载体介导的siRNA抑制TIEG在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达

目的构建siRNA稳定表达载体,抑制TIEG基因在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达,为研究TIEG在瘢痕疙瘩等纤维化疾病发生中的作用提供有效的实验工具。方法根据siRNA设计原则设计并合成带有双向启动子具有转录功能的siRNA载体,转入成纤维细胞内,干扰TIEG基因的表达,利用载体可以发荧光观察转染效果,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测siRNA对TIEG基因的抑制效果。结果瘢痕成纤维细胞经RNAi沉默后TIEGmRNA表达下调。结论成功建立siRNA载体,并在瘢痕疙瘩成纤维细胞中抑制TIEG基因的表达。

封闭式负压引流联合前列地尔治疗糖尿病足溃疡的临床观察

目的探讨闭式负压引流(VSD)联合前列地尔输注治疗糖尿病足溃疡的临床疗效。方法选取2013年1月—2015年12月山西医科大学第一医院收治的糖尿病足溃疡病人77例为研究对象,随机分为观察组和对照组,观察组(38例)采用闭式负压引流治疗并联合前列地尔输注,对照组(39例)采用单一闭式负压引流治疗,比较两组疗效及溃疡的愈合时间。并采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测治疗前及治疗28d后创面肉芽组织中血管内皮生长因子(VEGF)和血小板源性生长因子(PDGF)。结果观察组治疗总有效率显著高于对照组,溃疡愈合时间显著短于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗28d后,观察组病人肉芽组织中VEGF和PDGF的表达水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在闭式负压引流联合前列地尔输注治疗糖尿病足溃疡优于单一闭式负压引流治疗,能有效促进肉芽组织的血管生成,使糖尿病足溃疡创面愈合速度加快,愈合率提高。

p53基因在病理性瘢痕成纤维细胞中的表达

目的 探讨 p5 3基因在病理性瘢痕成纤维细胞中的表达情况及其意义。方法 取手术切除的正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织各 8例为标本 ,通过细胞培养 6～ 8代后 ,应用反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)的方法检测 p5 3m RNA的表达。结果 p5 3m RNA在正常皮肤高表达 ,而在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组明显减弱 ,差异具有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 p5 3基因介导了瘢痕疙瘩成纤维细胞的异常增生 ,是病理性瘢痕发生的分子机制之一。

小干扰RNA抑制TIEG基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β信号通路的影响

目的用小干扰RNA(siRNA)封闭瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子(TGF)-β诱导早期基因(TIEG)的表达,观察对成纤维细胞TGF-β/Smads信号通路基因表达的影响。方法采用小分子RNA干扰(RNAi)技术,用脂质体将pSUPER.gfp/TIEG2转染原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测阻碍内源性TGF-β/Smads信号转导的条件下瘢痕疙瘩成纤维细胞TIEG、Smad2、Smad7以及α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、胶原ⅠmRNA表达水平。结果 pSUPER.gfp/TIEG2可有效干扰瘢痕疙瘩成纤维细胞中TIEG的表达,并使Smad2mRNA表达减弱,Smad7mRNA表达增强;同时α-SMA和胶原ⅠmRNA表达减弱。结论针对TIEG基因的siRNA干扰质粒转染瘢痕疙瘩成纤维细胞后能明显抑制TIEGmRNA表达,并使其调控TGF-β/Smads信号通路,一定程度上抑制了瘢痕疙瘩中成纤维母细胞转分化及细胞外基质的合成。

瘢痕疙瘩成纤维细胞中有关传导分子mRNA水平的实验研究

目的比较转化生长因子β/Smad蛋白(TGF-β/Smads)信号传导通路中有关传导分子mRNA在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达。方法切取确诊为瘢痕疙瘩患者的部分瘢痕疙瘩组织,正常者的皮肤作为对照组;细胞总RNA提取;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TIEG、Smad2、Smad7 mRNA的表达。结果瘢痕疙瘩中成纤维细胞TIEG、Smad2 mRNA表达远高于正常皮肤,Smad7 mRNA表达低于正常皮肤(P<0.05)。结论瘢痕疙瘩中的成纤维细胞表达TIEG增高,使表达Smad2增强,Smad7减弱,促使瘢痕生成。

