连翘花黄色素对秀丽隐杆线虫在氧化应激下的保护作用

自由基过度引起的氧化应激是多种疾病发生的因素。连翘花黄色素(forsythia flower yellow pigment, FFYP)中含有大量的抗氧化活性物质,但其对氧化应激的抵抗性仍不清楚。本文首先通过化学方法检测FFYP的体外抗氧化活性;用细胞内抗氧化活性(cellular antioxidant activity,CAA)方法检测FFYP细胞内抗氧化活性;然后以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C.elegans)为模型,检测FFYP对线虫氧化应激抵抗力及体内抗氧化指标的影响;用Daf-16和Skn-1突变体线虫和qRT-PCR实验探究其作用机制。研究结果表明,FFYP具有1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基清除能力,铁离子还原能力和活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)清除能力,并且具有浓度依赖性。用500μmol/L的胡桃醌提供氧化应激压力时,FFYP能显著提高线虫在氧化应激下的寿命,表明FFYP可以提高线虫对氧化应激的抵抗力。进一步研究发现,FFYP可显著降低线虫体内ROS自由基含量,提高超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和过氧化氢酶(catalase, CAT)活性,增加还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量,表明FFYP通过提高线虫体内抗氧化防御系统活性清除自由基来提高线虫对氧化应激的抵抗力。突变体线虫实验显示,FFYP对线虫延长氧化应激下寿命的效应在Skn-1突变体线虫中完全消失,在Daf-16突变体中效应被减弱。qRT-PCR实验也显示,Daf-16和Skn-1靶基因的表达量均被提高。表明FFYP对线虫氧化应激抵抗力提高的作用是通过Daf-16和Skn-1共同作用。这预示着FFYP具有很好的抗氧化及抗应激药用价值,有潜力成为一种新的有生物活性的天然色素。

CD44中和抗体对黑色素瘤B16细胞生长及细胞糖酵解的影响

目的 CD44在肿瘤的生长及糖酵解代谢中起重要作用。文中旨在探讨CD44中和性抗体对鼠黑色素瘤B16细胞生长及糖酵解代谢的影响。方法首先设置对照抗体(50μg/m L)和不同浓度CD44抗体(2、10、50μg/m L)处理B16细胞,24 h后通过免疫印迹检测AKT通路活化情况。随后设置对照抗体(50μg/m L)和CD44抗体(50μg/m L)平行试验使用4μmol/L API-2预处理细胞,处理细胞48 h后通过免疫荧光观察乳酸脱氢酶A(LDHA)表达,比色法检测细胞上清乳酸含量。最后设置对照抗体(50μg/m L)组、API-2(4μmol/L)处理组、CD44抗体(50μg/m L)组和联合处理组(API-2+CD44抗体),作用B16细胞96 h后,通过MTT法检测细胞增殖,AO/EB和Annexin V染色检测细胞死亡及凋亡。结果与对照抗体B16细胞p-AKT水平(1.00±0.25)相比,2、10、50μg/m L CD44抗体呈浓度依赖性增强[2.51±0.32,3.89±0.46,4.07±0.42,P<0.01],与对照抗体相比,50μg/m L CD44抗体作用后LDHA表达增强(2.13±0.24)倍。中和CD44后B16细胞LDHA荧光表达增强,且细胞上清乳酸含量升高,与对照抗体相比,CD44抗体(50μg/m L)96 h后细胞上清乳酸含量升高[(35.32±3.24)mmol/L vs(56.34±8.19)mmol/L,P<0.01]。联合使用AKT通路抑制剂API-2处理后,CD44抗体所致LDHA表达增强现象明显受到抑制,且对照抗体和CD44抗体组乳酸含量均下降;与对照组相比,CD44抗体细胞上清乳酸含量差异无统计学意义[(20.12±4.35)mmol/L vs(22.65±5.16)mmol/L,P>0.05]。MTT检测结果显示,与对照组细胞增殖率[(103±12.91)%]比较,API-2组[(84.87±19.35)%]、CD44抗体组[(71.35±16.23)%]和联合处理组[(41.16±9.15)%]均明显降低(P<0.05)。细胞凋亡检测显示,与对照抗体组凋亡率[(5.23±0.96)%]相比,API-2组[(13.65±4.27)%]、CD44抗体组[(19.21±3.53)%]和联合处理组[(43.21±7.87)%]均显著升高(P<0.01)。结论体外中和B16细胞CD44功能抑制细胞生长但促进AKT通路介导的糖酵解代谢,抑制AKT通路可增强CD44抗体对肿瘤细胞的杀伤作用。