miR-4497靶向TMEM88通过PI3K/AKT信号通路调控下咽癌FaDu细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨microRNA-4497(miR-4497)在下咽癌患者化疗前后血清外泌体中的表达及对人咽鳞状细胞癌FaDu细胞株(简称FaDu细胞)增殖和凋亡的作用机制。方法收集2021年6月~2022年12月于连云港市第一人民医院确诊的7例局部晚期下咽癌患者,给予TPF方案辅助化疗2个周期,分别抽取患者化疗前后的外周血,采用测序技术检测化疗前后两组血清外泌体miRNA,并对其中差异表达的miRNA进行生物信息学分析。通过转染技术下调miR-4497的表达,提取FaDu细胞外泌体。分别利用CCK-8、EdU、流式细胞术和Western blot实验检测FaDu细胞外泌体来源miR-4497对FaDu细胞的增殖和凋亡情况。数据库miRDB、miRWalk、miR2Target和TargetScan联合预测miR-4497潜在靶点,分析下调TMEM88的表达并同时抑制miR-4497的表达对FaDu细胞增殖和凋亡的影响。根据测序预测分析KEGG通路图,Western blot实验验证FaDu细胞内p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT的表达。结果与化疗前相比,化疗后下咽癌患者外周血血清外泌体中miR-4497的表达明显降低。FaDu细胞中miR-4497的表达明显高于人鼻咽上皮细胞系NP69及人鼻咽癌细胞系6-10B和HONE-1(F=109.3,P<0.01)。与转染miR-4497 inhibitor的FaDu细胞外泌体共培育抑制FaDu细胞增殖,促进细胞凋亡,Bax蛋白表达升高(t=84.69,P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(t=31.11,P<0.01)。数据库预测抑癌基因TMEM88可能是miR-4497的靶向。荧光素酶报告基因检测证实TMEM88与miR-4497存在结合位点。使用外泌体来源的miR-4497 inhibitor与TMEM88低表达的FaDu细胞共培育,观察到细胞增殖能力回升,p-PI3K和p-AKT表达降低(t=91.54,P<0.01;t=58.30,P<0.01)。结论FaDu细胞外泌体来源miR-4497可通过下游靶点TMEM88激活PI3K/AKT信号通路,调控FaDu细胞的增殖和凋亡。

外泌体递送角蛋白8小干扰RNA调控下咽癌细胞对5-FU敏感性研究

目的探究下咽癌患者血清源性外泌体中角蛋白8(KRT8)小干扰RNA(si-KRT8)对人咽鳞状细胞癌FaDu细胞株5-氟脲嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响和作用机制。方法收集下咽癌患者肿瘤组织以及治疗后耐药患者的血清、肿瘤组织以及癌旁组织。构建FaDu的5-FU耐药细胞株(FaDu/R)用于后续实验。超速梯度离心法分离患者血清中的外泌体并利用透射电镜及蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)技术进行鉴定,利用电转染技术将si-KRT8封装至外泌体(Exosome@si-KRT8)中,后续用于处理细胞。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及WB方法检测KRT8分别在不同组织、电转染后外泌体及不同处理条件下FaDu细胞中的表达水平。CCK-8、原位末端转移酶标记技术及迁移侵袭技术和WB检测Exosome@si-KRT8对FaDu/R细胞活力、凋亡及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。结果下咽癌耐药组织及FaDu/R细胞中的KRT8表达水平相较于癌旁组织和肿瘤组织以及正常FaDu细胞均升高(t=15.79,P<0.01)。分离的患者血清外泌体呈现双层膜结构,且CD63和TSG101蛋白均表达,电转染si-KRT8后,外泌体中KRT8表达量下降(t=6.70,P<0.01)。Exosome@si-KRT8能够抑制FaDu/R细胞中KRT8的蛋白表达水平(t=123.50,P<0.01)。与5-FU组及5-FU+Exosome组相比,Exosome@si-KRT8能够抑制FaDu/R细胞的活力(t=17.07,P<0.01),促进其凋亡水平,并且抑制FaDu/R细胞耐药相关蛋白的表达(t P-gp=103.20,t MDR1=238.60,P<0.01)。此外,Exosome@si-KRT8还能抑制FaDu/R细胞的迁移侵袭能力(t=42.30,t=122.00,P<0.01),并在促进E-cadherin的表达同时抑制N-cadherin的表达水平(t=130.80,t=83.90,P<0.01)。结论下咽癌患者血清来源的外泌体封装si-KRT8能够增强下咽癌细胞的化疗敏感性,且其作用机制可能与抑制细胞上皮间质转化有关。

