小檗碱介导BMAL1:CLOCK复合体调控糖脂代谢改善脂肪胰岛素抵抗的效应机制

探究小檗碱介导脑和肌肉芳香烃受体核转位样蛋白1(brain and muscle arnt-like 1,BMAL1):昼夜自发输出周期蛋白kaput(circadian locomotor output cycles kaput,CLOCK)复合体,调控糖脂代谢改善脂肪胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的作用机制。地塞米松诱导96 h建立IR-3T3-L1脂肪细胞模型,0.5、1、5、10、20μmol·L^(-1)小檗碱给药24 h。葡萄糖氧化酶法和细胞活性(cell counting kit-8,CCK-8)试剂盒分别检测胞外葡萄糖含量和细胞活力;酶比色法检测甘油三酯(triglyceride,TG)和甘油含量;油红O染色检测脂滴;荧光染色检测Ca2+、线粒体结构及活性氧(reactive oxygen species,ROS);蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测脂联素(adiponectin,ADPN)、BMAL1、CLOCK、激素敏感性脂肪酶(hormone-sensitive triglyceride lipase,HSL)、碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate-responsive element-binding protein,ChREBP)、固醇调节元件结合蛋白1C(sterol regulatory element-binding protein 1C,SREBP-1C)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活剂1α(peroxisome proliferator activated receptorγcoactivator 1α,PGC1α)、肉碱棕榈酰基转移酶1α(choline phosphotransferase 1α,CPT1α)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferators-activated receptorsα,PPARα),免疫荧光检测BMAL1核定位。此外,添加20μmol·L^(-1)CLK8(CLOCK抑制剂)检测葡萄糖消耗量及BMAL1/ChREBP/PPARα蛋白。研究结果显示小檗碱增加IR-3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗量,且不影响细胞活力;小檗碱降低IR-3T3-L1脂肪细胞胞内TG,5μmol·L^(-1)小檗碱升高甘油含量,减少脂滴积累,提示其加强脂解,而10μmol·L^(-1)小檗碱不影响甘油含量且脂滴更少,提示其可能同时加强脂解和甘油利用。此外,小檗碱降低IR-3T3-L1脂肪细胞胞内Ca^(2+)和ROS改善线粒体功能,上调PGC1α有助于维护线粒体结构。结果还显示小檗碱上调ADPN,提示其增加IR-3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性,上调外周节律调控蛋白BMAL1和CLOCK并增加BMAL1核定位,上调脂解关键蛋白HSL和脂氧化限速酶CPT1α,下调TG合成关键蛋白SREBP-1C,小檗碱同时上调IR-3T3-L1脂肪细胞ChREBP和PPARα,以上结果共同提示其促糖转脂增强降糖效应。鉴于CLK8特异性抑制CLOCK酰基化修饰BMAL1形成复合体,结果显示CLK8添加小檗碱可降低葡萄糖消耗量,提示小檗碱上调BMAL1:CLOCK复合体改善糖代谢。CLK8添加小檗碱组上调BMAL1但下调ChREBP和PPARα,因而推测小檗碱介导BMAL1:CLOCK复合体调控细胞糖脂代谢减轻脂肪细胞IR。