液体伤口敷料用于治疗皮肤浅表损伤的疗效与安全性临床研究

皮肤浅表损伤是外科临床工作中常见的外伤类型,尤以颜面部等身体暴露部位多见,具有创伤面积较大、易感染、创口不规则等特点;同时常规换药疗程较长,程序繁琐,疗效不够肯定;并且愈后病灶易形成瘢痕[1].故临床上需要一种使用方便、安全性高、疗程短、疗效肯定的治疗方法及配套制剂.液体伤口敷料以聚乙烯醇、甘油等为主要成膜组分,加入冰片、松香等成分,融合易挥发的酒精和水等组成.本品通过富有弹性、张力、半透气性的胶膜封闭创面,在敷料与创面间营造成一个防水、低氧、微酸的湿润环境,抑制创面的细菌生长,促进纤维细胞的合成及刺激血管增生,从而达到不产生结痂,减轻伤口的疼痛,促进伤口愈合,迅速修复真皮的目的.本次临床研究采用多中心、随机、阳性平行对照研究.选择80 例以皮肤浅表损伤（如切伤、裂伤、擦伤、烧烫伤、缝合伤口）作为适应证的患者,评价液体伤口敷料治疗皮肤浅表损伤的有效性与安全性.

暴露部位烧伤整容方法介绍

由于烧伤等原因造成的瘢痕往往位于暴露部位。这些复杂瘢痕除了增生、挛缩会造成周围器官的移位和阻碍正常组织的发育外，还严重影响了患者的心理健康导致患者严重的身心发育障碍。

急性血糖波动加剧氧化应激引起糖尿病微血管并发症的研究

目的观察2型糖尿病患者血糖波动幅度、氧化应激水平与糖尿病微血管病变的相关性。方法将106例2型糖尿病患者分为3组,无糖尿病微血管病变组(DM组);合并单一糖尿病微血管病变组(DA1组)包括糖尿病肾病或糖尿病糖尿病视网膜病变;同时合并糖尿病肾病与糖尿病视网膜病变组(DA2组),行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),胰岛素释放,检测血脂、糖化血红蛋白(HbA1c)、丙二醛(MDA)等。结果 DA1组及DA2组的空腹及餐后2h血清MDA水平及△MDA值(2hMDA较0hMDA的增幅)均较DM组增加,差异有统计学意义(P<0.05),而且DA2组较DA1组升高,差异有统计学意义(P<0.05),△MDA与餐后血糖波动幅度(PPGE)、餐后2h血糖(2hPBG)浓度呈正相关(P<0.05)。结论血糖波动诱导氧化应激水平加剧,引起并加重2型糖尿病患者微血管病变。

A型肉毒毒素治疗腋臭单组率的Meta分析

目的:系统评价A型肉毒毒素皮下注射治疗腋臭的效果及安全性,为临床研究与应用提供参考。方法:计算机检索Pub Med,CNKI,VIP和万方数据资源系统数据库,收集所有A型肉毒毒素皮下注射治疗腋臭的临床试验及病例系列报告,提取资料后,采用R软件进行Meta分析。结果:A型肉毒毒素皮下注射治疗腋臭总体治愈率为84.20%[95%CI(78.51%,90.31%)],总体有效率为99.62%[95%CI(98.69%,100.00%)],总体不良反应率为1.28%[95%CI(0.58%,2.84%)]。结论:A型肉毒毒素用于临床患者腋臭的治疗中效果明显、不良反应低。

带信号肽人胰岛素原突变体的构建及在COS-7细胞中的表达

目的 :构建带信号肽人胰岛素原突变体的真核表达载体并在COS - 7细胞表达出成熟的人胰岛素。方法 :采用PCR体外定点突变技术 (PCR -SDM) ,将普通细胞内furin蛋白酶的识别和切割位点Arg -X -Lys -Arg -样序列 ,引入人胰岛素原C肽两端 ,同时加上信号肽、Kozak序列和限制性内切酶的酶切位点并克隆至载体pcDNA3.1(+)中 ,构建成人胰岛素原突变体的真核表达载体 ,经测序验证后转染COS - 7细胞 ,RT -PCR、Western印迹、放射免疫法检测其在COS - 7细胞中的表达。结果 :DNA测序结果表明在预期位点突变符合要求 ,经RT -PCR、Western印迹、放射免疫鉴定 ,构建的人胰岛素原突变体的真核表达载体转染的COS - 7细胞可表达、分泌人成熟胰岛素。结论 :构建了人胰岛素原突变体的真核表达载体 ,并成功地在COS -

