乳腺癌中THBS-1表达及与EMT的相关性

目的:检测血小板反应蛋白-1(thrombospondins-1,THBS-1)和EMT相关基因(Snail、E-cadherin及Vimentin)在乳腺癌中的表达情况,探讨THBS-1表达与乳腺癌患者预后及EMT的相关性。方法:应用免疫组织化学方法检测84例乳腺癌石蜡标本及32例对应癌旁组织标本中THBS-1、Snail、E-cadherin及Vimentin表达,分析THBS-1与乳腺癌患者临床病理学资料、预后及EMT的关系。结果:乳腺癌组织中THBS-1蛋白的表达率显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P=0.003);THBS-1蛋白在乳腺癌中的表达与淋巴结转移、NPI及月经状态密切相关(P<0.05);THBS-1高表达组的复发率(23.5%)明显高于THBS-1低表达组(4%),差异具有统计学意义(P=0.009)。THBS-1高表达组的总生存率(65.8%)低于THBS-1低表达组(81.9%)(P=0.062)。THBS-1表达与Snail、E-cadherin及Vimentin密切相关(P<0.05);间质型病例组THBS-1阳性率(58.8%,10/17)明显高于上皮型乳腺癌病例组(21.4%,9/42)(P=0.023),两者差异具有统计学意义。结论:在乳腺癌中THBS-1表达与肿瘤转移密切相关,可能通过诱导EMT过程促进肿瘤的侵袭转移。THBS-1可作为乳腺癌患者判断预后的预测指标。

GKN2在胃癌细胞增殖、转移中的作用及机制

目的探讨胃动蛋白2(gastrokine 2, GKN2)对胃癌细胞的生长增殖、侵袭、转移的影响及分子机制。方法利用qRT-pCR和Western blot法检测GKN2在胃癌组织中的表达;构建对照细胞株AGS-CON、SGC-7901-CON与GKN2过表达细胞株AGS-GKN2、SGC-7901-GKN2,应用qRT-pCR和Western blot法检测GKN2在各细胞株中的表达变化,RTCA系统和克隆形成实验检测细胞增殖功能,Transwell及划痕实验检测细胞迁移和侵袭功能,并通过Western blot观察GKN2表达变化对PI3K/AKT/PTEN/mTOR信号通路相关蛋白的作用。结果 GKN2在胃癌组织及多株胃癌细胞株中的表达明显低于癌旁组织和正常胃上皮细胞;RTCA系统显示GKN2过表达组的增殖活性明显低于对照组;克隆形成实验结果显示,GKN2过表达组的细胞克隆数和大小明显低于对照组;Transwell及划痕实验结果表明,GKN2过表达组纵向迁移/侵袭数和横向迁移数明显低于对照组。Western blot结果显示,GKN2过表达下调增殖相关蛋白PCNA、Survivin,抗凋亡蛋白BCL-2及转移相关蛋白MMP-7、MMP-9和MMP-2表达水平,而上调Timp2表达水平。Western blot结果亦显示,GKN2影响PI3K/AKT/PTEN/mTOR通路的激活水平,特别是明显上调PTEN的表达。结论 GKN2在胃癌组织及多株胃癌细胞株中呈低表达或表达丢失。GKN2影响胃癌细胞的增殖和转移,可能通过PI3K/AKT/PTEN/mTOR通路促进胃癌的发生、发展。

水稻miR446及其靶基因APP1在非生物胁迫中的功能研究

根据基因芯片的数据筛选出Osa—miR446及靶基因作为研究对象．生物信息学分析表明，Osa—miR446有4个候选靶基因，通过RACE技术对这些候选靶基因进行鉴定，发现只有LOC—Os03g56930．1（APP1基因）可得到理想的剪切条带，测序后比对可知该剪切位点位于APP1基因的内含子区域（第1036-1037个碱基）．随后，通过克隆获得APP1基因，信息学分析可知该基因开放阅读框长度为711bp，是一个编码237个氨基酸的新的未定性的疏水性蛋白质．Southern杂交结果显示APP1在水稻基因组中为单拷贝基因．利用荧光定量PCR分析了Osa—miR446及其靶基因APP1在非生物胁迫中的表达模式，结果表明Osa-miR446与APP1基因的表达均呈负相关，说明Osa—miR446确实可通过剪切APP1基因的转录产物来对非生物胁迫应答．