持续静脉血液滤过对脓毒血症合并急性肾功能衰竭患者肾功能的影响

探究脓毒血症合并急性肾功能衰竭(ARF)患者采用持续静脉血液滤过(CVVH)治疗的效果与价值。方法 遴选研究目标为80例脓毒血症合并ARF患者,均源自2018年1月-2023年12月时段,且全部为灌云县人民医院重症医学科收治,依据组间信息均衡可比原则将纳入患者分入两组,对照组40例予以静脉血液透析滤过(CV-VHDF),观察组40例采用CVVH,从多个方面评估和判定治疗效果,主要包括肾功能、炎症因子、代谢毒素等的测定,治疗相关时间的统计以及治疗有效率的计算。结果 治疗后,观察组检测所得血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)均处于更低水平,而排尿量更多(P<0.05)。治疗后,观察组检测所得炎症因子、代谢毒素均处于更低水平(P<0.05)。观察组统计所得白细胞水平、体温恢复正常时间以及通气和住院时间均更短(P<0.05)。观察组临床总有效率计算值92.50%更高(P<0.05)。结论 CVVH对脓毒血症合并ARF患者肾功能、炎症因子、代谢毒素改善均可产生积极影响,同时也能显著缩短治疗相关时间,提升临床效果,值得推荐。

显微镜下低温等离子刀与高频电刀切除会厌囊肿的临床比较分析

目的比较低温等离子刀与高频电刀治疗会厌囊肿的临床适用性。方法 43例会厌囊肿,按入院顺序随机分为观察组21例,对照组22例。所有患者均在全麻状态喉显微镜下手术。观察组实施低温等离子刀切除,对照组采用高频电刀切除术,比较两种术式的临床适用性。结果观察组平均手术时间、术后咽痛持续时间均短于对照组,术中出血量少于对照组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论显微镜下低温等离子刀治疗会厌囊肿具有手术视野好、损伤小及并发症少等优点。

儿童阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征手术疗效观察

目的:观察单纯扁桃体、腺样体切除及扁桃体加腺样体切除术治疗儿童OSAHS的疗效。方法:全麻下剥离法切除扁桃体,吸切器切除肥大的腺样体。结果:术后随访6个月～2年,同时行扁桃体加腺样体切除有效率97%,单纯行腺样体切除有效率70%,单纯扁桃体切除有效率40%。结论:同时行扁桃体加腺样体切除在治疗儿童OSAHS的疗效优于单纯扁桃体、腺样体切除。

显微支撑喉镜下二氧化碳激光与高频电刀切除会厌囊肿的临床效果比较

目的比较显微支撑喉镜下二氧化碳CO_2激光和传统高频电刀切除会厌囊肿的临床疗效。方法选取44例会厌囊肿患者,随机分为观察组与对照组各22例,所有患者均在全麻支撑喉显微镜下进行手术。观察组采用CO_2激光,对照组采用高频电刀进行手术。比较两者术中、术后临床适用性。结果 CO_2激光与传统高频电刀相比手术时间明显缩短,术后疼痛评分明显低,且差异有统计学意义。CO_2激光手术精准程度高,可完整切除囊肿,对周围组织的损伤程度明显轻于高频电刀。两者在术后复发情况上无差异,均无1例复发。结论显微支撑喉镜下CO_2激光治疗会厌囊肿具有切割精准、囊壁不易破损、操作方便和副损伤小等优点。

经口CO_(2)激光治疗侵及前连合的早期声门型喉癌22例

目的探讨侵及前连合的早期声门型喉癌微创切除的方法及疗效。方法对确诊为侵及前连合的早期声门型喉癌22例患者,T1级17例,T2级5例,均为N0级。均行经口支撑喉镜下CO_(2)激光切除,术后随访观察1~5年,并对治疗情况进行分析。结果22例患者手术顺利,术中无严重并发症,术后声音恢复满意,随访1~5年,第1年复发2例,第2年复发1例,第3年复发2例,失访1例。复发后1例再次行激光手术,2例行喉部分切除术,2例行喉全切除术。结论侵犯前连合的早期声门型喉癌,经术前评估未侵犯甲状软骨、排除喉镜下暴露困难的病例,术中通过喉体按压及组织牵拉等暴露手段,扩大切除范围等方法能顺利完成手术,术后定期复查,局部复发后可再次行补救性手术治疗,整体疗效满意。术前评估和术中暴露是能否完成经口微创切除的关键。

