外周血基因组DNA提取试剂盒的改良

对现有DNA提取试剂盒进行改良,减少DNA提取成本,寻找经济、稳定的提取方法。将96份血液标本分为A、B两组,各48份,组内按外周血体积分为250μL、500μL、750μL三组。A组(试剂盒法)采用杭州倍沃医学科技公司的血液基因组小量提取试剂盒(离心柱型),B组(改良法)使用3%明胶吸附白细胞代替试剂盒法中分离白细胞的步骤,其余步骤同试剂盒法。采用紫外分光光度计、凝胶电泳、荧光定量PCR比较两种提取方法不同体积外周血DNA提取效果。与试剂盒法相比,改良法250μL DNA提取得率稍低,差异无统计学意义(P>0.05);改良法500μL、750μL DNA提取得率及500μL的OD_(260)/OD_(280)值均显著高于试剂盒法(P<0.01),差异具有统计学意义。琼脂糖凝胶电泳发现两种方法提取的DNA条带均完整,无拖尾现象,定量PCR扩增后两者产物融解曲线均为单峰,Ct值差异无统计学意义。本实验中改良全血DNA提取法在提取大量血体积DNA时具有优势,是一种经济、稳定、高效的DNA提取方法。

阿魏酸钠对甘油致小鼠肾脏氧化性损伤的拮抗效应

目的 从氧化应激角度 ,探讨阿魏酸钠对实验动物中毒性肾损害的防治作用。方法 建立甘油所致小鼠急性肾小管损伤模型 ,观察不同剂量的阿魏酸钠对肾损伤小鼠肾功能指标、抗氧化指标和组织学的影响。结果 在甘油注射后 6和 72h ,阿魏酸钠 10 0～ 2 0 0mg·kg- 1 ip能剂量依赖性的降低甘油所致血清尿素氮、肌酐和N 乙酰 β 葡糖苷酶的升高。阿魏酸钠 2 0 0mg·kg- 1 减少肾组织丙二醛生成 ,提高肾脏谷胱甘肽含量及谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽S 转移酶、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性 ,且可明显减轻肾组织病理改变。结论 阿魏酸钠对甘油致肾损伤有防治作用 ,其机制与增强肾脏抗氧化功能有关。

罗汉果皂苷对乙醇所致肝损伤的拮抗作用

目的探讨罗汉果皂苷对实验小鼠急性酒精肝损伤的防治作用。方法建立乙醇所致小鼠急性肝损伤模型,观察罗汉果皂苷对肝损伤小鼠肝功能指标、抗氧化指标、血糖和组织学的影响。结果罗汉果皂苷0.5 g.kg-1.d-1连续灌胃给药7 d能降低乙醇所致血清谷丙转氨酶的升高。结果进一步表明,罗汉果皂苷可提高肝脏过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性,且可明显减轻肝组织病理改变。结论罗汉果皂苷对乙醇肝损伤有防治作用,其机制与增强肝脏抗氧化功能有关。

广西壮族人群CYP1B1基因Leu432Val多态性与乳腺癌易感性的关系

目的探讨CYP1B1基因Leu432Val多态性与广西壮族妇女乳腺癌易感性的关系。方法采用人工修饰双等位基因特异性引物扩增法(diASA-AMP)技术对85例广西壮族女性乳腺癌患者和113例健康对照进行CYP1B1 Leu432Val基因分型,运用SPSS 15.0统计软件进行分析。结果 CYP1B1 Leu432Val G等位基因分布在对照组和乳腺癌组均较低,分别为12.4%和9.4%,两组均未检测到GG纯合子基因型。与对照组相比,乳腺癌两种等位基因(C和G)和两种基因型(CC和CG)分布频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论单纯CYP1B1Leu432Val基因型分布频率可能与广西壮族妇女乳腺癌易感性无明显关联。