2型糖尿病患者血糖波动对炎症反应的影响

目的通过观察餐后高血糖对超敏C反应蛋白的影响,分析血糖波动加剧炎症反应及与糖尿病微血管并发症的相关性。方法符合入组条件的2型糖尿病患者103例,根据合并微血管病变情况分为三组:DM组,无糖尿病微血管病变组;DA1组,合并单一糖尿病微血管病变组(包括糖尿病肾病或糖尿病视网膜病变);DA2组,同时合并糖尿病肾病与糖尿病视网膜病变组。测定口服葡萄糖耐量、胰岛素释放、血脂、糖化血红蛋白(HbA1c),采用免疫透射比浊法测定超敏C反应蛋白(hs-CRP)。结果 DA1组、DA2组的口服葡萄糖耐量试验后各点血糖值、餐后血糖波动幅度(PPGE)分别较DM组增加,差异有统计学意义(P<0.05);DA1组、DA2组空腹及餐后2 h hs-CRP水平均较DM组增加,差异有统计学意义(P<0.05);三组间hs-CRP差值相比差异无统计学意义(P>0.05)。多重线性回归分析,hs-CRP差值与空腹血糖,餐后2h血糖及糖化血红蛋白无明显相关性。结论 2型糖尿病患者随微血管病变的加重,血糖波动幅度、炎症反应水平都相应增加;2型糖尿病患者餐后血糖波动对机体短时间内的炎症反应无显著性影响。

人胰岛素原基因突变体的构建

目的 完成人胰岛素原基因的定点突变 ,使之能在普通细胞中被Furin蛋白酶识别去除C肽分泌成熟胰岛素。方法 采用PCR体外定点突变技术 (PCRsite directedmutagenesis ,PCR SDM) ,设计 4对引物 ,引入 5个Furin识别的突变位点 ,通过重叠延伸法PCR扩增 ,使人胰岛素原编码基因B10密码子由CAC突变为GAC ;C3密码子由GAA突变为AAA ;C4密码子由GCT突变为CGT ;C3 2密码子由CTT突变为CGT ,将扩增片段克隆入T载体并测序。结果 DNA测序结果表明在预期位点突变符合要求。结论 应用PCR诱导突变技术 ,在体外能准确、简便有效的诱导胰岛素原基因突变 ,使体外应用非内分泌细胞构建高效分泌成熟胰岛素的细胞克隆成为可能。

耳部烧伤并发耳软骨炎的防治

对 35例 5 9只耳部烧伤患者并发耳软骨炎的治疗及 16例 2 2只耳部烧伤患者采用爱疗素、10 %磺胺嘧啶银糊剂及氯霉素粉剂预防耳软骨炎发生的效果进行分析总结。认为 ,局部采用 10 %磺胺嘧啶银糊剂 ,爱疗素软膏及氯霉素粉进行治疗 ,对耳部创面有明显的抗感染、收敛 。

玻尿酸 你不知道的那些事

现代医学认为,皮肤老化主要原因在于皮肤各组织的细胞生长能力及活力减弱,导致完美皮肤所需的胶原蛋白以及弹性纤维等物质减少,从而影响皮肤的正常组织结构及物质比例。一般人从25岁开始,脸上的玻尿酸和胶原蛋白就在不断地流失,皮肤就会渐渐变得缺少弹性、光泽,产生越来越多的皱纹为了保持姣好的容颜,越来越多的人选择微整形。玻尿酸是一种无创安全并且立竿见影的微整形方式。但是你真的了解玻尿酸吗?

人胰岛素原突变体重组逆转录病毒及稳定包装细胞系的构建和鉴定

目的 构建携带人胰岛素原突变体的逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系。方法 采用PCR重叠延伸定点突变技术 ,将普通细胞内Furin蛋白酶的识别和切割位点Arg X Lys Arg 样序列 ,引入人胰岛素原C肽两端 ,同时加上信号肽、Kozak序列和酶切位点并克隆至逆转录病毒载体 pLXSN中 ,测序正确后转染包装细胞PA317,经G4 18筛选后挑选稳定生产病毒的细胞株 ,用NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果 测序证明胰岛素原cDNA的 5个预定位点成功突变 ,其上游加上了信号肽和增强表达的Kozak序列 ;G4 18筛选重组pL mPIN SN转染PA317细胞抗性克隆 ,其病毒滴度为 2 .6× 10 5CFU/ml,而且基因组PCR和病毒液的RT PCR都显示有 2 86bp的条带 ,提示构建携带人胰岛素原突变体的逆转录病毒载体以及稳定的包装细胞系成功。结论 成功构建了携带人胰岛素原突变体的逆转录病毒载体及包装细胞系 。

