金钱草煎汤煮制雷公藤的炮制减毒工艺优选及其机制

目的研究旨在优选金钱草煎汤煮制雷公藤的最佳炮制减毒工艺,并基于核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路初步探讨炮制减毒的分子机制。方法以雷公藤与金钱草的质量比(因素A)、金钱草煎汤煮制液体积(因素B)和煮制温度(因素C)为考察因素,并设立清水煮制雷公藤炮制品作为对照组。在此基础上,将雷公藤生品及以上各炮制品分别以2 g·kg^(-1)(以雷公藤生药计)的剂量灌服小鼠21 d,末次给药后24 h取血和肝组织。采用试剂盒检测小鼠血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的水平并结合苏木素-伊红染色法对肝组织病理切片分析优选金钱草煎汤煮制雷公藤的炮制减毒工艺,并进一步采用蛋白免疫印迹法和酶联免疫吸附法通过对肝NF-κB及其下游肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)水平的检测分析,探讨其炮制减毒机制。结果雷公藤生品给药致使小鼠血清ALT、AST水平显著升高,并伴有肝细胞变性及炎细胞浸润,而经炮制品干预后均在不同程度上抑制了雷公藤诱导的生化指标及病理异常情况,且以A3B2C1逆转率最高;此外,雷公藤给药还显著上调了肝脏p-NF-κB p65蛋白表达水平及炎症因子TNF-α、IL-1β水平,而不同炮制品干预后可逆转,其中以A3B2C1逆转率最高。结论金钱草煎汤煮制雷公藤炮制减毒的最佳工艺为A3B2C1,即“雷公藤与金钱草质量比为60∶7.5,取37.5 mL的金钱草煎汤煮制液母液稀释至200 mL,煮制温度为110℃”,其减毒机制可能与抑制主要毒性靶器官肝NF-κB介导的炎症反应有关。

金钱草降低雷公藤致小鼠肾毒性的实验研究

目的基于核因子-κB(NF-κB)/环氧合酶2(COX-2)通路探讨金钱草对雷公藤诱导的小鼠肾毒性的影响。方法金钱草不同溶剂提取物分别连续灌胃给予雄性昆明小鼠14 d,1次/d,末次给药后24 h摘眼球取血,供测定小鼠血清肌酐(Cr)、尿素氮(UN)水平,随后立即处死小鼠,取各组肾组织,通过蛋白免疫印迹法检测小鼠肾脏中磷酸化NF-κB和COX-2的蛋白表达水平及试剂盒检测其下游相关炎性因子水平,探讨金钱草不同溶剂提取物对雷公藤诱导的肾毒性的减毒作用及机制。结果雷公藤诱导小鼠血清Cr、UN水平显著升高,并使肾脏p-NF-κB/COX-2及下游炎性因子一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平显著升高;而在给予金钱草不同溶剂提取物干预后,均在不同程度上逆转以上指标的异常,且以金钱草水提物的逆转率为最高。结论金钱草不同溶剂提取物均可降低雷公藤诱导的肾毒性,其减毒机制可能与抑制炎性反应有关。