葛根芩连汤缓解肝内质网应激改善体内外糖代谢的效应机制

探讨葛根芩连汤(Gegen Qinlian Decoction,GQD)缓解内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)改善体内外糖代谢的效应机制。分子对接预测GQD入血主要药效成分与ERS相关靶点的结合活性。取冻存正常组、高脂诱导糖尿病模型组、二甲双胍组和GQD组大鼠肝组织,提取RNA和蛋白质,qPCR检测ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,Grp78)、未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)通路基因肌醇需求酶1(inositol requiring enzyme 1,Ire1)、转化因子6(activating transcription factor 6,Atf6)、Atf4、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,Chop)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-12基因mRNA表达;Western blot检测GRP78、IRE1、蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)、ATF6、X-盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)、ATF4、CHOP、caspase-12、caspase-9和caspase-3蛋白表达;比色法检测肝组织钙离子含量。体外采用衣霉素诱导6 h建立ERS-HepG2细胞模型,2.5%、5%、10%GQD含药血清(GQD-containing serum)给药9 h,葡萄糖氧化酶法检测细胞外液葡萄糖含量;流式细胞术检测细胞凋亡;糖原染色检测细胞糖原含量;免疫荧光检测ERS标志蛋白GRP78表达;比色法检测胞内钙离子含量;Western blot检测GRP78和ERS诱导IRE1、PERK、ATF6和真核翻译启动因子2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,eIF2α)磷酸化,同时检测胰岛素降糖通路蛋白胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1,IRS1)、磷脂酰肌醇3-激酶p85调控亚基(phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit p85,PI3Kp85)和蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)的磷酸化水平。此外,Western blot检测沟通ERS与胰岛素降糖通路的c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNKs)磷酸化水平。分子对接结果显示,GRP78、IRE1、PERK、ATF4与黄芩素、小檗碱、大豆黄酮、药根碱、甘草苷、棕榈碱、葛根素、汉黄芩苷有较强结合活性,提示GQD可能干预ERS诱导的UPR。体内结果显示,GQD可下调糖尿病大鼠Ire1、Atf6、Atf4、Grp78、caspase-12、Chop的mRNA转录,下调GRP78、IRE1和PERK及ERS诱导凋亡相关因子ATF4和CHOP、caspase-12、caspase-9和caspase-3表达,上调XBP1增强适应性UPR。此外,GQD可升高肝组织钙离子含量,有助于蛋白正确折叠。体外结果显示,GQD可增加衣霉素诱导ERS-HepG2细胞葡萄糖消耗量且不明显影响细胞活力,增加肝糖原合成,下调ATF6和p-eIF2α(Ser51)、IRE1、PERK和GRP78的表达,下调p-IRS1(Ser312)和p-JNKs(Thr183/Tyr185)的表达,上调p-PI3Kp85(Tyr607)和p-Akt(Ser473)的表达。研究提示GQD可缓解肝过度ERS,减轻胰岛素抵抗,改善体内外肝糖代谢。

火针治疗带状疱疹后遗神经痛有效性和安全性的系统评价

目的系统评价火针治疗带状疱疹后遗神经痛(PHN)的有效性和安全性。方法计算机检索PubMed、EMbase、The Cochrane Library、CNKI、WanFang Data、CBM和VIP数据库,搜集有关火针治疗PHN有效性和安全性的随机对照试验(RCT),检索时限均从建库至2021年6月5日。由2名研究者独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险后,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果共纳入31个RCT,包括2755例患者。Meta分析结果显示:火针与西药相比可降低PHN患者的VAS评分[SMD=-1.00,95%CI(-1.36,-0.63),P<0.00001];火针联合西药与单用西药相比,可提高总有效率[RR=1.15,95%CI(1.06,1.23),P=0.0003],降低VAS评分[SMD=-1.92,95%CI(-2.87,-0.97),P<0.0001]、SAS评分[SMD=-0.89,95%CI(-1.20,-0.59),P<0.00001]。火针与常规针刺相比,可降低VAS评分[SMD=-1.37,95%CI(-2.35,-0.39),P=0.006],缩短即刻止痛时间[SMD=-0.64,95%CI(-0.88,-0.39),P<0.00001]。与中药相比,火针联合中药可降低VAS评分[SMD=-1.00,95%CI(-1.53,-0.47),P=0.0002]、SDS评分[SMD=-1.59,95%CI(-1.18,-1.31),P<0.00001]、SAS评分[SMD=-1.79,95%CI(-2.08,-1.49),P<0.00001]。此外,试验组不良反应发生率明显低于对照组。结论现有证据表明,火针可明显减轻PHN患者的疼痛强度,缓解焦虑,提高生活质量。受纳入研究数量和质量的限制,上述结论尚待更多高质量研究予以验证。