅠ酶切,且产生约1. 3和0. 4kb的2个限制性片段;但供试的爪哇根结线虫种群不能被酶切。由此表明,利用mtDNA PCR及酶切实验可以作为快速而准确地鉴定常见根结线虫的方法。

松材线虫rDNA的测序和 PCR-SSCP分析

本文为克服形态鉴定的不足 ,用分子生物学的方法鉴别松材线虫。线虫核糖体 DNA(r DNA)的内部转录间隔区 (ITS1)区 (约 30 8bp)的测序结果显示 :松材线虫种内区别很小 ,不超过 1bp;拟松材线虫种内区别较大 ,最大达 7bp;这 2种线虫的种间区别为 32～ 39bp。根据以上测序结果 ,本文结合单条线虫 DNA的提取技术 ,对 14个松材线虫和拟松材线虫样本进行了单链构象多态性 (PCR-SSCP)分析 ,结果表明 PCR- SSCP分析技术可明确区分这 2种线虫 ,该技术可为单条松材线虫的鉴定提供一套灵敏而可靠的方法。

华南地区主要番茄品种对南方根结线虫的抗性评价

通过人工接种方式,对华南地区番茄主要栽培品种对优势根结线虫——南方根结线虫(Meloidogyne incog-nita)的抗性进行了评价。结果表明,广东栽培品种年丰、红宝石、新星、福安、粤红玉、穗丰、金丰、益丰、丰顺、大丰顺、满丰和法国品种SAINT PIERRE均高度感病;而法国品种PIERSOL VFN高度抗病,根结率为0。根据SAS8.0多重比较分析表明,在F0.01的水平上,品种PIERSOL VFN与其余品种之间对根结线虫的抗性均存在显著性差异,而其他12个品种间对根结线虫的抗性差异不显著。

不同光温条件对马铃薯繁殖根结线虫效果的影响

在沙培马铃薯条件下，分别比较不同温度、光照条件对根结线虫（Meloidogynespp．）在马铃薯上培养效果的影响。结果表明，温度对根结线虫的培养效果有较大的影响，南方根结线虫在马铃薯上繁殖的最适温度为24-28℃，12℃时，线虫仍可侵染，但发育十分缓慢，接种后49d调查还未能观察到线虫产卵；光照条件对根结线虫的培养效果影响无明显规律性。

旱稻孢囊线虫在广西的发生及其rDNA-ITS异质性分析

2011年,从广西龙胜梯田的水稻根系和稻田土壤中分离到一种孢囊线虫。该线虫形态特征与已报道的旱稻孢囊线虫（Heterodera elachista）相符,其rDNA-ITS序列与GenBank中旱稻孢囊线虫的rDNA-ITS序列相似性为97.7%~99.3%。rDNA-ITS分子发育树表明该线虫与旱稻孢囊线虫以100%的置信度及较小的遗传距离形成一个单系,据此将该线虫鉴定为旱稻孢囊线虫。进一步对本研究获得的10条旱稻孢囊线虫rDNA-ITS区序列及Tanha Maafi等报道的1条旱稻孢囊线虫rDNA-ITS序列（AF498391）的酶切位点进行分析,结果发现AluⅠ、AvaⅠ、MvaⅠ和RsaⅠ4个内切酶的酶切位点在11条序列中完全一致,而Bsh1236Ⅰ、BsuRⅠ和CfoⅠ3种酶的酶切位点存在变异,其中Bsh1236Ⅰ和BsuRⅠ有2种变异型,CfoⅠ则有3种变异型,表明旱稻孢囊线虫的rDNA-ITS序列存在DNA异质性。

松材线虫和拟松材线虫的PCR快速检测

利用PCR技术对松材线虫Bursaphelenchusxylophilus与拟松材线虫B .mucronatus的rDNA的ITS1区和5 8S区核甘酸序列扩增.根据松材线虫与拟松材线虫的ITS1序列区别,分别设计出松材线虫和拟松材线虫的特异性引物,实现了单条活的或FG(φ为4 %的甲醛)固定的松材线虫和拟松材线虫的快速检测.

番茄品种Mi基因对根结线虫抗性的检测

采用酶切扩增多态性序列（Cleaved amplified polymorphic sequences,CAPS）方法对国内市场上的26个番茄So-lanum lycopersicum品种进行Mi基因检测.结果表明,特璐丝、红丽、TRS-401、仙客1号和仙客5号5个品种含有纯合体Mi基因,其余品种均不含Mi基因.进一步用南方根结线虫Meloidogyne incognita和象耳豆根结线虫M.enter-olobii对这26个品种进行接种试验,计算根结率和根结指数.结果发现,南方根结线虫和象耳豆根结线虫侵染不含Mi基因的21个番茄品种的根结率为100%,根结指数为100;而含Mi基因的5个番茄品种对南方根结线虫的根结率为1%~5%,根结指数为0~4,而对象耳豆根结线虫的根结率为26.7%~45.6%,根结指数为56~64.表明含Mi基因的番茄高抗南方根结线虫,但对象耳豆根结线虫感病或比较感病.

爪哇根结线虫-β1,4-内切葡聚糖酶基因cDNA全长克隆和序列分析

以爪哇根结线虫为材料,根据同源序列法分别进行3′末端和5′末端的RACE,获得-β1,4-内切葡聚糖酶基因cDNA全长。此cDNA全长序列为1 675 bp,包括1 521 bp的完整ORF,编码一含506 aa的多肽。该基因命名为M j-eng3-,其推导蛋白的编码氨基酸与南方根结线虫的-β1,4-内切葡聚糖酶基因M I-ENG-1、M I-ENG-3和M I-ENG-4的同源性为95.3%、95.8%和85.3%,与另外5个植物寄生线虫β-1,4-内切葡聚糖酶基因推导蛋白PP-ENG-1、GR-ENG-1、GT-ENG-1、HG-ENG-1、HS-ENG-1编码氨基酸的同源性分别为51.2%、43.7%、43.7%、46.8%和45.3%。

海南省番石榴病原根结线虫种类鉴定

运用形态学方法,结合同工酶电泳和线粒体DNA标记技术,对采自海南省10市县的28个番石榴根结线虫种群进行鉴定,明确了25个种群为湛江根结线虫M eloidogyne zhanjiangensis、2个种群为番禺根结线虫M.panyuensis、1个种群为南方根结线虫M.incognita,湛江根结线虫是危害海南省番石榴的优势种群.文中对根结线虫的鉴定技术与方法作了讨论.