滋阴清热功效助力生地黄抗抑郁作用探究

目的:基于阴虚内热证抑郁模型评价滋阴清热功效在生地黄抗抑郁中的作用及生地黄和梓醇抗抑郁的机制。方法:选用甲状腺素致阴虚内热证模型,并以阳虚、气虚、血虚作为对照,结合对常规抗抑郁药效测试指标、反映抑郁症的一些重要生物分子与滋阴清热功效指标的关联分析,综合评定滋阴清热功效在生地黄抗抑郁中的作用及生地黄和梓醇抗抑郁机制。结果:生地黄逆转了阴虚内热证模型小鼠的阴虚内热总得分,饮食量和体质量,血浆环磷酸鸟苷水平,冷热板中热区比例,肝脏、胸腺系数异常降低,肛温,饮水量,三碘甲状腺原氨酸、甲状腺素、环磷酸腺苷、Ca^(2+)-ATP酶、Na^(+)-ATP酶水平,冷热板跨区次数和跨区距离的异常升高(P<0.05,P<0.01)。生地黄和梓醇显著逆转了雌雄阴虚内热证模型小鼠的抑郁行为且没有性别差异,包括逆转了FST不动时间升高和SPT中糖水偏爱度降低(P<0.05,P<0.01),但生地黄对阳虚和气虚小鼠的抑郁行为无改善。生地黄和梓醇还显著逆转了阴虚内热证抑郁模型小鼠海马COX-2/NLRP3信号通路的异常上调(P<0.05,P<0.01)和海马齿状轮回区尼氏小体数量锐减和神经核阳性表达降低。此外,生地黄的滋阴清热药效和其对阴虚内热证抑郁模型小鼠的抗抑郁作用、海马COX-2/NLRP3信号通路蛋白的下调呈极高度正相关(r>0.8),生地黄和梓醇抗抑郁作用与其对海马COX-2/NLRP3通路的下调呈极高度正相关(r>0.8)。结论:滋阴清热功效助力生地黄的抗抑郁作用,生地黄改善阴虚内热型抑郁症的科学内涵可能涉及生地黄中的主要活性成分梓醇下调COX-2/NLRP3信号通路抑制神经元损伤。

白芍药汁炙黄药子的炮制减毒工艺及其机制研究

该研究首次探究白芍药汁炙黄药子的炮制减毒工艺,并进一步探索其减毒机制。采用3因素3水平正交试验法制备白芍药汁炙黄药子炮制品9个,以高效液相测定黄药子炮制前后主要肝毒性成分黄独素B含量下降为依据进行减毒工艺的初步筛选,在此基础上,选取黄药子生品及代表性的炮制品以2 g·kg^(-1)(相当于临床等效剂量)灌胃给予小鼠21 d,末次给药24 h后,取血清和肝组织,结合反映肝功能的血清生化指标及肝脏组织病理进一步筛选验证工艺,然后借助试剂盒法检测肝组织脂质过氧化及抗氧化指标,蛋白免疫印迹法检测小鼠肝脏醌氧化还原酶(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1)和谷氨酸半胱氨酸连接酶(glutamate-cysteine ligase,GCLM)蛋白表达进一步探究炮制减毒机制。结果表明白芍药汁炙黄药子各炮制品均能不同程度降低黄独素B的含量并改善黄药子诱导的肝损伤,其中A_(2)B_(2)C_(3)炮制工艺能使黄药子生品诱导的过高的谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)水平分别降低50.2%和42.4%(P<0.01,P<0.01),白芍药汁炙黄药子炮制品能不同程度逆转黄药子生品诱导的小鼠肝脏NQO1和GCLM的蛋白表达水平的降低(P<0.05或P<0.01),并能不同程度逆转小鼠肝脏丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平的升高以及谷胱甘肽(glutathione,GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)、谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)水平的降低(P<0.05或P<0.01)。综上,该研究表明白芍药汁炙黄药子的最佳炮制减毒工艺为A_(2)B_(2)C_(3)组合,即“10%的白芍药汁闷润黄药子饮片,在130℃炮制11 min”,并且减毒机制涉及增强肝脏NQO1和GCLM抗氧化蛋白表达及相关抗氧化酶水平。

