人胚胎生殖细胞移植于梗死心肌后不同时期心肌特异转录因子GATA-4的表达

目的：探讨人胚胎生殖细胞（hEGCs）移植入急性心肌梗死大鼠心肌组织后，移植细胞早期心肌特异转录因子GATA-4的表达。方法：取5～10周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜，进行人EG细胞的组织块原代及传代培养，以传四代的人EG细胞为移植细胞。40只SD大鼠随机分为两组，移植组将获得的人EG细胞移植到急性心肌梗死大鼠的梗死心肌边缘：对照组用同样的方法给急性心肌梗死大鼠注入PBS。于移植后1天，1、2、4周处死大鼠。用免疫组化方法检测心肌特异转录因子GATA-4在移植细胞的表达。结果：移植后1天，1、2、4周移植组均有移植细胞稳定存活，GATA—4的表达在移植1天时呈弱阳性，1周及2周时呈阳性，4周时强阳性；对照组均未检测出移植细胞及心肌细胞转录因子。结论：随着移植时问的延长，移植细胞GATA-4表达呈增强趋势，移植后4周表达强度最大。

腹腔注射四氯化碳建立大鼠肝纤维化模型

腹腔注射四氯化碳（Carbon Tetrachloride,CCl4）构建大鼠肝纤维化模型,追踪观察模型大鼠病理组织学改变,为临床研究提供可靠的实验模型。模型组雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠按1.0 ml/kg剂量腹腔注射40%CCl4-橄榄油混悬液,每周3次,共计8周;对照组同时腹腔注射等量的生理盐水。于给药1-4、6、8周末每组随机取6只大鼠肝脏,肉眼观察肝脏组织大体改变,经HE和Masson染色观察肝脏病理学改变。肝脏组织光镜下显示：模型组给药第2周肝细胞发生脂肪变性;第4周肝组织局部形成假小叶,门管区有大量纤维细胞聚集;第6-8周肝组织出现大面积假小叶,建模成功率高达88.3%。采用多点、密集的腹腔注射方法可更有效地建立大鼠肝纤维化模型,为临床提供可靠的研究模型。

低氧环境下骨髓间充质干细胞中血管内皮生长因子的表达

背景:作为种子细胞来源的骨髓间充质干细胞移植后能否在相对缺氧的体内环境下生存,是移植成功与否的重要环节。因此研究体外低氧环境下骨髓间充质干细胞的生长状态,可以为体内细胞移植提供实验依据。目的:观察体外低氧环境对大鼠骨髓间充质干细胞生长及血管内皮生长因子表达的影响。方法:分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,光镜观察细胞的形态;取第3代骨髓间充质干细胞,按氧浓度分为两组,分别在常氧条件下(体积分数为21%氧气)和低氧条件下(体积分数为3%氧气)培养72 h。用CCK-8法和流式细胞术检测两组细胞的增殖情况,Western-blot印迹法检测常氧组和低氧组细胞中缺氧诱导因子1α与血管内皮生长因子蛋白的表达。结果与结论:①成功分离和培养了骨髓间充质干细胞,光镜下细胞呈长梭形,形态均一。②CCK-8法结果显示各时间点低氧组的细胞数目均高于常氧组,在36,48 h时活力增加显著(P<0.05)。③流式细胞术结果显示,与常氧组比较,低氧组处于S期的细胞数量增加,且细胞增殖指数也显著增加(P<0.05)。④Western-blot印迹法结果显示,常氧组细胞缺氧诱导因子1α及血管内皮生长因子蛋白仅有少量的表达,而低氧组两蛋白表达量均呈时间依赖性上调(P<0.05)。以上结果说明低氧可诱导体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞的增殖,又上调了缺氧诱导因子1α与血管内皮生长因子蛋白的表达,随着低氧时间的延长呈升高趋势。

孕期尼古丁暴露致子代大鼠中枢对血管紧张素Ⅱ的高反应性

目的探讨孕期尼古丁暴露后,子代大鼠中枢对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的反应性。方法对孕期尼古丁暴露的子代大鼠(n=7)脑室内注射AngⅡ、洛沙坦(Los)和PD123319(PD)后,观察尼古丁子代(尼古丁组)平均动脉压(MAP)、血气与正常大鼠子代(对照组,n=7)之间的差异,并检测下丘脑前区(AHA)c-Fos表达,AngⅡ受体1a(AT1aR)、AT1bR和AT2R mRNA的变化,以及AHA区AT1R、AT2R蛋白表达水平。结果尼古丁组基础MAP与对照组无差异,但脑室内注射AngⅡ后,尼古丁组大鼠MAP高于对照组[(120.36±6.23)mmHg比(109.87±6.86)mmHg,P<0.05],AHA区的c-Fos表达也明显强于对照组(25.8±2.91比6.42±1.52,P<0.05),而Los预处理后,两组MAP无明显变化,但PD预处理后,尼古丁组MAP仍高于对照组。并且尼古丁组AHA区的AT1aR mRNA高于对照组(1.23±0.05比1.00,P<0.05),AT1R蛋白表达也高于对照组(0.581±0.06比0.353±0.05,P<0.05)。结论孕期尼古丁暴露可导致子代大鼠AHA区AT1aR mRNA及AT1R蛋白高于对照组,可能导致中枢对AngⅡ的反应性增强。