大鼠肝星状细胞中多种细胞色素P450亚型的表达

目的采用改良的肝星状细胞(HSCs)体外分离和纯化技术,观察刚分离的大鼠HSCs中细胞色素P450(CYP450)亚型的表达,初步探讨CYP450同工酶在HSCs生理功能和激活中的作用。方法采用链霉蛋白酶/胶原酶序贯灌流和Nycodenz密度梯度离心方法,分离和纯化大鼠HSCs,半定量RT-PCR法检测HSCs和肝细胞内多种与视黄醇代谢相关的CYP450亚型mRNA的表达。结果HSCs的得率为每肝(0.8～1.2)×107。刚分离的大鼠HSCs中均能检测到CYP1A1,CYP1B1,CYP2B1/2和CYP2E1mRNA表达,其中,HSCs中CYP1A1mRNA及CYP1B1mRNA表达量接近甚至高于同一个体肝细胞中的表达水平。但CYP3A1mRNA未检测到。结论刚分离的大鼠HSCs可较高水平地表达多种与视黄醇代谢相关CYP450亚型,提示HSCs中CYP450亚型可能参与了HSCs的生理功能调节和激活过程。

从大鼠正常及肾损伤状态下肝肾氧化应激角度探讨“肝肾同源”

目的观察正常及肾损伤状态下肝肾抗氧化酶系统,以探讨肝肾抗氧化功能之间的内在联系,从氧化应激角度探讨"肝肾同源"。方法50%甘油肌内注射建立大鼠急性肾小管损伤模型,测定正常及损伤大鼠肝脏和肾脏抗氧化酶系统的活性变化。结果在急性肾损伤的不同时期(给药6h和56h),除GSH-Px外肾脏其他抗氧化酶均明显下降。与对照组相比,甘油处理6h和56h后肝脏GST、GSH-Re和SOD同样也下降,但GSH、GSH-Px和CAT则代偿性增强。相关分析表明,肝和肾CAT、GSH-Re、SOD和GST之间相关系数为-0.802(P<0.01)、0.601(P<0.05)、0.563(P<0.05)和0.667(P<0.05)。结论肾损伤时肾脏抗氧化功能降低的同时肝脏抗氧化功能也发生改变,且肝肾部分抗氧化酶存在明显的正或负相关,提示肝肾生理病理功能存在某种内在联系。

某药酒的活血化瘀作用

选用十月龄以上的老龄大鼠作为血瘀模型 ,研究某药酒的活血化瘀作用。分别采用三种不同剂量(生药 14 3、2 8 5、5 7 0mg kg)的某药酒连续灌胃 12天 ,观察该药酒对老龄大鼠肠系膜微循环和血液流变学的影响 ,并测定血清中氧化相关酶—单胺氧化酶 (MAO)、抗氧化酶—超氧化物歧化酶 (T SOD和Cu SOD)及氧化代谢产物—丙二醛 (MDA)。结果表明 ,该药酒既能加快老龄大鼠血流速度 ,增加毛细血管网交叉点 ,扩张毛细血管管径 ,抑制红细胞聚集 ,也能降低血液粘度和抑制血小板聚集 ,改善红细胞功能。同时该药酒也能不同程度的增加老龄大鼠血清中T SOD和Cu SOD活性 ,降低MDA含量。

大鼠体外肝星状细胞活化过程中代谢活化相关CYP450亚型的变化（英文）

目的观察大鼠肝星状细胞(HSC)活化不同时期外源活化相关CYP450亚型——CYP1A1,CYP1B1,CYP1A2,CYP2B1/2和CYP2E1 mRNA表达水平的变化规律。方法分离大鼠HSC,接种在无包被塑料培养瓶中作为HSC自氧化活化模型,免疫细胞化学法检测不同培养时间HSC活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。实时定量RT-PCR法测定HSC自氧化激活的不同时期多种外源物活化相关CYP450亚型mRNA的表达变化。结果免疫细胞化学结果表明,在塑料培养瓶中培养1 d的HSC并不表达α-SMA,但随着培养时间的延长,α-SMA表达逐渐增强,培养11 d的HSC处于完全活化状态,能表达典型肌丝条纹和较强α-SMA,说明培养1,2,5和11 d的HSC分别处于未活化期、活化早期、中期和晚期。实时定量RT-PCR结果显示,在未活化的HSC(培养1 d)中,有CYP1A1,CYP1B1,CYP1A2,CYP2B1/2和CYP2E1的mRNA表达;在HSC活化早期(培养2 d),CYP1B1,CYP2B1/2,CYP2E1mRNA表达最高,分别为未活化HSC的2.1,1.6(P<0.05)和23.9(P<0.01)倍;而在活化中期(培养5d)及晚期(培养11 d),这些CYP亚型表达显著降低甚至测不出。然而,CYP1A1和CYP1A2在整个活化过程均持续下降。结论多种外源物活化相关CYP450亚型在HSC自氧化激活过程发生了明显改变,其中CYP1B1,CYP2B1/2和CYP2E1的mRNA表达在活化早期显著升高,这些变化可能与HSC的早期激活增殖有关。

