目的观察干扰微小RNA-21(miR-21)对人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭的影响,并初步探讨其调控机制。方法收集对数期生长PC-3细胞株及人前列腺正常上皮细胞株RWPE-1,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并对比其miR-21基因...目的观察干扰微小RNA-21(miR-21)对人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭的影响,并初步探讨其调控机制。方法收集对数期生长PC-3细胞株及人前列腺正常上皮细胞株RWPE-1,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并对比其miR-21基因表达情况。取对数期生长PC-3细胞株,采用脂质体转染法将miR-21抑制剂(inhibitor)及NC inhibitor质粒转染至PC-3细胞,分别设为干扰组和空载组,另取不做处理PC-3细胞为空白组。采用倒置荧光显微镜检测转染效率;采用MTT法检测并对比各组不同时刻吸光度(OD值);采用划痕试验及Transwell试验检测并对比三组穿膜细胞数及迁移率;采用RT-PCR法检测并对比三组miR-21、基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因表达水平;采用蛋白免疫印迹法检测并对比三组TIMP3、MMP-9蛋白表达水平。结果 PC-3细胞miR-21相对表达量显著低于RWPE-1细胞( P <0.05);倒置显微镜下检测转染24 h后干扰组和空载组转染效率分别为(82.16±8.20)%、(80.23±8.69)%;干扰组MTT实验不同时刻OD值均显著低于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05),三组MTT实验OD值均随时间延长呈显著升高趋势( P <0.05);干扰组12 h、24 h迁移率均显著低于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05),三组24 h迁移率显著高于12 h( P <0.05);干扰组穿膜细胞数显著少于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05);干扰组miR-21相对表达量、MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量显著低于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05);干扰组TIMP3 mRNA和蛋白相对表达量显著高于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05)。结论前列腺癌细胞miR-21异常高表达,干扰miR-21可抑制人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭能力,可能与上调TIMP3 mRNA和蛋白、下调MMP-9 mRNA和蛋白有关。展开更多
随着我国人口老龄化的发展,前列腺癌的发病率呈现逐年上升的特点[1]。目前国外普遍开展前列腺特异抗原(prostate specific antigen,PSA)的筛查工作,因而主要发现早期前列腺癌,而在我国,由于受到医疗发展水平的限制,目前还无法对前列...随着我国人口老龄化的发展,前列腺癌的发病率呈现逐年上升的特点[1]。目前国外普遍开展前列腺特异抗原(prostate specific antigen,PSA)的筛查工作,因而主要发现早期前列腺癌,而在我国,由于受到医疗发展水平的限制,目前还无法对前列腺癌筛查工作进行普及,因此临床上多见前列腺癌晚期患者[2]。晚期前列腺癌容易发生侵袭转移,预后较差,展开更多
文摘目的观察干扰微小RNA-21(miR-21)对人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭的影响,并初步探讨其调控机制。方法收集对数期生长PC-3细胞株及人前列腺正常上皮细胞株RWPE-1,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并对比其miR-21基因表达情况。取对数期生长PC-3细胞株,采用脂质体转染法将miR-21抑制剂(inhibitor)及NC inhibitor质粒转染至PC-3细胞,分别设为干扰组和空载组,另取不做处理PC-3细胞为空白组。采用倒置荧光显微镜检测转染效率;采用MTT法检测并对比各组不同时刻吸光度(OD值);采用划痕试验及Transwell试验检测并对比三组穿膜细胞数及迁移率;采用RT-PCR法检测并对比三组miR-21、基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因表达水平;采用蛋白免疫印迹法检测并对比三组TIMP3、MMP-9蛋白表达水平。结果 PC-3细胞miR-21相对表达量显著低于RWPE-1细胞( P <0.05);倒置显微镜下检测转染24 h后干扰组和空载组转染效率分别为(82.16±8.20)%、(80.23±8.69)%;干扰组MTT实验不同时刻OD值均显著低于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05),三组MTT实验OD值均随时间延长呈显著升高趋势( P <0.05);干扰组12 h、24 h迁移率均显著低于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05),三组24 h迁移率显著高于12 h( P <0.05);干扰组穿膜细胞数显著少于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05);干扰组miR-21相对表达量、MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量显著低于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05);干扰组TIMP3 mRNA和蛋白相对表达量显著高于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05)。结论前列腺癌细胞miR-21异常高表达,干扰miR-21可抑制人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭能力,可能与上调TIMP3 mRNA和蛋白、下调MMP-9 mRNA和蛋白有关。
文摘随着我国人口老龄化的发展,前列腺癌的发病率呈现逐年上升的特点[1]。目前国外普遍开展前列腺特异抗原(prostate specific antigen,PSA)的筛查工作,因而主要发现早期前列腺癌,而在我国,由于受到医疗发展水平的限制,目前还无法对前列腺癌筛查工作进行普及,因此临床上多见前列腺癌晚期患者[2]。晚期前列腺癌容易发生侵袭转移,预后较差,