局部晚期下咽癌术前新辅助化疗24例临床分析

目的探讨新辅助化疗在局部晚期下咽癌术前应用的效果以及对喉功能保留的影响。方法回顾性分析我院自2014年1月~2018年12月收治的35例局部晚期下咽癌患者,T3级26例,T4级9例,根据患者喉功能保留的愿望、身体状况以及治疗依从性,11例患者采用手术+术后放疗,24例患者采用术前新辅助化疗(TPF)方案+手术+术后放疗。对两组患者的喉功能保留情况,术后并发症等进行比较分析。结果所有手术病例均完整切除肿瘤,切缘阴性,手术组的11例患者中喉功能保留率为18.2%(2/11),辅助化疗组24例喉功能保留率为66.7%(16/24),辅助化疗组喉功能保留率高于手术组,差异有统计学意义。手术组术后并发咽瘘I例,辅助化疗组术后咽瘘3例,两组咽瘘发生率比较,差异无统计学意义。结论局部晚期下咽癌术前给予新辅助化疗在不降低生存率的前提下能提高喉功能保留率,且不增加术中术后并发症的几率,可作为下咽癌治疗的有效选择。

甘草配方颗粒制备工艺和质量标准研究

建立甘草配方颗粒制备的工艺以及其质量标准;以最终的得膏率、甘草苷、甘草酸转移率作为甘草配方颗粒的评价指标,以煎煮次数、提取时间、加水量作为影响因素,采用正交设计来确定甘草配方颗粒制备工艺。采用TLC法对制备好的样品进行定性鉴别,采用HPLC法对甘草苷、甘草酸的含量进行测定。结果表明,以煎煮提取3次,每次1h,加水量为10倍量组为制备工艺制备所得甘草配方颗粒具有良好的稳定性和可重复性;甘草配方颗粒制备工艺合理,质量稳定,质控方法简便,具有良好的重复性,适宜工业化批量生产。

五种手术进路方式切除下咽癌9例临床分析

目的探讨既彻底切除肿瘤,又尽量保留喉及相邻器官功能的手术进路方式。方法根据具体情况采取不同手术方式:(1)下咽上区癌:肿瘤位于会厌谷,经下唇、下颌、舌体正中裂开进路。(2)下咽上区癌:肿瘤位于会厌舌面,经舌骨咽腔进路。(3)下咽下区癌:肿瘤位于梨状窝外侧壁,经颈侧进路。(4)下咽下区癌:肿瘤位于扁桃体下极、舌根、梨状窝,经口进路。(5)下咽下区癌:肿瘤位于梨状窝内侧壁、环后,经颈前喉裂开进路。结果吞咽功能:术后2周练习进食,一个月后进食呛咳缓解,3例半年后仍有呛咳。食道上段癌肿瘤侵犯,一个月后拔除胃管能进食。语言功能:除1例全喉切除外,余均能发音。结论下咽部相邻的重要器官,结构复杂,一个器官功能失调,相互影响,难以用一种手术进路方式来切除发生在下咽部不同部位的肿瘤。选择合适的手术进路方式,既要完整切除肿瘤,又要顺利关闭咽腔,防止并发症的发生,是手术治疗下咽癌的重要环节。

