氰戊菊酯对小鼠精子顶体反应影响及作用机理

目的 观察氰戊菊酯对小鼠精子顶体反应的影响并探讨其作用机理。方法 采用顶体反应诱导试验结合细胞染毒 ,以考马斯亮蓝染色法判定精子顶体反应。结果 孕酮或A2 3187诱导的小鼠精子顶体反应 ,可被 2mmol·L- 1EDTA和 1.8mmol·L- 1Mn2 +相应地完全抑制 ;5 0 μmol·L- 1氰戊菊酯则有明显抑制作用。实验还发现氰戊菊酯在精子获能前或后加入 ,对孕酮诱发顶体反应的抑制率不同 ,获能前抑制率低 ,二者存在显著性差异。结论 氰戊菊酯对小鼠精子顶体反应有抑制作用 。

哺乳动物及人精子的Ca^(2+)通道与顶体反应

在精子生理活动中 ,Ca2 +通道起重要作用。近年来 ,随着荧光探针 ,分子生物学以及电生理技术的飞速发展 ,人们更明确地认识到 Ca2 +通道的重要性 ,特别是在顶体反应中的作用 ,并对其功能性亚单位有了一定的了解。在参与精子顶体反应的众多 Ca2 +通道中 ,电压依赖性 Ca2 +通道倍受重视。同时 。

小鼠粗线期精母细胞T型Ca^(2+)通道电流特性及氰戊菊酯对它的影响

[目的 ]建立小鼠粗线期精母细胞T型Ca2 + 通道电流膜片箝记录方法 ,并观察拟除虫菊酯类杀虫剂氰戊菊酯的作用。[方法 ]应用膜片箝技术 ,全细胞方式下记录小鼠粗线期精母细胞T型Ca2 + 通道电流 ,并用各种特异的通道阻断剂和激动剂确定电流特性 ,与体细胞T型Ca2 + 通道电流比较 ;通过胞外给药 ,观察氰戊菊酯对T型Ca2 + 通道电流影响。 [结果 ]当以Cs+ 、TEA+ 阻断K+ 电流 ,记录到一 -6 0mV激活 ,-2 0～ -30mV达到最大值的内向电流 ,该电流呈快速激活快速失活。加入Na+通道阻断剂TTX ,对记录的内向电流无影响 ,表明该内向电流不含有Na+ 电流成分 ,是由Ca2 + 通道开放产生。另该电流对L型Ca2 + 通道激动剂BayK 86 44不敏感 ,但对Cd2 + 、Nifedipine两种Ca2 + 通道阻断剂较敏感 ,提示其为T型Ca2 + 通道电流。与体细胞典型T型Ca2 + 通道比较 ,粗线期精母细胞T型Ca2 + 通道有自身特点。研究氰戊菊酯对记录的T型Ca2 + 通道电流的作用显示 :5 0 μM·L-1氰戊菊酯在加入后 3～ 5min开始抑制T型Ca2 + 通道电流 ,于 9～ 10min达到最大抑制作用 ,并有明显的剂量 反应关系。 [结论 ]小鼠粗线期精母细胞主要存在T型Ca2 + 通道 ,而不含有L型Ca2 + 通道 ,但与典型T型Ca2 + 通道电流比较 ,精母细胞的T型Ca2 + 通道电流又?

小鼠精母细胞钙通道特性及硝苯地平的作用

目的 为了建立一个合理、客观评价药物或毒物对生殖系统影响的细胞模型 ,研究了机械分离、未经酶消化的小鼠精母细胞Ca2 + 通道特性及硝苯地平对其的作用。方法 采用全细胞膜片钳技术。结果阻断K+ 电流后 ,当钳制电位 -90mV、指令电压 -80～ +1 0mV、步阶电压 1 0mV时 ,记录到Ca2 +电流 ,二价无机阳离子对Ca2 + 电流的抑制作用Ni2 +>Cd2 + ,而L型Ca2 + 通道激动剂BayK8644对电流无任何影响。分析小鼠精母细胞上记录的Ca2 + 电流为T型Ca2 + 通道开放产生。L型Ca2 + 通道阻断剂硝苯地平对精母细胞Ca2 + 电流有明显的抑制作用 ,半数最大抑制浓度为 0 .3 9μmol·L-1,而且细胞外液冲洗恢复缓慢 ,这支持了二氢吡啶类药物可用于男性避孕。结论 机械分离。