生地黄药汁炮制降低雷公藤肝毒性的作用机制

目的:探讨生地黄药汁制法炮制对雷公藤诱导的肝毒性的减毒作用及其机制。方法:60只SPF级雄性ICR小鼠随机分为正常组、雷公藤生品组(2 g/kg)、生地黄药汁制雷公藤1、2倍剂量组(2、4 g/kg)、清水制雷公藤组(2 g/kg)和生地黄药汁辅料组(1 g/kg),各组均灌胃相应药物,1次/d,连续28 d,正常组给予等体积的溶媒,通过对小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及肝组织病理的检测分析,初步评价其减毒作用;进一步借助蛋白免疫印迹法及试剂盒方法,通过对肝凋亡相关蛋白及脂质过氧化和抗氧化指标的检测分析,评价其减毒机制。结果:与正常组比较,雷公藤生品组致使小鼠肝脏系数、血清ALT、AST水平均显著升高,出现肝细胞变性,并伴有炎性浸润及血管瘀血,显著上调肝B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)表达水平,下调肝Bcl-2蛋白表达水平,升高丙二醛(MDA)水平,降低超氧化物歧化酶(SOD)水平(P<0.01),而经1、2倍剂量生地黄药汁制雷公藤炮制品干预后均在不同程度上逆转了上述指标的异常(P<0.01,P<0.05)。结论:生地黄药汁制雷公藤可能通过抑制肝促凋亡蛋白、脂质过氧化水平,增强抗凋亡蛋白及抗氧化防御从而发挥保肝作用。

山茱萸抗抑郁作用研究

目的观测山茱萸抗抑郁作用。方法常规回流提取法制备山茱萸水提物,采用高效液相色谱法(HPLC)测定指标性成分马钱苷含量,在此基础上,将山茱萸水提物连续灌胃给予雄性小鼠14 d,通过开场实验、悬尾实验、强迫游泳实验等行为学测试方法观测山茱萸水提物的抗抑郁作用。结果山茱萸水提物的中、高剂量(150、300 mg/kg)以及阳性药盐酸氟西汀给药14 d后,均可显著降低小鼠在悬尾实验和强迫游泳实验测试的不动时间,而山茱萸低剂量(75 mg/kg)对此无显著影响,且各组之间在开场实验测试的水平运动得分和垂直运动得分相比均无明显差异。结论山茱萸水提物呈现出良好的抗抑郁作用,且具有明显的量效关系。

基于抗抑郁活性的百合地黄汤中生地黄与百合的配比优选及其机制

目的:基于抗抑郁活性优选百合地黄汤中生地黄与百合的最佳配比并初探其可能的机制。方法:100只雄性小鼠随机分为正常组、模型组、生地黄单煎液组、百合单煎液组、5种不同配比的百合地黄汤组(生地黄-百合5∶6、5∶5、5∶4、5∶3、5∶2)、盐酸氟西汀组。除正常组外,其余9组,连续21 d,采用慢性不可预知性温和应激法(CUMS)制备抑郁小鼠模型。生地黄单煎液组、百合单煎液组和5种不同配比的百合地黄汤组均以2 g·kg^(-1)分别灌胃相应的药物,盐酸氟西汀组灌胃盐酸氟西汀0.01 g·kg^(-1),正常组和模型组分别灌胃等体积生理盐水,连续21 d。通过行为学实验评价不同配比的百合地黄汤的抗抑郁作用;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)和酪氨酸激酶受体B(TrkB)的表达水平;羟胺法检测海马组织总超氧化物歧化酶(SOD)的水平;分光光度法检测海马组织还原型谷胱甘肽(GSH)的水平;比色法检测海马组织谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和谷胱甘肽S转移酶(GST)的水平;硫代巴比妥酸法检测海马组织丙二醛(MDA)的水平,初探其抗抑郁机制。结果:CUMS引起了糖水偏爱率显著下降及强迫游泳和悬尾不动时间均显著延长(P<0.01);而不同配比的百合地黄汤及生地黄、百合的单煎液均在不同程度上明显逆转了上述指标的异常(P<0.05,P<0.01),尤以配比为5∶6时对上述指标的影响最为明显;此外,CUMS引起了小鼠海马BDNF和TrkB的表达水平及SOD、谷胱甘肽抗氧化相关指标水平均显著降低(P<0.01),脂质过氧化产物MDA水平显著升高(P<0.01),而较优比的百合地黄汤(生地黄-百合5∶6、5∶5、5∶4)及生地黄、百合的单煎液均在不同程度上明显逆转了以上指标的异常(P<0.05,P<0.01)。结论:5种不同配比的百合地黄汤及生地黄、百合的单煎液均能产生抗抑郁作用,尤以生地黄-百合配比为5∶6时抗抑郁作用最强,且随着百合在方中占比减少,抗抑郁作用逐渐减弱,其机制可能涉及增强海马中枢神经营养水平和抗氧化防御能力。

