禽流感疫苗新型佐剂的研究进展及未来发展方向

禽流感是一种高度接触的病毒性传染病,它对我国养殖业及公共卫生构成严重威胁。随着疫情的频发和病毒株的变异,研发更有效的疫苗及其佐剂成为迫切需求。为此,综述了禽流感疫苗新型佐剂的研究进展,包括佐剂的种类、作用机制、以及在禽流感疫苗中的应用实例,并对未来的研究方向提出了展望,这为禽流感疫苗新型佐剂的研发提供理论依据。

H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化

为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将重组质粒pCAMBIA1300-HA通过电转化法导入根癌农杆菌EHA105中,筛选出阳性菌落并侵染水稻愈伤组织。经过暗培养、潮霉素筛选、分化、生根、成苗,采用CTAB法提取水稻叶片DNA,PCR鉴定结果显示,HA基因已插入到水稻基因组中,重组HA基因大小为4660 bp。将阳性植株移植到大田中,4个月后收获水稻种子,提取水稻胚乳蛋白,Western blot鉴定结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达。重组HA蛋白通过Q阴离子层析、疏水层析和凝胶过滤层析三步分离纯化,其纯度达到90%以上。最后将纯化后的重组HA蛋白与ISA 50V佐剂混合并乳化制成疫苗,免疫小鼠,小鼠血清具有较高的特异性抗体水平,表明重组HA蛋白免疫原性较好。综上,成功构建了H5N1亚型禽流感病毒HA重组蛋白的水稻表达系统,并分离纯化获得了高纯度和免疫原性良好的重组HA蛋白。

转猪轮状病毒VP6基因烟草植物的获得

根据G enB ank中轮状病毒VP 6序列设计1对引物,从pGEM-T-VP 6质粒中扩增VP 6 PCR产物。将VP 6克隆到PB I121质粒中,转化根癌农杆菌LBA 4404,挑取阳性菌落的质粒进行酶切鉴定。用叶盘法转化烟草,获得再生苗,用RT-PCR、PCR和PCR-sou thern杂交方法进行鉴定,结果表明,VP 6基因已成功地转入烟草中。

禽脑脊髓炎病毒VR株衣壳蛋白基因的克隆及序列分析

用冻存的禽脑脊髓炎病毒VanRoekel(AEVVR)株通过SPF鸡胚传代复壮 ,获得了试验用病毒株样本。根据已知禽脑脊髓炎病毒 114 3(AEV 114 3)株的衣壳蛋白VP0、VP3、VP1基因序列 ,设计了 3对引物 ,分别扩增AEVVR株的VP0、VP3、VP1基因 ,将RT PCR产物进行分子克隆和序列分析。结果表明 ,AEVVR株与AEV 114 3株VP0、VP3、VP1基因的核苷酸同源性分别为 95 .1%、93.6 %和 93.9% ;氨基酸的同源性分别为 97.5 %、97.5 %和 99.6 %。

聚合物改性混凝土抗碳化性能试验研究

为研究不同聚合物掺量对混凝土抗碳化性能的影响，选择后掺法制作了聚灰比分别为0、5％、10％、15％、20％的5组混凝土试件，采用快速碳化试验测定不同碳化龄期时各组试件的碳化深度，并根据碳化深度经典模型建立了适用于聚合物改性水泥混凝土碳化深度模型；通过电镜扫描从微观角度分析碳化对聚合物改性混凝土的影响。经过试验得：当聚合物掺量在15％一20％时对混凝土的抗碳化性能改善效果最好。

轮状病毒转基因植物疫苗的研究进展

轮状病毒病是引起人和动物肠胃炎的一种传染病,发病率和死亡率较高,至今没有特效药可以治疗,传统疫苗预防效果不佳。随着生物技术的不断发展,一种新型的转基因植物疫苗有望解决这个难题。人类和动物食用了这种转基因植物之后,就可以获得抗体,产生免疫力,以预防此病。

外源基因在转基因植物中表达量的优化研究进展

转基因植物作为一种生物反应器将在生物工艺学上得到应用,其目的是为了生产和传输外源蛋白。但是外源基因在转基因植物中表达量低,为此,从几个方面介绍了提高外源基因在植物中表达量的方法。

乙脑病毒Henan-09-03株E蛋白结构与功能生物信息学分析

利用生物信息学软件对Henan-09-03株乙型脑炎病毒(JEV)病毒E蛋白(囊膜蛋白)进行生物信息学分析、预测,为研究JEV的E蛋白基因工程疫苗提供依据。结果表明:E蛋白的分子质量为53 k Da,等电点是7.75,消光系数是66 515,不稳定系数为27.05,疏水平均值为-0.007,无信号肽,有2个跨膜区、27个蛋白修饰位点、5个二硫键、15个蛋白质结合位点,二级结构为α-β混合型、三级结构以同源四聚体形式存在。