氰戊菊酯对小鼠精子体外获能的影响及机制探讨

[目的 ]观察氰戊菊酯 (fenvalerate ,Fen)对小鼠精子体外获能的影响并探讨其作用机制。 [方法 ] 2 0 0 μl小鼠精子细胞悬液加入不同终浓度Fen染毒后 ,CO2 孵箱 3 7℃培育 2h ,以金霉素 (chlortetracycline ,CTC)荧光染色后涂片观察小鼠精子体外获能培养后B型精子的发生率。[结果 ]以终浓度为 0、0 .62 5、1.2 5、2 .5、5 .0、10 .0、2 0 .0 μmol·L-1的Fen处理小鼠精子 ,其B型精子发生率分别为 ( 5 5 .0 5± 0 .43 ) %、( 5 2 .0 2± 1.2 9) %、( 4 7.13± 0 .87) %、( 4 0 .0 8± 0 .3 2 ) %、( 3 5 .79± 0 .88) %、( 2 8.66± 0 .96) %、( 2 7.89± 1.5 6) % ,半数有效剂量 (ED50 )为 5 μmol·L-1,其作用呈剂量 反应关系。同时Fen以时间依赖方式抑制B型精子发生率。进一步观察到 2 .5、5 .0、10 .0、2 0 .0 μmol·L-1的Fen组小鼠精子 ,与对照组相比 ,其精子细胞膜脂质流动性下降 [以 1,6 二苯已三烯 ( 1,6 diphenyl 1,3 ,5 hexatriene ,DPH )为荧光探针 ] ,作用呈剂量 反应关系。 [结论 ]氰戊菊酯抑制小鼠精子体外获能 ,其作用机制主要是氰戊菊酯降低了精子细胞膜脂质流动性。

精子获能中HCO_3^-介导的信号转导途径

获能是哺乳动物精子受精前必须经历的一个生理过程。获能涉及精子膜性质的改变、Ca2 +通道活化、胞内cAMP增加 ,以及蛋白酪氨酸磷酸化 (PTP)等。实验证明 ,HCO- 3在该过程中起重要作用。本文旨在介绍HCO- 3介导的cAMP信号转导途径。

氟桂利嗪对小鼠生精细胞T型Ca^(2+)通道的作用

目的:研究二苯烷基氨类衍生物氟桂利嗪(F lu)对小鼠生精细胞T型钙电流(ICaT)的影响。方法:采用急性机械分离的小鼠生精细胞,应用膜片钳全细胞记录技术,观察F lu对ICaT的影响。结果:钳制电位为-90 mV、刺激电压为-30 mV时,F lu(0.1、1、10、100μmol/L)可抑制小鼠生精细胞Ca2+电流,抑制率分别为(23.34±2.76)%、(46.04±3.52)%、(62.52±3.70)%、(73.52±3.12)%(P<0.05);F lu对T型Ca2+通道的半数最大抑制浓度为0.29μmol/L。结论:F lu对生精细胞T型Ca2+通道有阻断作用,呈浓度依赖性;Cav3.2是生精细胞T型Ca2+电流的主要贡献者。

钾离子外流在小鼠精子获能中作用

目的观察钾离子外流在小鼠精子体外获能的作用及机制。方法以金霉素(chlortetracycline,CTC)荧光染色后涂片观察小鼠精子体外获能率,进一步应用膜片钳技术在小鼠生精细胞膜上记录延迟整流钾离子电流(IDRK)。结果终浓度为50 nmol/L的钾离子通道载体缬氨霉素处理小鼠精子,其B型精子发生率(%)与对照组相比显著增加(n=10,P<0.05);50 nmol/L缬氨霉素显著增大小鼠粗线期精母细胞延迟整流钾离子电流,上调其I-V曲线。结论缬氨霉素通过激活延迟整流钾通道,增加胞内钾离子的外流,促发小鼠精子体外获能。