轮匝肌提肌腱膜固定法睑成形术在伴轻度上睑下垂重睑中的应用

目的探讨应用改良轮匝肌-上睑提肌腱膜固定法睑成形术在伴轻度上睑下垂重睑中的疗效。方法对15例行重睑术伴有轻度上睑下垂患者,采用改良轮匝肌上睑提肌腱膜固定法睑成形术。术中根据两侧睑缘高度调整上睑提肌腱膜固定高度,对术后效果进行随访观察。结果 15例均获得良好上提效果,上睑缘弧度自然,无严重并发症。结论改良轮匝肌-提肌腱膜固定法睑成形术在行重睑术伴有轻度上睑下垂的患者有良好效果。

5-Fu作用于瘢痕疙瘩成纤维细胞后Caspase-3变化的研究

目的:从蛋白层面证明瘢痕疙瘩、正常皮肤成纤维细胞中Caspase-3蛋白表达水平存在差异。通过5-fu(5-氟尿嘧啶)浓度梯度作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后,观察细胞中Caspase-3蛋白的表达,及细胞增殖、迁移和侵袭性变化。方法:临床手术获取瘢痕疙瘩、正常皮肤组织块,培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast KF)及正常皮肤成纤维细胞(normal skin fibroblast NSF),应用免疫组织化学及Western blot检测组织块及细胞中Caspase-3蛋白的表达;将5-fu(5-氟尿嘧啶)浓度梯度作用瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)后,应用Western blot检测Caspase-3蛋白的表达;CCK-8法检测KF细胞增殖情况;Trans-wells小室实验检测KF细胞的体外迁移和侵袭能力。结果:瘢痕疙瘩组织、正常皮肤组织、KF、NSF中均有Caspase-3蛋白的表达;KF中Caspase-3蛋白表达水平明显低于NSF,差异有统计学意义(P<0.05),瘢痕疙瘩组织块中Caspase-3蛋白表达水平明显低于正常皮肤组织,差异存在统计学意义(P<0.05);5-fu作用KF后,Western blot显示随着5-fu浓度的降低,KF中caspase-3蛋白表达减少,差异存在统计学意义(P<0.05)。CCK-8结果显示,随着5-fu浓度的降低,对KF增值活性的抑制不断减弱,差异有统计学意义(P<0.05);Trans-well侵袭结果显示侵袭到下室的KF数目随5-fu浓度的不断降低,而增多。结论:Caspase-3在KF中的表达明显低于NS,同时是5-fu诱导KF凋亡的关键因子,5-fu以浓度依赖方式促进Caspase-3活性增高,同时抑制KF增值、侵袭、迁移等肿瘤特性。

穿支皮瓣微循环血流量的动态观察及组织学研究

目的研究大鼠腹部穿支皮瓣形成后微循环血流量的动态变化及组织学改变。方法选取5只SD大鼠作为实验组,建立腹壁上动脉穿支皮瓣模型,在皮瓣蒂部、中段、远段选取3个测量点,于术前、术后不同时段进行微循环血流测量;于术后7d,分别切取皮瓣距蒂部中1/3处组织块及正常5只大鼠(对照组)腹部组织块,光镜下观察组织学改变并进行血管计数,外径、管壁厚度测量。结果皮瓣蒂部、中段、远段在皮瓣形成后的血流变化规律不尽相同,与正常大鼠腹部组织相比,穿支皮瓣内血管增多,微小动静脉管壁变薄。实验组内平均血管密度为(35.55±6.36)个/cm2,对照组为(28.67±5.39)个/cm2。实验组平均血管外径、平均管壁厚度分别为(43.04±8.69)μm和(10.20±3.03)μm,对照组为(32.87±7.80)μm和(15.95±4.71)μm,两组平均血管外径、平均管壁厚度差异有统计学意义(P<0.05)。结论穿支皮瓣形成后皮瓣内原有血管扩张和新生毛细血管长入是其成活的病理生理学基础。

皮肤常见恶性肿瘤中微量元素的分析

采用原子吸收光谱法检测皮肤鳞状细胞癌、基底细胞癌和恶性黑色素瘤中铜、锌、铁、铅、锰、硒元素的含量.结果表明,微量元素含量在皮肤常见恶性肿瘤中存在差异,其水平变化可能与皮肤恶性肿瘤的发生相关.