儿童扁桃体肥大切除范围与临床效果分析研究

目的比较连云港市及周边地区儿童因扁桃体生理性肥大导致的睡眠打鼾伴憋气患儿进行传统和囊内手术方法切除扁桃体的临床效果。方法选取我院2007年6月至2012年9月份我科进行扁桃体部分切除加腺样体切除的患儿40例（B组），并与进行传统的扁桃体加腺样体切除的患儿45例（A组）进行比较，对比术前与术后血清免疫球蛋白变化情况，术后疼痛时间及程度、创面修复、患儿恢复正食欲时间和恢复正常活动时间的差异。结果A组进行传统扁桃体切除术，术前1天及术后1月两组血清IgG、IgM、IgA差异无统计学意义（P〉0．01），术后1周两组血清IgC、IgM、IgA差异有统计学意义（P〈0．01），A组术后1周免疫球蛋白水平稍有下降，但是差异无统计学意义（P〉0．01），B组术后1周免疫球蛋白水平下降，差异有统计学意义（P〈0．01）。术后1周内患儿咽痛比较见表2，B组与A组比较，术后第二天咽痛评分明显降低，术后第1天两组评分最高，术后第2天B组评分明显降低，A组评分仍较高，第3天两组评分均明显降低，且两组术后第3天至第7天评分均逐渐降低。分析表明，术后第2天评分差异有统计学意义，其余6天咽痛无明显差异。B组在术后第2天咽痛评分明显降低。B组创面水肿程度轻，患儿恢复食欲、正常活动时间平均在术后第3天，而A组平均在术后第4～5天，差异有统计学意义。结论扁桃体部分切除加腺样体切除患儿术后1周内免疫球球蛋白下降水平较传统手术明显降低，术后咽痛症状及患儿恢复正常活动饮食均较传统手术后恢复快。

应用扩张管治疗重度喉气管狭窄

目的探讨重度喉气管狭窄选用不同扩张管的临床价值。方法将14例重度喉气管狭窄的患者,依据狭窄的部位、长度、程度及软骨损伤情况,分别采用置入"T"形硅胶管10例、镍钛记忆合金支架2例和气管切开气管插管2例,扩张管均留置6个月以上。结果术后随访1～10年,10例置入"T"形硅胶管患者中,9例拔管后恢复通气及发音功能,进食无呛咳,1例术后拔管后又出现呼吸困难,二次置管,该患者拒绝拔管,随诊3年通气好,轻度声嘶;2例置入镍钛记忆合金网状支架患者通气好,无呼吸困难,轻度声嘶;2例气管切开插管患者,经放疗解除淋巴结压迫后,拔管后,呼吸、发音良好。结论依据喉气管狭窄的长度、部位、程度及破坏程度,选择恰当的扩张管能够取得较为理想的疗效。

保健食品中花色苷分析方法研究

为了建立保健食品中花色苷测定方法,采用薄层色谱法(TLC)对花色苷进行定性鉴别,采用高效液相色谱法(HPLC)对花色苷进行定量检测。结果发现,TLC鉴别的适宜条件为:展开剂各组分比例为V(甲酸)∶V(水)∶V(正丁醇)=9.1∶8.4∶32.5;点样量为2μL。HPLC检测时花色苷在4.361~52.332μg/mL(R;=0.999 5)内线性关系良好,平均加样回收率为98.22%(RSD=1.23%,n=6),且精密度、重复性、稳定性良好。

鼻息肉组织中嗜酸性阳离子蛋白/髓过氧化物酶、趋化因子配体4、免疫球蛋白E对慢性鼻窦炎伴鼻息肉术后复发的预测价值

目的探讨鼻息肉组织中嗜酸性阳离子蛋白(ECP)/髓过氧化物酶(MPO)、趋化因子配体4(CCL4)、免疫球蛋白E(IgE)对慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)术后复发的预测价值。方法选择2017年1月至2019年12月于江苏省连云港市第一人民医院行鼻内镜手术治疗的189例CRSwNP患者为研究对象,根据术后2年内是否复发将其分为复发组(26例)与未复发组(163例)。比较两组临床资料及鼻息肉组织中ECP/MPO、CCL4、IgE水平的差异,并进一步分析CRSwNP复发的影响因素及ECP/MPO、CCL4、IgE水平在CRSwNP复发中的临床价值。结果复发组鼻息肉Davos评分、吸烟史占比、术后感染占比及ECP/MPO、CCL4、IgE水平均高于未复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示,吸烟、术后感染、ECP/MPO、CCL4、IgE均为CRSwNP患者术后2年内复发的影响因素(P<0.05)。ECP/MPO、CCL4、IgE水平单独及联合对CRSwNP患者术后2年内复发均有一定的预测价值(曲线下面积>0.5,P<0.05)。结论鼻息肉组织中ECP/MPO、CCL4、IgE单独及联合在CRSwNP术后2年内复发的预测中具有临床价值,值得进一步分析探讨。