构建“以学生为主体”的多元化机能实验教学模式

为提高教学效果,探索以"以学生为主体"的多元化机能实验教学模式,包括主体参与式教学法、设计性实验和探索性实验、案例教学法及虚拟仿真实验系统,结果表明该模式可提高学生自主学习能力、科研能力、创新思维能力、综合表达能力和运用知识能力,并可扩大知识面。

以培养学生学习兴趣为导向的药理学教学模式

药理学是一门比较难学的医学课程。如何培养学生学习兴趣,提高药理学教学质量,是药理学教学过程中的一个重要议题。作者通过一些与生活密切相关用药实例和药物发明简史的导入,来激发学生学习药理学的兴趣。通过多种教学方式如启发、比较、联想、歌诀、俗语和多媒体教学等使得一些复杂难学的知识点变得易学易记,使学生学习兴趣维持。通过案例教学法和探索性实验等综合性教学法,使学生的学习能力最终得到提高。

主体参与式教学法在药理学实验中的应用

为改变传统实验教学以教师为主、学生学习主动性不强的状态,研究探索学生参与实验讲解和总结的主体参与式教学法在药理学实验中的应用。实践证明,主体参与式教学法可提高学生对实验相关理论知识的掌握程度,提高学生自学能力、创新思维能力和综合表达能力。

启发式教学法在拟肾上腺素药物对血压影响实验中的应用

在拟肾上腺素药物对家兔血压的影响实验中,利用启发式教学法启迪学生设计实验来验证拟肾上腺素药物对血压影响的机制,并灵活分析实验结果。通过启发式教学使学生对拟肾上腺素药对血压的影响有深刻的理解和认识。

大鼠肝星状细胞体外分离纯化方法的建立及多种CYP450亚型的表达

目的研究和比较肝脏星状细胞和肝实质细胞内多种细胞色素P450（CYP）亚型——CYP1A1、CYP1B1、CYP282、CYP2E1、CYP3A1 mRNA的表达及其水平，初步阐明肝星状细胞中与外源物活化相关的CYP酶系的基础表达和代谢特征。方法采用链霉蛋白酶胶原酶序贯灌流和Nycodenz密度梯度离心建立大鼠肝星状细胞体外分离和纯化方法；运用desmin免疫细胞化学技术和自发荧光共聚焦显微镜技术鉴定肝星状细胞纯度；并用糖原染色和过氧化物酶法分别测定肝实质细胞和枯否细胞的污染率；

罗汉果甜苷对体外人肝星状细胞活化和凋亡的影响

目的研究罗汉果甜苷对体外培养人肝星状细胞LX-2活化及凋亡的影响。方法体外培养LX-2,将其分为空白对照组、不同质量浓度的罗汉果甜苷干预组(80、160、240、320μg/mL),每组8瓶细胞,药物与细胞共同孵育24 h后,采用CCK-8试剂检测细胞增殖状态,用酶联免疫吸附法测定转化生长因子-β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原的蛋白分泌,用RT-PCR法检测TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA的表达。用流式细胞仪双染法检测细胞凋亡。结果 CCK8结果显示罗汉果甜苷各剂量组作用LX-2细胞24 h后,细胞增殖均明显降低(P<0.05);ELISA和RT-PCR结果表明,与空白对照组比较,罗汉果甜苷各剂量组可抑制LX-2中TGF-β1和Ⅰ型胶原的蛋白分泌;并能抑制TGF-β1和α-SMA的mRNA表达(P<0.05)。流式细胞检测结果显示罗汉果甜苷各剂量组亦可剂量依赖性显著增加LX-2凋亡率。结论罗汉果甜苷可通过抑制TGF-β1和I型胶原的蛋白及TGF-β1和α-SMA的mRNA的表达来抑制肝星状细胞活化,还能促进肝星状细胞凋亡,从而发挥抗肝纤维化的作用。

