二代测序建库中福尔马林固定石蜡包埋标本DNA超声波打断的方法

二代测序(next generation sequencing,NGS)可以利用少量样本获得多基因多位点的突变信息,为患者选择合适的靶向治疗^([1])。目前比较多试剂盒使用的杂交捕获法建库流程首先需要将待测序的DNA分子用超声波打碎成200~500 bp长的片段,短的DNA片段有利于进行DNA分子快速杂交和高灵敏目标基因检测。本实验应用Covaris M220超声波打断仪对福尔马林固定石蜡包埋标本(formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE)DNA进行破碎,得到比较满意的结果,现介绍如下。

EBER原位杂交和免疫组化双染中酶消化和抗原修复的优化

原位杂交和免疫组化双染技术是在不同层次来检测同一细胞上某些物质的表达是否有相关性的一种实验方法。由于操作步骤复杂,实验不易取得理想效果。我科结合本实验室实际情况,经过反复摸索,获得满意效果,现将我科经验总结如下。1材料与方法,1.1标本来源收集广东省人民医院病理科2019年1~5月EBER阳性病例16例,其中NK/T淋巴瘤8例,Burkitt淋巴瘤2例,血管免疫母细胞性淋巴瘤4例,浆母细胞性淋巴瘤1例,淋巴结外周T细胞淋巴瘤1例。

全自动染色机脱水、透明试剂量与效果的分析

目前各大医院及相关实验室均在使用Thermo Scientific全自动染色机,它主要用于常规HE染色,使切片的处理效率明显提高、染色效果稳定和染色质量显著改观^（[1]）。然而实际工作中还是常遇到切片脱水、透明效果不理想,无法观察组织细胞的细微结构情况。为弄清HE染色脱水、透明效果欠佳的具体原因（已排除乙醇、二甲苯不纯的可能）,本实验比较了全自动染色机脱水、透明试剂量对切片的影响。

免疫组织化学检测条件对PD-L1(22C3)染色结果的影响

目的摸索程序性死亡配体1(PD-L1,22C3)浓缩抗体最佳处理条件(抗原修复时间、抗体稀释度、抗体孵育时间),稳定PD-L1检测质量,建立PD-L1实验室内部检测体系。方法以PD-L1(22C3)标准检测试剂盒的检测条件、染色结果作为参照,评分标准参照Dako公司PD-L1 IHC 22C3 pharmDX标准检测试剂盒的判读标准,采用Dako公司PD-L1(22C3)浓缩抗体及EnVision Flex+/HRP检测试剂盒与PD-L1(22C3)标准检测试剂盒,检测15例肺癌、5例扁桃体及5例胎盘组织在8种不同处理条件下(B1~B8)的免疫组织化学染色结果,并比对其与PD-L1(22C3)标准检测试剂盒(A组)检测结果的一致性。结果8组不同的处理条件,B1组除弥漫强阳性表达及阴性病例(共3例)阳性肿瘤细胞的百分比与A组接近外,其余病例阳性肿瘤细胞百分比略低于A组;B7组有2例肿瘤细胞的阳性百分比明显高于A组,超出阈值范围,其余病例阳性肿瘤细胞的百分比略高于A组,但在阈值范围内;B8组结果与A组结果最接近;B2~B6组阳性肿瘤细胞的百分比均有不同程度的降低,但在阈值范围。结论PD-L1(22C3)检测条件与检测结果密切相关,为达到理想的检测效果同时节约成本,以B8组的检测条件最为合适[用Dako公司pH6.0抗原修复液在Dako PT Link 97℃修复40 min;22C3(1∶100)室温孵育60 min;EnVision Flex+Linker室温孵育30 min;EnVision/HRP室温孵育30 min;二氨基联苯胺显色5 min]。

黏液样肾上腺皮质腺瘤的临床病理学分析

目的探讨黏液样肾上腺皮质腺瘤的临床病理学特征、免疫表型、诊断及鉴别诊断。方法回顾性分析广东省人民医院2014年1月至2016年12月收集的4例黏液样肾上腺皮质腺瘤的临床资料、病理形态学特征及免疫表型特点，并复习相关文献。结果4例黏液样肾上腺皮质腺瘤患者26-45岁，其中女性1例，男性3例。肿瘤间质显著的黏液样变性，瘤细胞体积小，核圆形，胞质少－中等量，嗜酸性或透亮，呈条索状、腺管状或器官样排列；其中2例黏液区域占90%以上，1例占70%；而另一黏液区域为10%的病例，肿瘤形成广泛的腺管状结构。免疫组织化学显示4例波形蛋白与Melan A弥漫强阳性，局灶α－抑制素阳性；2例突触素阳性；1例CAM5.2阳性；4例嗜铬粒素A、S－100蛋白、上皮抗原、细胞角蛋白（CK）7、CK20及广谱细胞角蛋白均阴性。结论黏液样肾上腺皮质腺瘤非常罕见，是一种良性肿瘤，应避免误诊为其他肾上腺原发或继发的恶性肿瘤，防止造成不适当的治疗。

一种干枯组织的处理方法

研究干枯组织的处理方法。方法 收集广东省人民医院病理科2021年1~3月的新鲜未固定组织标本。分别取当天获得的脾、肠、胃、乳腺、甲状腺活检组织,大小0.2 cm×0.2 cm×0.2 cm各20块,合计100块,分4组,每组每种组织各5块,合计20块/组,同一个组织均来源于该组织的同一个部位,从取样到样品处理的时间间隔≤2 h,期间置于操作均为同一位资深的病理医师。结果 与正常组织相比,模拟干枯实验,脾、肠、胃、乳腺、甲状腺组织的切片顺利,但HE染色显示细胞自溶,间质收缩,细胞核无收缩,不可用于诊断;对应的干枯组织不仅切片受阻,多表现为组织结构不完整,细胞核固缩发白,不可用于诊断;经甲醛冰醋酸处理的干枯组织,切片稍受阻,但组织结构完整,细胞核无固缩,细胞染色清晰,色泽鲜艳,可用于诊断;软化剂处理的干枯组织组织完整,细胞核无固缩,细胞染色清晰,与正常组织相当,可用于诊断。结论 对于干枯组织,建议采用商品化的甲醛与冰醋酸混合液浸泡软化并采用邻苯二甲酸二丁酯浸泡增塑,可达到切片要求及HE染色要求。