一侧扁桃体加腺样体切除术治疗儿童阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的疗效观察

目的:观察一侧扁桃体加腺样体切除术在治疗儿童阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)疗效与传统双侧扁桃体加腺样体切除比较。方法:对经睡眠监测诊断为OSAHS的318例儿童,所有患者均近一年来无扁桃体炎病史,并已排除鼻中隔偏曲、鼻炎、后鼻孔狭窄、舌体肥大等其他因素所引起OSAHS。随机分为两组,一组行一侧扁桃体加腺样体切除术(简称为改良组),一组行常规双侧扁桃体加腺样体切除术(简称为对照组),术后随访6个月～2年,比较术后两组疗效差异。结果:两组在治疗儿童OSAHS无明显差异,术后随访6个月～2年发现改良组保留的一侧扁桃体极少数发生代偿性肥大,部分发生了萎缩。结论:一侧扁桃体加腺样体切除术既能保留患儿一侧扁桃体的生理功能,又能有效治疗OSAHS,是值得推广的一种手术方式。

我的梦想

大人经常说，小孩最爱做梦。我一直梦想自己成为一个伟大的发明家，发明一双神奇的鞋子，穿上它行走的速度和光一样快。

支撑喉镜下微创治疗早期喉癌

目的探讨支撑喉镜下用微创手术切除早期喉癌的临床效果。方法 2003年2月～2008年2月,对36例早期喉癌,支撑喉镜下先用喉钳去除肿瘤组织,再用电刀烧灼创面,并去除边缘2mm黏膜组织,术后配合小剂量放疗3000cGy。结果所有病例随访2～7年,平均3.7年,间接喉镜或纤维喉镜检查创面均光滑,无肿瘤复发及转移。27例发音清晰无声嘶,9例有轻度声嘶。均无呼吸困难。2例声带前端轻度粘连,2例患侧声带活动轻度受限。结论支撑喉镜下用微创手术切除早期喉癌配合小剂量放疗创伤小,恢复快,发音、呼吸功能好,无瘤生存率高。

不同下鼻甲手术方式疗效的比较

目的:比较下鼻甲切除术与半导体激光术治疗慢性肥厚性鼻炎的效果。方法:对53例行下鼻甲部分切除术和62例行半导体激光术治疗的慢性肥厚性鼻炎患者进行回顾性分析。结果:半导体激光治疗组的总有效率为87.1%,下鼻甲部分切除术组总有效率90.4%,两组比较无显著性差异(χ2=0.34,P<0.05);半导体激光治疗组术后并发症明显少于下鼻甲部分切除术组(χ2=19.32,P<0.01);下鼻甲部分切除术组的术后鼻塞天数[(3.9±0.6)d]明显长于半导体激光治疗组[(1.9±0.4)d](t=3193,P<0101)。结论:半导体激光术与下鼻甲切除术均是治疗慢性肥厚性鼻炎的有效方法,但半导体激光术具有更为简单,并发症少,术后反应轻等特点。

常规扁桃体剥离术的方法改进

目的:探讨常规扁桃体剥离术存在的缺陷及对此采取的改进措施。方法:回顾性分析2000年2月～2008年2月我科610例改良扁桃体切除手术与518例常规扁桃体剥离术患者的临床资料。改良手术采用以下改进措施,即:保留扁桃体三角皱襞黏膜;尽可能多保留扁桃体周围黏膜组织;采用可吸收线缝合扁桃体窝及三角皱襞黏膜。结果:改良手术与常规手术相比,患者术后疼痛、咽部异物感、口干、发音含糊持续时间明显减轻(P<0.05);术后1年咽部变形发生率、扁桃体瘢痕、扁桃体残留为0,与常规手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:改良后的扁桃体剥离法与常规剥离法相比,术后出血、感染、咽干、咽部异物感明显减轻,粘连发生率低,有明显的优势,值得推广。

陈旧性鼻骨骨折闭合复位25例诊疗体会

目的:观察病程超过14d的陈旧性鼻骨骨折进行闭合复位手术后的疗效。方法:对25例病程超过14d的鼻骨骨折患者进行闭合鼻骨复位术,观察术后鼻部畸形及鼻腔功能改善情况,于术后半年行CT检查进一步确定手术疗效。结果:25例鼻骨骨折患者外鼻畸形及鼻腔通气均得到纠正,其中23例治愈,2例好转。结论:病程超过14d的陈旧性鼻骨骨折实行闭合复位术可以取得较好效果。