miR-324-5p通过靶向调控DAPK1降低胰腺癌细胞的放射敏感性

目的:探讨死亡相关蛋白激酶1(death-associated protein kinase 1,DAPK1)在胰腺癌(pancreatic cancer,PaC)细胞放射敏感性中的作用,验证miR-324-5p通过靶向调控DAPK1影响胰腺癌细胞放射敏感性的机制。方法:通过生物信息学预测靶向DAPK1的miRNAs,并利用双荧光素酶报告基因检测miR-324-5p对DAPK1的调控作用。在PANC-1和MIA PaCa-2细胞中过表达miR-324-5p和DAPK1或抑制miR-324-5p后,对各细胞株进行放射诱导,检测细胞增殖和凋亡情况,以及凋亡相关分子的表达情况。结果:GEO数据集结果显示,胰腺癌组织中miR-324-5p的表达水平高于正常组织。与正常胰腺导管上皮细胞系(HPDE6-C7)相比,胰腺癌细胞系(Capan-1、Bxpc-3、PANC-1和MIA PaCa-2)中miR-324-5p表达水平更高(P均<0.001)。双荧光素报告基因检测结果表明,miR-324-5p靶向DAPK1的3'UTR,并且可下调DAPK1的表达。细胞实验结果证实,过表达miR-324-5p通过靶向调控DAPK1降低放射诱导的细胞凋亡和DNA的损伤,进而降低了胰腺癌细胞的放射敏感性。结论:miR-324-5p通过负调控DAPK1降低胰腺癌细胞对放射的敏感性,从而影响DNA修复和细胞凋亡。miR-324-5p/DAPK1途径可能为胰腺癌的靶向治疗提供了潜在的治疗靶点。

死亡相关蛋白激酶1及结节性硬化复合物蛋白2基因在胰腺癌组织中的表达及与预后的关系

目的通过生物信息学方法研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)和结节性硬化复合物蛋白2(TSC2)基因在胰腺癌中的表达情况,并探讨分析其与预后的关系。方法利用来自癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库的胰腺癌患者数据进行Kaplan-Meier分析,进而深层次探讨DAPK1和TSC2基因表达水平与患者总生存期或无进展生存期(PFS)的关系,同时,对影响预后的因素进行Cox多因素分析,以及分析胰腺癌中DAPK1和TSC2基因启动子的甲基化水平。此外,通过双荧光素酶报告基因检测系统,验证靶向DAPK1的微小RNA(miR),并应用定量逆转录聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法验证在胰腺癌细胞中miR-324-5p负调控DAPK1的表达。结果多因素分析显示,肿瘤分级(P=0.005)、R0切除(P<0.001)及TSC2表达情况(P=0.005)是影响胰腺癌患者PFS的独立危险因素;肿瘤部位(P=0.006)、病理类型(P=0.002)及分子靶向治疗(P<0.001)是影响胰腺癌患者总生存期的独立危险因素。DAPK1基因低表达且TSC2基因高表达的胰腺癌患者具有更好的总生存期(P=0.024)。DAPK1和TSC2甲基化水平与相应的mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.69、-0.37,均P<0.05)。体外实验结果证实,过表达的miR-324-5p显著抑制了胰腺癌Pa Ca-2和PANC-1细胞DAPK1 mRNA和蛋白的表达[mRNA:(0.37±0.02)比(1.00±0.02)、(0.53±0.01)比(1.00±0.06);蛋白:(0.54±0.06)比(1.04±0.12)、(0.63±0.11)比(1.01±0.11)](均P<0.05)。结论DAPK1基因联合TSC2基因的表达情况可以预测胰腺癌患者的预后;在胰腺癌组织中,DAPK1和TSC2启动子的低甲基化水平是DAPK1和TSC2高表达的重要因素;miR-324-5p负调控DAPK1的表达,有望成为胰腺癌靶向治疗的新靶点。

敲除和过表达miRNA446对其靶基因APP1的表达模式影响

在本课题组前期研究中,通过基因芯片数据发现了一系列在胁迫应答中表达量有变化的microRNA.其中以miRNA446的变化尤为显著.为进一步探求miRNA446在胁迫应答中的变化与功能,本实验通过在水稻中分别敲除和过表达miR446,检测干旱和冷胁迫下,miR446及其靶基因APP1的表达模式.结果表明,12h内野生型株系miR446的表达量升高至未胁迫的3至5倍,过表达株系中则是先降至低于未受胁迫时的50%后逐步上升,而APP1基因由于受到高水平miR446的剪切作用而一直降低,12h可降低至未受胁迫时的50%以下.敲除株系中,miR446的表达量被完全抑制,在整个胁迫过程中均保持接近于零的水平,而APP1在胁迫中也仅有微弱的先降后升趋势.