猪轮状病毒VP6基因的原核表达载体构建和表达

根据已报道的猪轮状病毒VP6基因序列设计了2对引物,利用pGEM-T-Easy-VP6重组质粒为模板,经PCR扩增获得了1 194 bp的产物。将扩增片段分别插入到pET5α和pGEX-4T-2构建表达载体,并分别在大肠杆菌BL21(DE3)Plyss和ER2566中表达。结果表明:成功构建了重组质粒,而且该片段在大肠杆菌中也成功表达,获得了大小为44 kD的蛋白。

禽脑脊髓炎病毒Van Roekel株衣壳蛋白基因原核表达及其ELISA检测研究

利用RT PCR方法扩增了禽脑脊髓炎病毒VP0、VP3和VP1基因 ,分别插入pGEX 4T 1原核表达载体 ,转化到E .coliER2 566表达菌内 ,经IPTG诱导表达后 ,SDS PAGE分析表达产物。结果表明 ,表达的VP0、VP3、VP1融合蛋白分子量分别为 53 ,53 ,56ku。以电洗脱法纯化VP0、VP3、VP1表达蛋白抗原并分别建立了间接ELISA方法 ,用阳性血清和阴性血清进行检测。结果显示 ,表达VP1蛋白反应活性相对高于VP0、VP3蛋白反应活性 ,最后再将自制VP1板用自配试剂检测其活性 ,同时用美国试剂盒检测VP1活性 ,美国ELISA试剂盒、琼脂扩散试验检测同样 1 0份血清作比较 ,三组ELISA检测结果 ,其中有 8份被检血清为阳性 ;2份被检血清为阴性。这一结果与琼脂扩散试验检测结果一致。说明VP1表达蛋白活性达到预期要求 。

不同品种紫花苜蓿愈伤组织及分化体系的建立

[目的]建立不同品种紫花苜蓿的愈伤组织及分化体系。[方法]以4个品种的无菌苗子叶为外植体,研究不同的激素浓度及基因型对紫花苜蓿胚性愈伤组织诱导及分化的影响。[结果]4个品种诱导形成的愈伤组织差别不大;最佳胚性愈伤组织诱导培养基为改良SH+2,4-D 2 mg/L+KT 0.05 mg/L;苜蓿王的分化率和出苗率表现较佳;最佳分化培养基为改良SH+KT 0.4 mg/L。[结论]该试验为今后筛选易分化的苜蓿品种和研究"转基因苜蓿疫苗"奠定了基础。

转猪轮状病毒VP6基因烟草的杂交检测

为了确定VP6基因是否已整合到烟草的基因组中,通过PCR-Southern、Dot-Blot和Western-Blot方法检测转基因烟草,结果表明,VP6基因已经成功地转化到烟草中。

聚合物混凝土的发展及应用

聚合物混凝土具有高强、耐久性好、耐磨、耐化学腐蚀、高抗渗性、高弹性模量等优点,在工程中的应用越来越广。本文综合叙述了关于聚合物改性混凝土分类、聚合物对混凝土的改性机理、发展应用情况、目前存在的问题及对其发展前景的展望。

猪A组轮状病毒Vp4全基因在MA-104细胞中的表达与DNA疫苗的研究

本研究采用LipofectamineTM2000将真核重组表达质粒pVAXI-Vp4转染至MA-104细胞中,得到了表达。以荧光抗体检测法和RT-PCR法双重检测了真核重组表达质粒pVAXI-Vp4在MA-104细胞中的表达情况。并将pVAXI-Vp4免疫BALB/c鼠,检测其血清抗体和脾脏中的淋巴细胞增殖情况及CD4+,CD8+T细胞的数量变化情况。结果表明,猪A组轮状病毒Vp4全基因不但在哺乳动物细胞中获得了表达,而且将真核重组表达质粒pVAX-I-Vp4给动物免疫后,获得了免疫效果。这为pVAXI-Vp4DNA核酸疫苗的进一步推广应用提供了科学依据。

猪乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白的原核表达、纯化及活性检测

在大肠杆菌BL21(DE3)中表达乙脑病毒(JEV)EDⅢ蛋白、镍柱纯化并检测表达蛋白。采用RT-PCR方法扩增EDⅢ基因片段,构建重组表达载体p ET-28a-EDⅢ并转化到BL21(DE3)菌,经IPTG诱导蛋白表达,表达可溶性产物经NiNTA亲和层析纯化,最后通过SDS-PAGE和Western-Blot检测表达蛋白。结果成功构建原核表达载体p ET-28a-EDⅢ;EDⅢ蛋白在BL21(DE3)菌已表达,经Ni-NTA获得纯化蛋白,并经Western-Blot检测具有反应活性。