黔北地区优质水稻品种筛选试验

为筛选出适宜黔北地区种植的优质水稻品种,以9个优质水稻品种为试验材料,开展了筛选试验,分析了各品种的生育期、产量及其构成因素、干物质积累及物质转化速率。结果表明,不同品种的全生育期在150~156 d之间,播种至抽穗历期在116~122 d之间,以川优2115全生育期最长(156 d),旌3优348全生育期最短(150 d)。以产量为指标进行聚类分析,将参试品种分为高产、中产和低产3个类型,其中高产类型水稻品种是川优6203、川优2115、鹏优1269,中产类型品种是宜香优2115、荃优鄂丰丝苗、旌3优348,低产类型品种是大粒香、盛韵香禾、滇屯502。高产类型品种平均产量分别较中、低产类型品种增产1216.00、3441.70 kg/hm^(2)。对不同产量类型品种的生育期、产量构成因子和群体质量进行分析可知,川优6203、川优2115、鹏优1269具有有效穗多、结实率高、生育后期干物质积累量大、叶和茎鞘物质转化率高等特点。本试验结果可为黔北地区优质稻品种选育和遗传改良提供参考。

小鼠粗线期精母细胞钙离子通道膜片箝方法的建立

应用机械分离获得小鼠单个精母细胞 ,采用全细胞膜片箝技术记录 Ca2 +离子通道电流。结果表明 :1阻断 K+电流后 ,当钳制电位 - 90 m V、指令电压 - 6 0～ + 10 m V、步阶电压 10 m V时 ,可记录到内向电流 ;2内向电流在 - 30～ - 40 m V达到最大值 ;3在细胞外液中加入 4 μmol/ L TTX,对记录电流无影响 ,表明此电流不含有 Na+电流成分 ,为 Ca2 +电流。

重穗型水稻恢复系黔恢198的选育与应用

选育和应用重穗型水稻品种是实现水稻高产的有效途径。黔恢198是贵州省农业科学院水稻研究所利用黔恢785和R894杂交,F4选择株系与华占改良株系杂交,于2017年表现稳定的重穗型恢复系。黔恢198与广8A配组育成的三系杂交稻新组合广8优198丰产稳产性好,于2022年通过贵州省农作物品种审定委员会审定;与黔111A配组育成的早熟品种黔优198已通过贵州省农作物品种审定委员会的初审公示,将于2023年完成审定。分析重穗型水稻恢复系黔恢198的选育与应用情况,以供相关研究人员参考,助力实现水稻高产。

贵州地方水稻广亲和资源筛选

【目的】探明贵州地方水稻品种资源的广亲和基因,为籼粳杂交水稻育种提供依据。【方法】利用S5^(n)、S5^(i)和S5^(j)序列存在136 bp差异,采用分子标记辅助筛选贵州地方水稻广亲和资源。【结果】利用分子标记qh在609份贵州地方水稻种质资源中筛选到糯旱谷⁃1、本地燕麦谷、旱谷、纳包糯旱稻2号、弼佑旱稻、双江旱稻、八百粒和旱禾⁃3共8份广亲和水稻资源。通过分子标记检测8份广亲和水稻资源S5位点OFR3、OFR4和OFR5的基因型,其中八百粒基因型为+⁃n,为广谱性广亲和品种。【结论】贵州地方水稻资源品种八百粒为广谱性广亲和品种,qh标记可用于广亲和基因资源筛选。