基于TCGA数据库分析FNDC3B基因在胰腺癌中的表达及预后意义

目的探讨FNDC3B基因在胰腺癌组织中的表达情况及预后意义。方法下载癌症基因组图谱(TCGA)的公开数据,评估FNDC3B基因在胰腺癌组织中的表达情况。筛选后共采集了141个胰腺癌样本,根据FNDC3B的表达量中位数将样本分为FNDC3B低表达组及FNDC3B高表达组。采用Kaplan-Meier法对胰腺癌患者进行生存分析,采用Log-Rank检验以及Cox回归模型分析胰腺癌患者预后的影响因素,同时利用基因集富集分析(GSEA)方法预测调控通路。结果FNDC3B高表达的患者,具有更多的淋巴结转移,差异有统计学意义(P<0.05)。生存分析显示,FNDC3B高表达的胰腺癌患者预后更差(P<0.05)。单因素分析中,T分期、N分期、分子靶向治疗、放射治疗及FNDC3B影响胰腺癌患者的总生存。多因素分析中,FNDC3B表达(HR:1.861,95%CI:1.147~3.019,P=0.012)、分子靶向治疗(HR:0.363,95%CI:0.216~0.611,P<0.001)及肿瘤分级(HR:1.948,95%CI:1.198~3.167,P=0.007)是胰腺癌总生存的3个独立危险因素。GSEA结果表明,FNDC3B基因主要与癌症相关信号通路、胰腺肿瘤、ECM受体相互作用、白细胞跨内皮迁移、黏着斑、调节肌动蛋白细胞骨架、细胞因子和细胞因子受体相互作用、细胞黏附分子、黏附连接等信号通路相关。结论FNDC3B、肿瘤分级及分子靶向治疗是影响胰腺癌患者总生存的独立危险因素。FNDC3B可能是胰腺癌患者不良预后的潜在生物标志物,为今后治疗胰腺癌提供了潜在的靶点。

局部晚期直肠癌术前放疗的临床和影像学预后因素研究

目的 分析局部晚期直肠癌术前放疗后影响预后的临床和影像学因素的研究。方法 回顾性分析2004年6月至2015年9月收治的符合入组标准的106例局部晚期并接受术前放疗的直肠癌患者。术后病理切片根据Mandard评分标准将肿瘤消退分级（TRG）分为肿瘤消退明显组（TRG1＋2）和肿瘤消退不明显组（TRG3＋4＋5）。同时，利用磁共振扩散加权成像（DWI）技术测量放疗后肿瘤表观弥散系数（ADC），比较肿瘤ADC值与TRG之间的关系。结果 单因素分析中，年龄、化疗、pT分期、pN分期、分化程度、脉管癌栓以及TRG可能对总生存率（OS）有影响（χ2=3.945~8.110，P〈0.05）。多因素分析显示，分化程度和TRG是OS的独立预后因素（χ2=5.221、6.563，P〈0.05）。长程放疗组和短程放疗组之间的OS，差异无统计学意义（P〉0.05）。肿瘤消退明显组（TRG1＋2）和肿瘤消退不明显组（TRG3＋4＋5）的5年OS分别为91.2%和67.4%，差异有统计学意义（χ2=8.110，P〈0.05）。术前放疗方式、术前化疗、病理类型、分化程度、大体类型、脉管癌栓和放疗后肿瘤ADC值对TRG有影响（χ2=4.189~18.139，P〈0.05）。利用ROC曲线找出放疗后肿瘤ADC值的最佳临界点1.7×10-3 mm2/s，放疗后肿瘤ADC值预测TRG1＋2的准确性为70%。结论 Mandard TRG可预测局部晚期直肠癌患者术前放疗后的疗效。术前长程放疗和术前短程放疗之间的OS无明显差异。放疗后肿瘤ADC值可能可以预测局部晚期直肠癌的肿瘤消退情况。