孕期尼古丁暴露致成年雄性仔鼠心肌纤维化

目的研究孕期尼古丁暴露对子代大鼠心射血功能和心肌纤维化的影响。方法尼古丁暴露组孕鼠从妊娠第4~20天每天sc尼古丁6.0 mg·kg-1,连续17 d,正常对照组sc生理盐水。检测孕21 d胎鼠、出生后15和90 d雄性仔鼠的体质量和心脏质量。心电图记录90 d雄性仔鼠的心率;多普勒超声仪检测仔鼠心射血功能,包括每搏输出量(SV)、心输出量(CO)、左室长轴缩短分数(FS)、射血分数(EF)、左室后壁舒张期厚度(LVPWd)和室间隔舒张期厚度(IVSd);电镜检测心肌超微结构,Masson染色定性检测心肌胶原蛋白的沉积,放射免疫法定量检测心肌组织Ⅰ型胶原蛋白水平。结果与正常对照组仔鼠比较,孕期尼古丁暴露组21 d胎鼠和15 d雄性仔鼠心脏质量和体质量下降(P<0.05,P<0.01),但90 d雄性仔鼠的心脏质量和体质量无明显差异。尼古丁暴露组90 d雄性仔鼠心率升高[366±10 vs(418±10)min-1](P<0.05);超声心动图检测显示,CO,FS和EF明显降低(P<0.01),IVSd和LVPWd明显增加(P<0.05,P<0.01);电镜观察显示,心肌纤维紊乱,细胞外基质增加;Masson染色显示,心肌胶原蛋白沉积;放射免疫法检测结果显示,心肌组织Ⅰ型胶原蛋白水平升高[0.59±0.09 vs(0.40±0.05)μg·g-1组织](P<0.01)。结论孕期尼古丁暴露可导致成年雄性仔鼠心肌组织Ⅰ型胶原蛋白水平升高,心肌纤维化,心射血功能下降。这些病理变化可能导致其心血管疾病易感性增加。

参麦体外诱导人胚胎生殖细胞向心肌细胞分化

目的：探讨参麦对人胚胎生殖细胞（hEGC）向心肌细胞诱导分化的作用。方法：取5～10周人胚胎生殖腺嵴，进行组织块体外培养，用直接悬浮法使bECK2形成拟胚体（EBs），用不同浓度参麦的培养基对其进行诱导分化，然后取不同时间的细胞做免疫细胞化学显色，鉴定细胞的心肌特异转录因子GATA-4和心肌肌钙蛋白-T（cTnT）表达情况。结果：参麦诱导hEGC分化为心肌细胞的最佳浓度为1g／L，诱导第3周时分化率达57．0％±3．25％，显著高于不添加任何诱导剂的对照组。诱导后细胞形态变成梭形，3周细胞突起相互连接成条索状，且排列方向趋于一致；诱导后第3天即开始出现GAT艮4弱表达，第3周时表达最强；诱导后2周，细胞内开始表达cTnT，3周强阳性表达，4周表达明显增强。结论：参麦能够促进hEGC向心肌细胞分化，从而得以建立一种体外诱导hECK；分化为心肌细胞的方法。

人胚胎生殖干细胞移植对大鼠心肌梗死的影响(英文)

目的：探讨直接注射移植人胚胎生殖干细胞对大鼠心肌梗死的影响。方法：缝扎SD大鼠左冠状动脉前降支，建立心肌梗死模型。取5～10周人胚胎生殖腺嵴，组织块体外培养，生物学鉴定为人胚胎生殖干细胞（hEG）。将其直接注射于大鼠急性心肌梗死边缘。于移植后1d、1、2、4周处死大鼠，免疫组织化学方法观察心肌特异转录因子GATA-4和抗人细胞核抗体MAB1281在移植细胞的表达。结果：免疫组织化学显示移植组MAB1281检测阳性，GATA-4在移植细胞阳性表达。结论：hEG细胞直接注射移植大鼠心肌梗死处，细胞能存活并呈现向心肌细胞分化的表现，显示出正常心肌细胞的光镜结构。

具SR性质的基本双圈图

设图G邻接矩阵为A(G)的每一特征值λ的倒数1/λ也是A(G)的特征值,则称G具有R性质;而且,若λ的重数与1/λ的重数也相等,则称G具有SR性质.证明了具SR性质的基本双圈图只有一个图.