马钱苷对神经系统相关疾病的生物活性研究

马钱苷是山茱萸所含的一个重要的药效成分和质控成分,具有广泛的生物活性。文章通过对中国知网(CNKI)、PubMed等国内外常用的专业数据库的检索分析,总结梳理了近年来关于山茱萸马钱苷对神经系统相关疾病的生物活性研究。研究结果表明,山茱萸马钱苷具有抗抑郁、改善学习记忆障碍、缓解神经性疼痛、缓解帕金森病、改善阿尔兹海默病、镇静、催眠、改善糖尿病神经病变、改善脊髓性肌萎缩症、缓解糖尿病并发抑郁症、缓解糖尿病并发焦虑症、抗脑缺血再灌注损伤、抗雪旺氏细胞焦亡等中枢神经系统疾病广泛的生物活性。以其抗抑郁研究为代表进行总结梳理显示,马钱苷(12.5,50 mg/kg)给药3 d对雄性小鼠悬尾实验测试呈现出抗抑郁作用,给药10 d对链脲佐菌素诱导的糖尿病雄性大鼠的抑郁样行为具有改善作用,其潜在的抗抑郁机制涉及调控5-羟色胺能神经系统、降糖以及抑制炎症等有关,并据当前研究现状提出建议:开展基于更长时程给药的抗抑郁药效及其量效关系研究、在炎症模型上考察马钱苷的抗抑郁样的作用及其机制、开展马钱苷抗抑郁作用的性别差异研究、以及开展马钱苷抗抑郁确切的分子靶点研究。该研究为山茱萸及其主要药效物质马钱苷在防治中枢神经系统相关疾病的进一步研发应用提供了文献支撑和思路启发。

炮制对雷公藤诱导的睾丸生殖毒性的减毒作用机制研究

目的考察不同炮制方法对雷公藤诱导的睾丸生殖毒性的减毒作用,并初探其减毒机制。方法在分别采用醋炙法、清炒法、以及煎汤(以金钱草、绿豆、白芍、甘草各自煎汤)炒炙法制备雷公藤各炮制品的基础上,通过对生殖毒性敏感指标血清睾酮的检测分析评价不同炮制方法对雷公藤灌服雄性小鼠28 d诱导的睾丸生殖毒性的减毒作用,进一步采用蛋白免疫印迹法和试剂盒方法通过对小鼠睾丸部分凋亡和氧化/抗氧化相关指标的检测分析初步评价其炮制减毒机制。结果雷公藤生品给药显著降低了小鼠血清睾酮的水平,醋炙法以及分别以金钱草、绿豆、白芍、甘草煎汤炒炙法炮制均能够使被雷公藤降低的血清睾酮水平显著逆转69.9%、122.4%、75.2%、101.4%、106.6%,而清炒法炮制对此无显著影响;进一步分析表明,雷公藤生品给药显著升高了小鼠睾丸丙二醛水平、以及Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平,并显著降低了睾丸总超氧化物歧化酶、微量还原型谷胱甘肽、谷胱甘肽-过氧化物酶、谷胱甘肽-S转移酶的水平、以及B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达水平,醋炙法以及分别以金钱草、绿豆、白芍、甘草煎汤炒炙法炮制均显著逆转了以上指标的异常,而清炒法炮制对这些指标的异常无显著影响。结论醋炙法以及分别以金钱草、绿豆、白芍、甘草煎汤炒炙法炮制对雷公藤诱导的小鼠生殖毒性均具有减毒作用,不同炮制方法的减毒作用由强到弱依次为金钱草煎汤炒炙法、甘草煎汤炒炙法、白芍煎汤炒炙法、绿豆煎汤炒炙法和醋炙法,而清炒法未体现出显著减毒作用;炮制减毒机制可能与抑制睾丸细胞凋亡、以及纠正睾丸的脂质过氧化/抗氧化失衡有关。

