目的运用浓度梯度倍增的异烟肼体外诱导获得BCG耐药菌株,并构建体外BCG感染巨噬细胞模型。方法选取野生型BCG,从1/8最低抑菌浓度开始,在异烟肼浓度倍增的7H9培养基上进行传代培养,逐步诱导菌株对异烟肼的耐药性;采用微量肉汤稀释法,进行...目的运用浓度梯度倍增的异烟肼体外诱导获得BCG耐药菌株,并构建体外BCG感染巨噬细胞模型。方法选取野生型BCG,从1/8最低抑菌浓度开始,在异烟肼浓度倍增的7H9培养基上进行传代培养,逐步诱导菌株对异烟肼的耐药性;采用微量肉汤稀释法,进行BCG药敏实验;通过耐药基因测序来验证耐药诱导是否成功;通过PMA刺激Thp1细胞,诱导分化成M0巨噬细胞;运用CCK实验,进行BCG感染巨噬细胞的细胞活性测定;通过流式细胞术分析野生型BCG或异烟肼耐药BCG感染巨噬细胞的极化状态。结果野生型BCG的MIC值为0.125μg/ml,异烟肼耐药BCG的MIC值>128μg/ml;异烟肼耐药基因inhA和katG测序后比对发现,inhA有T→G突变,katG有A→T突变;CCK实验确定合适的感染复数(multiplicity of infection,MOI)为=10;异烟肼耐药BCG较野生型BCG感染巨噬细胞后,其向M1型极化减少。结论采用异烟肼浓度梯度倍增方式,成功诱导了耐药BCG;确定了耐药BCG感染巨噬细胞的感染复数,为研究体内异烟肼耐药结核病提供了良好的体外细胞模型。展开更多
目的通过生物信息学在线程序及软件分析弓形虫动力蛋白轻链8a(TgDLC8a),预测其结构、免疫原性及抗原性。方法利用生物信息学在线软件ProtParam、SOSUI、ProtScale、TMHMM Server v.2.0、SignalP-5.0、TargetP1.1、Coils、SOPMA、NetPhos...目的通过生物信息学在线程序及软件分析弓形虫动力蛋白轻链8a(TgDLC8a),预测其结构、免疫原性及抗原性。方法利用生物信息学在线软件ProtParam、SOSUI、ProtScale、TMHMM Server v.2.0、SignalP-5.0、TargetP1.1、Coils、SOPMA、NetPhos 3.1Server、SWISS-MODEL、SYFPEITHI及DNAMAN软件、DNAStar软件等分析预测TgDLC8a蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜结构域、信号肽、亚细胞定位、可溶性、柔韧性、表面可及性、二级结构、蛋白翻译后修饰位点、三级结构及B细胞和T细胞抗原表位。结果TgDLC8a蛋白含有138个氨基酸,分子式为C723H1128N192O195S11,相对分子质量为15.92874×10^3,理论等电点为8.69,半衰期为30h,不稳定系数为37.09,脂溶性指数为88.33,总平均亲水性系数为0.025,属于疏水性蛋白;该蛋白有跨膜结构域,无信号肽切割位点,亚细胞定位预测可能是分泌蛋白;二级结构中α螺旋和β折叠分别占41.30%和23.91%,β转角和无规则卷曲分别占5.80%和28.99%;三级结构以二聚体的形式存在。该蛋白含有7个磷酸化修饰位点,其中4个丝氨酸磷酸化位点,2个苏氨酸磷酸化位点,1个酪氨酸磷酸化位点;含有7个B细胞抗原表位,7个CTL细胞抗原表位,11个Th细胞抗原表位。结论生物信息学预测TgDLC8a蛋白具有多个潜在的B细胞抗原表位及CTL细胞和Th细胞抗原表位,具有免疫原性和抗原性,可作为为抗弓形虫病疫苗候选蛋白。展开更多
基金Funded by the projects of Chinese National Key Program of Mega Infectious Disease of the National 12th Five-Year Plan(Nos.2013ZX10003002-001 and 2013ZX10004217)~~
文摘目的运用浓度梯度倍增的异烟肼体外诱导获得BCG耐药菌株,并构建体外BCG感染巨噬细胞模型。方法选取野生型BCG,从1/8最低抑菌浓度开始,在异烟肼浓度倍增的7H9培养基上进行传代培养,逐步诱导菌株对异烟肼的耐药性;采用微量肉汤稀释法,进行BCG药敏实验;通过耐药基因测序来验证耐药诱导是否成功;通过PMA刺激Thp1细胞,诱导分化成M0巨噬细胞;运用CCK实验,进行BCG感染巨噬细胞的细胞活性测定;通过流式细胞术分析野生型BCG或异烟肼耐药BCG感染巨噬细胞的极化状态。结果野生型BCG的MIC值为0.125μg/ml,异烟肼耐药BCG的MIC值>128μg/ml;异烟肼耐药基因inhA和katG测序后比对发现,inhA有T→G突变,katG有A→T突变;CCK实验确定合适的感染复数(multiplicity of infection,MOI)为=10;异烟肼耐药BCG较野生型BCG感染巨噬细胞后,其向M1型极化减少。结论采用异烟肼浓度梯度倍增方式,成功诱导了耐药BCG;确定了耐药BCG感染巨噬细胞的感染复数,为研究体内异烟肼耐药结核病提供了良好的体外细胞模型。
文摘目的通过生物信息学在线程序及软件分析弓形虫动力蛋白轻链8a(TgDLC8a),预测其结构、免疫原性及抗原性。方法利用生物信息学在线软件ProtParam、SOSUI、ProtScale、TMHMM Server v.2.0、SignalP-5.0、TargetP1.1、Coils、SOPMA、NetPhos 3.1Server、SWISS-MODEL、SYFPEITHI及DNAMAN软件、DNAStar软件等分析预测TgDLC8a蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜结构域、信号肽、亚细胞定位、可溶性、柔韧性、表面可及性、二级结构、蛋白翻译后修饰位点、三级结构及B细胞和T细胞抗原表位。结果TgDLC8a蛋白含有138个氨基酸,分子式为C723H1128N192O195S11,相对分子质量为15.92874×10^3,理论等电点为8.69,半衰期为30h,不稳定系数为37.09,脂溶性指数为88.33,总平均亲水性系数为0.025,属于疏水性蛋白;该蛋白有跨膜结构域,无信号肽切割位点,亚细胞定位预测可能是分泌蛋白;二级结构中α螺旋和β折叠分别占41.30%和23.91%,β转角和无规则卷曲分别占5.80%和28.99%;三级结构以二聚体的形式存在。该蛋白含有7个磷酸化修饰位点,其中4个丝氨酸磷酸化位点,2个苏氨酸磷酸化位点,1个酪氨酸磷酸化位点;含有7个B细胞抗原表位,7个CTL细胞抗原表位,11个Th细胞抗原表位。结论生物信息学预测TgDLC8a蛋白具有多个潜在的B细胞抗原表位及CTL细胞和Th细胞抗原表位,具有免疫原性和抗原性,可作为为抗弓形虫病疫苗候选蛋白。