马氏珠母贝Kelch-like基因的序列及其SNP位点分析

为了探究马氏珠母贝Pinctada fucata martensii Kelch样基因(Kelch-like)的功能,对Kelch-like基因序列及其SNP位点进行了分析。结果表明:马氏珠母贝Kelch-like序列全长为2127 bp,其中,5′UTR为58 bp,3′UTR为44 bp,其开放式阅读框长度为2025 bp,可编码674个氨基酸;预测其Kelch-like氨基酸序列含有1个BTB结构域、1个BACK结构域和2个Kelch结构域;马氏珠母贝Kelch-like与美洲牡蛎Kelch-like氨基酸序列的一致性最高(35%),其次为虾夷扇贝(32.05%);马氏珠母贝Kelch-like氨基酸序列的BTB、BACK保守性较高,且Kelch具有保守的GG位点;Kelch-like基因在马氏珠母贝边缘膜组织的相对表达量显著高于其他组织(P<0.05),且贝壳损伤后6、12、120 h时该组织中的基因表达量显著上调(P<0.05);马氏珠母贝Kelch-like基因共有56个SNP位点,其中,31个SNP位点为中度多态,其余位点为低度多态;10个SNP位点形成了1个单倍块,为4种单倍型,其中单倍型AATCTGTCGG为优异单倍型,其壳质量性状显著大于单倍型AGCCTACCGA和单倍型AGCCTACTTA(P<0.05)。研究表明,马氏珠母贝Kelch-like可能参与贝壳棱柱层的形成,其单倍型AATCTGTCGG具有作为以壳质量为目标的育种标记的潜力,该结果对于选育具有优良经济性状的马氏珠母贝具有重要意义。

不同温度下马氏珠母贝干露耐受能力及其免疫相关基因表达的变化

【目的】探究马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)对干露胁迫的响应,为马氏珠母贝健康养殖和遗传育种提供基础资料。【方法】在不同温度下对马氏珠母贝进行干露胁迫,探究温度对马氏珠母贝干露耐受的影响;筛选出马氏珠母贝干露胁迫敏感组和耐受组,比较两组的免疫相关基因表达量和植核后休养期存活率。【结果】(1)22~34℃条件下,马氏珠母贝干露耐受能力随温度升高及干露时间延长而降低;(2)22℃下,S组和T组的脯氨酸羟化酶(PHD)、葡萄糖转运蛋白(GLUT)、髓样分化因子(MYD88)、热休克蛋白(Hsp70、Hsp20)和凋亡抑制因子(cIAP)6个基因在干露过程中表达量基本呈上升趋势,组间差异显著(P<0.05);(3)植核试验结果表明耐受组植核后休养期的存活率显著高于敏感组(P<0.05)。【结论】马氏珠母贝在高温环境下干露耐受能力降低,在适温条件下耐受组比敏感组表现出较高的存活率。

光裸星虫Cdc25基因的克隆及在卵母细胞中的表达分析

细胞分裂周期蛋白25 (cell division cycle 25, Cdc25)是一种重要的双特异性磷酸酶,对卵母细胞减数分裂进程和胚胎发育具有重要的调控作用。本研究利用RACE技术克隆获得了光裸星虫(Sipunculus nudus) Cdc25(Sn-Cdc25)cDNA全长。Sn-Cdc25全长为4 130 bp,其中3’UTR为1 849 bp,5’UTR为427 bp,开放阅读框为1 854 bp,编码617个氨基酸。序列分析显示,Sn-Cdc25蛋白分子量为69.58 kD,具有M相诱导磷酸酶结构域(M-phase inducer phosphatase domain)和硫氰酸酶同源结构域(rhodanese-like domain)两个典型的Cdc25蛋白结构域,以及能催化去磷酸化过程的活性位点序列HCX_(5)R。多序列比对发现Cdc25同源蛋白的C端同源性较N端的高。三级结构预测表明Cdc25同源蛋白及其活性位点的三级结构构象高度相似。motif分析中共发现5个motifs,其中motif 1和motif 2分别为Paxillin LD基序和MYND结构域结合基序。系统进化树分析显示,无脊椎动物和脊椎动物的Cdc25分别聚为两大支。RT-qPCR结果显示,在不同发育时期卵母细胞中,Sn-Cdc25的表达差异显著,具有两个峰值,从卵黄形成初期至卵黄旺盛合成后期(O1~O3)Sn-Cdc25表达量上升可能与Cdc25促进DNA的复制过程相关;而从体腔液中进入到肾管后(O4~O5),表达量的迅速上升可能有利于成熟促进因子(maturation promoting factor, MPF)的活化。研究结果为深入认识星虫动物卵母细胞发育调控机制和优化人工繁育技术积累基础资料。