水稻中胚轴伸长性状QTL分析

【目的】水稻中胚轴伸长可以在直播方式下为种子出苗提供顶土能力,培育中胚轴长的水稻品种对水稻直播技术的推广具有重要意义。【方法】将籼稻品种贵9B和粳稻品种热研2号杂交衍生的100个RILs及籼稻品种V20B和粳稻品种CPSlo17杂交衍生的150个RILs为材料,于2020年种植于海南三亚,于2021年种植于贵州贵阳,连续2年收获种子后通过测定中胚轴长度,以2套重组自交系(recombinant inbred lines,RILs)为作图群体进行QTL定位分析。【结果】以贵9B和热研2号为亲本的RIL群体的QTL定位结果表明,种子发芽后,连续2年定位到3个QTL分别位于第8和第10染色体上,LOD值为2.51、2.63和3.42,可解释18.17%~20.68%的表型变异,等位基因均源于贵9B。以V20B和CPSlo17作为亲本构建的RIL群体2年定位到4个QTL,分别位于第2、4、7染色体上,LOD值分别为3.15、3.59和13.59,可解释7.37%~10.53%的表型变异,等位基因均来源于V20B。【结论】2套群体连续2年定位到的QTL位点均有一个位点重叠,说明该位点的QTL在2个生态环境下较稳定,对后续精细定位和克隆中胚轴伸长相关基因具有重要参考价值,为研究水稻中胚轴伸长分子机制及水稻直播育种提供了新的观点和见解。

2015年黑龙江省水稻产区稻瘟病菌生理小种鉴定

稻瘟病是寒地水稻种植区的主要病害之一。为明确黑龙江省水稻主产区稻瘟病菌生理小种的种群结构及变化趋势,利用7个中国统一鉴别寄主对2015年在黑龙江省部分稻作区采集并分离得到的99个稻瘟病单孢菌株进行鉴定,共鉴定出6个群17个生理小种。其中,ZA和ZD为黑龙江省水稻产区的主要优势菌群,出现频率分别为60.61%、18.18%;ZA49为优势小种,出现频率为23.23%,其次是ZD1,出现频率为18.18%,再次是ZA1,出现频率为16.16%。不同地区生理小种的类型及其组成不同。

抗稻瘟病恢复系黔恢101选育及安优101的应用

稻瘟病是危害水稻生产的主要病害,分子标记辅助选择(MAS)已经成为选育抗病品种的重要方法。本研究以含有广谱抗性基因pi9的DW808为供体亲本,导入区域适应性好的受体亲本R894;经过分子标记检测、田间自然鉴定、人工接种鉴定,选育出中抗稻瘟病的恢复系黔恢101;其组合安优101于2017年参加贵州省水稻区域试验,2019年通过贵州省审定。

水稻株型相关性状QTL定位研究

以粳稻日本晴(NIP)和籼型超级稻中嘉早17(YK17)构建的重组自交系(recombinant inbred line,简称RIL)群体为研究材料,于2015-2016年分3季种植于杭州和海南,成熟期考察株型相关性状(分蘖数、株高、剑叶长、剑叶宽、剑叶长宽比、穗长)。并应用这2种群体已构建的分子连锁图谱,对株型相关性状进行QTL分析,共检测到34个相关QTL,分布于除第9染色体外的其他染色体上,LOD值介于2.68~14.39之间,表型贡献率变幅为4.00%~26.62%,3个环境下重复检测到10个QTL。对QTL与环境互作分析发现,24个QTL与环境互作,其中2个QTL对环境敏感。株型相关性状QTL主要分布在第1、2、4、7染色体上,呈簇分布。qPH1、qLFL1和qLFLW1a在3个环境下重复检测到,且贡献率较高,有待于进行克隆和功能分析。

