基于CRISPR/Cas9技术构建PAX3-FOXO1融合基因敲除腺泡状横纹肌肉瘤细胞模型

目的使用CRISPR/Cas9技术构建稳定敲除PAX3-FOXO1融合基因的人腺泡状横纹肌肉瘤(ARMS)细胞系(RH30),并验证PAX3-FOXO1功能。方法运用在线网站针对PAX3、FOXO1设计sgRNA,选择切割效率最高的一组构建LV-PAX3-sgRNA、LV-FOXO1-sgRNA及LV-Cas9慢病毒载体;LV-Cas9病毒感染RH30细胞,潮霉素筛选后,通过RT-PCR及qRT-PCR检测RH30-Cas9细胞中Cas9基因表达;LV-PAX3-sgRNA及LV-FOXO1-sgRNA慢病毒载体分别感染RH30-Cas9细胞,流式分选筛选荧光阳性细胞;Sanger测序、PCR等分别验证RH30-PAX3-KO细胞及RH30-FOXO1-KO细胞中PAX3-FOXO1表达;EDU、TUNEL、Transwell实验检测敲除RH30-PAX3-KO细胞及RH30-FOXO1-KO细胞功能改变。结果成功构建靶向PAX3、FOXO1的CRISPR/Cas9慢病毒载体;PCR验证稳定表达Cas9的RH30细胞系(RH30-Cas9)构建成功;PCR、Western Blot验证靶向PAX3或FOXO1均成功敲除RH30中PAX3-FOXO1融合基因;靶向PAX3或FOXO1抑制RH30细胞增殖、侵袭、迁移,促进凋亡。结论使用CRISPR/Cas9成功构建敲除PAX3-FOXO1的RH30细胞系;敲除PAX3-FOXO1抑制了RH30细胞增殖、迁移等恶性生物学行为。

新疆地区汉族及维吾尔族2型糖尿病个体血清DPP4含量及影响因素

目的比较新疆地区汉族、维吾尔族正常及2型糖尿病(The type 2 diabetes mellitu,T2DM)个体血清二肽基肽酶(Dipeptidyl-peptidase 4,DPP4)含量,并探讨其可能的影响因素。方法选取汉族个体52例,维吾尔族个体56例,分为正常对照和2型糖尿病组,收集一般资料及血液标本,全自动生化分析仪检测空腹血糖(Fasting plasma glucose,FPG)、血脂等生化指标;ELISA法检测个体血清DPP4含量。分别在不同民族间及同一民族内比较血清DPP4含量的差异,并分析其可能的影响因素。结果(1)汉族个体,正常与T2DM个体间血清DPP4含量无显著差异,T2DM个体男性血清DPP4的含量显著高于女性(P<0.05);(2)维吾尔族T2DM个体血清DPP4含量显著高于正常个体(P<0.05);汉族正常及T2DM个体血清DPP4含量均显著高于维吾尔族(P<0.001);(3)汉族个体血清DPP4含量与一般资料及血糖、血脂水平,无显著相关性(P>0.05);维吾尔族个体血清DPP4含量与低密度脂蛋白(Low-density lipoprotein,LDL)显著正相关(P<0.05),与高密度脂蛋白(High-density lipoprotein,HDL)显著负相关(P<0.05)。结论血清DPP4含量在不同遗传背景个体间存在显著差异,汉族个体显著高于维吾尔族。汉族个体中性别可能影响血清DPP4含量;维吾尔族个体中,血脂异常可能影响血清DPP4含量。