肝星状细胞激活的分子机制与抗肝纤维化治疗

肝星状细胞(HSC)激活是肝纤维化发生的中心环节,其激活过程可分为始动阶段(旁分泌刺激和转录调控因素启动级联瀑布式的细胞反应)和持续阶段(旁分泌或自分泌刺激和细胞外基质重建共同维持HSC活化的表型反应)。肝脏中多种细胞和细胞因子参与调节了HSC的激活过程。活化型HSC的表型变化主要包括细胞增殖、收缩和纤维形成等。抗肝纤维化治疗策略主要包括调控HSC活化增殖或促其凋亡、抑制胶原合成或促其降解、细胞因子治疗和间充质干细胞治疗等。

罗汉果甜苷对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠的保护作用

目的研究罗汉果甜苷对大鼠肝纤维化的保护作用。方法除正常组外,其余各组采用四氯化碳(CCL4)诱导肝纤维化模型,于造模第7周起,给药组分别灌胃给予相应的受试药,疗程6周。实验结束后,观察罗汉果甜苷对大鼠血清ALT、AST活性,HA、PⅢP、CⅣ含量,肝组织SOD活性及MDA含量的影响,观察罗汉果甜苷对肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响及对肝组织病理变化的影响。结果罗汉果甜苷各剂量组能明显降低肝纤维化大鼠ALT、AST、MDA、CⅣ、PⅢNP含量,升高SOD水平,减轻肝组织病理损伤程度,抑制肝组织中TGF-β1表达。结论罗汉果甜苷对CCL4诱导的肝纤维化大鼠有很好的保护作用。

中药治疗肝癌机制的研究进展

肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一。近年来发现,中药可通过阻滞细胞周期,降低端粒酶活性,影响丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、信号传导及转录活化因3(STAT3)等信号通路,激活含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)等途径来抑制肝癌细胞增殖和诱导肝癌细胞凋亡,通过影响血管内皮生长因子(VEGF)通路、基质金属蛋白酶(MMPs)通路和黏附分子的表达来抑制肝癌细胞的侵袭和转移,以及逆转肝癌细胞耐药性和增强机体免疫力等以有效阻止肝癌的进展,增加药物治疗的敏感性。以上研究表明,中药能通过多机制和多层面抑制肝癌的发展,为肝癌的治疗提供思路。

肝损伤大鼠肝脏异物代谢功能的改变

目的 研究不同肝损伤状态下肝脏药物代谢和抗氧化功能的变化及规律 ,为肝纤维化患者的临床合理用药提供依据。方法 建立大鼠四氯化碳急性肝损伤和复合因素肝纤维化、肝硬化模型 ,差速离心法制备肝亚细胞组分 ,测定药物代谢酶和抗氧化酶活性。结果 不同肝损伤状态下大鼠肝微粒体药物代谢Ⅰ相酶———细胞色素P4 5 0 (CYP)总量、CYP1A1、3A活性和Ⅱ相酶—谷胱甘肽S 转移酶 (GST)活性均明显降低 ,随损伤时间递减 ,在肝硬化时达最低 ;而CYP2E1活性在急性肝损伤时即达最低 ,随染毒时间的延长而有所恢复。肝纤维化状态下CYP1A、CYP2E1、CYP3A和GST活性分别为正常对照组的 6 8%、5 6 %、81%和 5 9%。肝纤维化状态下胞浆抗氧化酶 GST、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性也呈不同程度降低 ,为正常对照组的 85 %、76 %和 5 4 %。结论 肝纤维化时 ,肝脏异物代谢酶功能降低 ,其降低程度多与肝损伤轻重和时间长短有关。