两个垩白突变体的鉴定及突变基因的图位克隆

【目的】研究两个水稻垩白突变体胚乳垩白的形成机制,为稻米品质改良提供理论基础。【方法】以从中花11的EMS突变体库中筛选出的两个稳定遗传的垩白突变体eb6、eb7为材料,对其进行农艺性状、稻米理化性质和遗传学分析,并利用eb6与南京11衍生的F2群体对控制垩白的基因进行图位克隆。同时对候选基因的表达模式及淀粉合成相关基因在突变体及野生型中表达情况进行了分析。【结果】与野生型相比,两个突变体胚乳中央部位呈现白色且不透明,淀粉复合颗粒形状不规则且排列疏松,而突变体胚乳边缘部位与野生型无异,都为半透明状,淀粉复合颗粒呈多面体且排列致密。相对于野生型,突变体eb6、eb7成熟种子中的直链淀粉含量和胶稠度显著降低,蛋白质含量显著升高。RVA谱分析显示突变体淀粉黏滞性明显低于野生型。同时,支链淀粉聚合度分析显示突变体eb6中聚合度(DP)小于16的短链显著增加,DP为16~23的中长链显著减少。遗传分析表明突变体eb6、eb7胚乳垩白表型由单隐性核基因控制,并且它们为一对等位突变体。利用突变体eb6与南京11杂交衍生的F2群体将突变体基因定位在第1染色体长臂上物理距离86.6 kb的区间内。该区间包含22个开放阅读框(ORF),其中ORF13编码腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶大亚基2(Os AGPL2)。序列分析发现eb6与eb7分别在Os AGPL2第3、第7外显子上发生1个单碱基替换,并分别导致一个氨基酸替换。RT-PCR及原位杂交结果显示,Os AGPL2主要在水稻发育中的籽粒中表达。同时Os AGPL2的突变导致了多个淀粉合成相关基因在水稻籽粒灌浆过程中的表达模式发生改变。【结论】突变体eb6、eb7籽粒胚乳出现严重垩白表型为Os AGPL2突变所致。本研究进一步证明了Os AGPL2在调控水稻籽粒胚乳中淀粉的合成、淀粉复合颗粒的形成及稻米理化性质的平衡中起着重要的作用。

重穗型杂交水稻新品种成优33的选育

为推进贵州水稻生产上品种的新老更替,同时满足西南稻区特殊生境对重穗型水稻品种的需求,贵州省农业科学院水稻研究所以自育恢复系黔恢33与引进不育系成丰A配组选育成重穗型水稻新品种成优33(单穗重量达5.05g)。该品种在2016—2017年区域试验2年平均产量660.93kg/667m^2,比对照品种F优498增产3.84%,平均增产点率80.0%。2017年生产试验平均产量为567.2kg/667m^2,比对照F优498增产2.54%,增产点率达66.7%。成优33于2018年通过贵州省农作物品种审定委员会审定(审定号:黔审稻20180006),适宜在贵州省中、低海拔地区种植。

苟当1号在不同海拔生态环境种植的蒸煮食味品质分析

稻米蒸煮食味品质受品种遗传特性、生长环境和栽培条件等因素共同作用,蛋白质含量、直链淀粉含量和RVA(快速粘度仪)谱特征值是评价稻米食味品质优劣的重要理化指标。为探究不同海拔地区苟当1号蒸煮食味品质的差异,在贵州省从江县242~857 m的海拔范围内选取了5个不同海拔高度的地点种植苟当1号,对影响稻米蒸煮食味品质的主要理化指标进行差异及相关性分析。结果表明,苟当1号的蛋白质含量在5.23%~7.07%之间、直链淀粉含量在1.61%~2.87%之间,海拔高度与蛋白质含量和直链淀粉含量均呈极显著负相关。RVA谱特征值多重比较表明,回复值随海拔的升高而降低,崩解值随海拔的升高先降低后升高,消减值随海拔的升高先升高后降低。此外,不同海拔的土壤基本成分与稻米蒸煮食味品质相关性分析结果表明,土壤中速效氮含量与崩解值呈显著负相关,与消减值呈显著正相关;土壤pH值与回复值呈极显著负相关,与直链淀粉含量呈显著负相关。综上,苟当1号在从江地区242~857 m的海拔范围内种植,蒸煮食味品质随海拔升高而变优。