羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank中的羊口疮病毒基因组(AY386264)ORFVgORF121及ORFVgORF122基因的DNA序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计一对引物和一条TaqMan探针,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。该方法组内及组间重复试验变异系数均低于2%,上机检测时间不超过40min,检测灵敏度达1×101copies/μL,山羊痘及禽痘病毒特异性检测均为阴性,标准曲线的相关系数(R2)为0.998 088,线性关系良好。应用该方法对云南保山和普洱送检的羊口疮临床组织病料进行绝对定量检测,送检样品抽提DNA中病毒拷贝数分别为1.35×108copies/μL和9.62×107copies/μL。结果表明,研究建立的羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、稳定、快速和安全的特点,适于羊口疮临床组织样品的早期检测及常规病原监测。

羊口疮病毒SYBR GreenⅠ染料法实时荧光定量PCR的建立及运用

为了建立一种特异、灵敏、快速、重复性好和检测成本低的羊口疮病毒检测方法,试验根据GenBank中羊口疮病毒(登录号为AY386264)ORFVgORF102基因DNA序列,应用Beacon Designer7.0软件设计、合成了1对SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR引物。结果表明:经反应条件优化后,建立了羊口疮病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR,最佳引物浓度为400 nmol/L,最佳模板浓度为3.61～36.1 ng/μL或2.385×107～2.385×108copies/μL;该方法组内及组间变异系数均小于2%,检测灵敏度可达到3.61 pg/μL或2.385×104copies/μL,上机检测时间不超过1 h;运用该方法对2份临床样品进行定量检测,样品抽提DNA中病毒拷贝数分别为1.4×109copies/μL和8.7×108copies/μL。说明试验所建立的羊口疮病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR具有特异、灵敏、快速、重复性好和检测成本低等优点,适合于羊口疮病毒临床样品的检测。

羊口疮病毒云南流行毒株的分子鉴定

2010年底至2011年初,云南省普洱市放牧山羊发生以口唇、眼、鼻、乳房、肛门、外阴部出现丘疹、水疱,继而形成脓疱、痂皮及痂垢为特征的传染病,经PCR、SYBR Green I及TaqMan real-time PCR检测,结果PCR扩增出1225bp预期大小的片段,SYBR GreenI及TaqMan real-timePCR均扩增出标准的S形曲线,并根据绝对定量标准曲线,计算出送检组织样品抽提DNA中羊口疮病毒含量为1.83241×107copies/μl,同时将PCR产物进行测序,所得序列与NCBI GenBank中羊口疮病毒基因组(AY386264)ORFVgORF010基因的DNA序列符合率达99%(967/981bp),最终确诊引起此次山羊疫病流行的病原为羊口疮病毒。

普洱市猪伪狂犬病的流行病学调查与分析

本研究旨对当前普洱市猪伪狂犬病流行、分布及危害现状,对全市10县(区)的194个养猪场(户)监测3 219份猪血清,进行全面、系统地流行病学调查和自然病毒感染抗体的监测,界定了猪伪狂犬病是当前对普洱市养猪业危害严重的重要疫病之一,发现现阶段猪伪狂犬病流行的主要临床表现形式以繁殖障碍综合征和疫病发生引起一定数量新生仔猪发病、死亡为特点。监测中型养猪场、小型养猪场、散养户,其猪伪狂犬病阳性率分别为48.82%、33.33%、17.85%。掌握猪伪狂犬病的发病时间、空间及群间分布现状及流行病学特点,认识其对疫情控制所产生的重大影响,分析疫病成因,发现总体上猪伪狂犬病主要发生于中型和小型猪场,该疫病的阳性率可能与种猪的饲养时间长短以及养殖规模有关。在此基础上,进一步研究建立当前形势下及时、快速、有效防控猪伪狂犬病的综合防制模式是——重点加强中、小型猪场饲养管理和引种检疫;定期监测,扑杀淘汰野毒感染猪;经常性消毒和严格按免疫程序进行预防接种;猪场周围经常性灭鼠为主要内容的综合防制措施。

浅谈山羊传染性角膜结膜炎的综合防治

通过2013年7月，我在西盟县下乡蹲点期间，勐梭镇里拉村、班母村和他朗村5户农户饲养的黑山羊发病事例，论述其病因、临床症状、诊断方法，并提出治疗和预防措施，以为该病的防治提供参考。

浅谈牛巴氏杆菌病综合防控措施

牛巴氏杆菌病是病源菌侵入牛体，进入血液，从而引起病牛高热、肺炎、急性胃肠炎及内脏器官广泛性出血传染病。在雨水较多、潮湿、拥挤、寒冷、闷热、气候骤变季节容易暴发。西盟是牛巴氏杆菌病老疫区，笔者曾在西盟对牛巴氏杆菌病诊治、防控工作，针对牛巴氏杆菌病病源、症状、病理剖检变化的分析，结合西盟县牛巴氏杆菌病流行特点，提出防治措施。