基于Nrf2/HO-1通路探讨炮制降低雷公藤心毒性的作用机制

该研究考察了不同炮制方法对雷公藤诱导的心毒性的减毒作用,并基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)通路初探炮制减毒机制。雷公藤生品及其各炮制品(清炒品、金钱草炒炙品、绿豆炒炙品、白芍炒炙品、甘草炒炙品、醋炙品)均以2 g·kg^(-1)(以生药计)的剂量被灌胃给予小鼠连续28 d,末次给药后24 h,通过对小鼠血清生化指标的检测分析评价其减毒作用,通过蛋白免疫印迹法对心组织Nrf2/HO-1通路关键蛋白的表达、以及试剂盒法对部分氧化/抗氧化相关指标的检测分析,初探其减毒机制。雷公藤生品给药诱导小鼠血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶、心脂质过氧化产物丙二醛的水平均显著升高(P<0.01),以及心Nrf2、HO-1蛋白表达水平及总超氧化物歧化酶、还原型谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽S-转移酶的水平均显著降低(P<0.01);而金钱草炒炙品、绿豆炒炙品、白芍炒炙品、甘草炒炙品、醋炙品给药后均在不同程度上逆转了雷公藤诱导的以上指标的异常(P<0.05,P<0.01),其中尤以金钱草炒炙品的逆转率为最高。综上,采用金钱草、绿豆、白芍、甘草分别炒炙,以及醋炙法炮制,均对雷公藤诱导的心毒性有减毒作用,且以金钱草炒炙法的减毒作用更佳,减毒机制可能与上调Nrf2所介导的心抗氧化防御并减轻氧化损伤有关。

从成分配伍和睾丸毒性探究“金钱草杀雷公藤毒”的相杀减毒机制

目的:基于成分配伍和睾丸毒性评价“金钱草杀雷公藤毒”的相杀减毒作用及机制。方法:基于成分配伍理念,以雷公藤的主要毒性成分雷公藤甲素(TP,0.4 mg/kg)以及金钱草的主要活性成分绿原酸(CA,20 mg/kg)、芦丁(Rut,12 mg/kg)、槲皮素(Que,10 mg/kg)为研究对象,分析比较TP与CA、Rut、Que、CARut、CA-Que、Rut-Que、CA-Rut-Que配伍前后对雄性小鼠睾丸毒性敏感指标血清睾酮和睾丸组织病理的影响,并采用蛋白免疫印迹法等检测p38 MAPK/ERK1/2/Nrf2/HO-1信号通路的关键分子。结果:TP灌胃14 d后显著降低小鼠睾丸系数和血清睾酮水平,使睾丸生精细胞大量坏死和核碎裂溶解,显著上调p38 MAPK并下调ERK1/2/Nrf2/HO-1通路,降低抗氧化物如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的水平(P<0.01),升高过氧化物丙二醛(MDA)的水平(P<0.01)。与TP单用比较,配伍CA-Rut、CA-Que、Rut-Que、CA-Rut-Que后不同程度上削弱了TP睾丸毒性,并不同程度逆转了p38 MAPK/ERK1/2/Nrf2/HO-1信号通路蛋白分子、抗氧化和过氧化物水平的异常(P<0.01,P<0.05)。结论:金钱草主要活性成分CA、Rut、Que的互相组合对雷公藤主要毒性成分TP诱导的睾丸毒性具有不同程度的相杀减毒作用,其中三者组合后的减毒作用最强;“金钱草杀雷公藤毒”的相杀减毒机制可能与成分配伍后调控p38 MAPK/ERK1/2/Nrf2/HO-1信号通路从而增强睾丸的抗氧化防御、减轻细胞坏死和核碎裂溶解有关。