狂犬病病毒N基因植物表达载体的构建

以提取的狂犬病病毒总RNA为模板,以N1和N2为引物,反转录为cDNA,然后再以cDNA为模板进行PCR扩增,将PCR产物克隆至质粒pMD18-T中,获得重组质粒pMD18-T-N,采用HindⅢ和BamHⅠ双酶切法及PCR确认正确后,利用pMD18-T-N重组质粒为模板,以N3和N4为引物,成功构建了重组植物表达载体pBI121-N。

应用ELISA方法调查鸡骨髓细胞瘤病

在内蒙古地区5个种鸡场采血、分离血清共229份,其中3个肉种鸡场血清共184份;2个蛋种鸡场血清共45份,在ALV—Jgp85抗原包被的96孔板中进行微量滴定,检查结果,ALV—J抗体阳性率:3个肉种鸡场分别为28.12%,9.38%和8.33%,平均为12.0%;2个蛋种鸡场都为0%。

禽骨髓细胞瘤病自然病例的病理学研究

对禽骨髓细胞瘤病显性型病鸡、ELISA阳性的隐性型病鸡和阴性对照鸡进行了病理学研究。结果表明 ,临床症状明显的显性型病鸡肝、脾、肾、睾丸 (或卵巢 )、肺等组织有灰白色结节状病灶和不同程度的肿胀 ,甚至在股骨或肋骨等处出现大小不一的硬固肿块 ,镜检病变部位有大量髓细胞样瘤细胞 ,呈典型的骨髓细胞瘤病的病理特征。电镜下瘤细胞病变明显 ,瘤细胞胞膜下疑似病毒样粒子 ;在自然病例肾悬液感染的鸡胚成纤维细胞培养物中巨噬细胞的膜性结构上发现增殖的病毒样凸起。ALV JELISA抗体检测试剂盒检出阳性、无明显临床症状和眼观病变的隐性型病鸡 ,光镜下骨髓、肝、卵巢、心肌等组织中可见与显性型相同的髓细胞样瘤细胞 ,但数量较少。ELISA抗体检测阴性对照鸡骨髓中胞浆含有嗜酸性颗粒的髓细胞明显少于阳性鸡 ,除在肝、卵巢等组织中偶尔出现外 ,其他组织很少见到。

聚合物改性混凝土力学性能试验研究

聚合物改性水泥混凝土是近年来新兴的一种聚合物改性水泥基复合材料,主要针对环氧树脂改性水泥混凝土的基本力学性能进行了试验研究,试验中聚合物掺量采用了0、5%、10%、15%、20%这五种配合比,得到了聚合物掺量对聚合物改性水泥混凝土力学性能的影响,并通过电镜扫描试验从微观方面分析掺加聚合物后对混凝土的影响,试验结论:当聚合物掺量在10%左右时对混凝土力学性能综合改性效果最好。

J亚群白血病的病理学观察及PCR诊断

从某肉种鸡场取疑似J亚群白血病的自然发病鸡 ,剖检 ,观察病理学特征 (光镜、电镜 )。随后对该场进行ALV_J抗体ELISA检测 ,发现感染率达 2 8% ,从中选取部分抗体阳性鸡及阴性鸡剖检 ,取肝进行ALV_J特异性PCR检测。结果 :自然发病鸡病变明显 ,在肝、脾、肾、睾丸 (卵巢 )肺等多种组织肿大 ,并有大小不等的灰白色结节。镜检 :病灶内及肿瘤主要由密集的髓细胞组成 ,在大脑、小脑坐骨神经中未见。电镜 ,肿块中的髓细胞样瘤细胞呈圆形、核圆形或椭圆形 ,体积大小不一、染色质边集 ,胞浆中溶酶体增多 ,有些电子密度较高 ,有些趋于溶解 ,肝细胞体积增大 ,核浓缩或淡染 ,胞浆中线粒体增多 ,肿胀 ,嵴减少或消失 ,在胞浆膜下有病毒粒子存在。PCR结果 :6例抗体阳性鸡和部分自然病例PCR阳性而 2只对照鸡PCR阴性。通过以上证据可知 ,病变明显的和抗体阳性的鸡PCR结果全部为阳性 ,证明鸡体内病毒与抗体共存 ,而抗体阴性 ,病毒阳性的结果未出现 ,说明此肉种鸡场感染的ALV_J大部分是由于水平传播造成的。