人胚胎生殖细胞体外培养条件优化及细胞移植实验研究

目的:优化人胚胎生殖细胞(EG细胞)的体外培养体系,并将生长状态良好的传代的人EG细胞移植用于大鼠心肌梗死模型的治疗。探讨人胚胎生殖细胞进行异种移植对大鼠心肌梗死的治疗机制。方法:取5～10周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜,用添加和不添加细胞因子的两种培养体系对比进行组织块原代及传代培养,选取生长情况良好的传至第4代的人EG细胞,移植到急性心肌梗死大鼠的梗死心肌周围,分别于移植后1天、1、2、4周处死大鼠,以鼠抗人细胞核抗体MAB1281作为示踪剂,通过免疫组化方法检测移植细胞的分布。结果:在培养液中添加LIF和b-FGF后原代及传代培养的人EG细胞生长旺盛,形成集落更早,传到第4代形成的集落体积变化不大:移植组人EG细胞在移植后1天、1周、2周、4周均可以在心梗区域观察到MAB1281阳性细胞。结论:添加LIF和b-FGF的培养体系是更高效的人EG细胞培养体系。人EG细胞可异种移植,人EG细胞在大鼠心肌梗死处由心外膜层逐渐向心肌层迁移。

快乐是简单到一个微笑

快乐感言：“祝您愉快!生日快乐!笑口常开!要开心哦!”这些常常挂在嘴边的快乐，似乎让人觉得快乐缺得很多。但我却觉得快乐无时无刻无处不在因为，快乐本是简单的，简单到一个微笑就能让人快乐起来、快乐又是温暖的，它的传递和分享总是让人感到其乐融融。

人胚胎生殖细胞移植治疗猪心肌梗死

目的：研究人胚胎生殖细胞（EG细胞）移植猪心肌梗死区存活及心肌再生作用。方法：取5～10周人胚胎生殖腺嵴，采用组织块培养法体外培养获得人胚胎生殖细胞。取太湖小型猪2只，分移植组和对照组，开胸结扎冠状动脉左前降支制作心肌梗死模型。术后2周处死猪，取出心肌组织，以鼠抗人细胞核抗体MABl281作为示踪剂，免疫组织化学检测移植细胞的存活情况；并观察转录因子GATA_4、连接蛋白Cx43、心肌转录因子NKx-2．5和心肌肌钙蛋白T（cTnT）在移植猪心组织的表达。结果：成功地建立猪急性心肌梗死模型，结扎冠脉后可见心电图典型的心肌梗死变化；免疫组织化学显示移植组MABl281阳性细胞，GATA_4、Cx43、Nkx2．5和cTnT均阳性表达。结论：人EG细胞移植于此模型的心肌组织中不仅存活，而且能向心肌细胞分化，具有心肌再生能力。

检测P-选择素3种方法的比较及临床应用

用时间分辨荧光免疫分析 (TRFIA)和二位点酶联免疫 (ELISA)测定血浆中P -选择素含量 ;用异硫氰酸荧光素 (FITC)标记P -选择素单抗 ,测定血小板膜P -选择素表达。对同一批样品进行测定比较及临床应用。并讨论了 3种方法的相关性。

46例新生儿先天愚型的临床实验研究

对新生儿采用外周血染色体检查及核型分析研究 ,发现先天愚型 46例。

人胚胎生殖细胞移植大鼠急性心肌梗死区的存活及分化

目的观察人胚胎生殖细胞移植于大鼠急性心肌梗死区后的存活率和增殖分化能力,探讨人胚胎生殖细胞异种异体移植的可行性。方法取5～9周人胚胎生殖脊细胞,分离、体外培养获得胚胎生殖细胞;用SD大鼠建立心肌梗死模型,分为对照组、移植组。分别在移植后1 d和1、2、4周处死大鼠,以抗人细胞核抗体MAB1281作为示踪剂,观察转录因子Nkx-2.5在移植大鼠心脏组织的阳性表达;分析人胚胎生殖细胞在宿主体内转化为心肌细胞的能力。结果成功建立大鼠心肌梗死模型;移植组心肌梗死区抗人细胞核抗体MAB1281和转录因子Nkx-2.5均呈阳性表达,对照组均为阴性表达。结论人胚胎生殖细胞植入心肌组织后,不仅在心肌内存活而且表现出向心肌细胞分化的特性。

孕期母鼠体内给予尼古丁对子代水盐代谢的影响

目的观察孕期母鼠体内给予尼古丁对子代肾素血管紧张素系统(RAS)调控的水盐代谢的影响。方法妊娠期母鼠皮下注射尼古丁,检测其胎鼠和成年子代鼠(4个月)体质量、血钠离子(Na+)和钾离子(K+)浓度及血浆渗透压(Osm)水平;记录成年子代鼠在脱水24h后氯化钠(1.8%NaCl)和水的摄取量,并检测其脑内血管紧张素受体AT1R、AT2R蛋白的表达。结果孕期母鼠体内经尼古丁刺激,胎鼠的体质量明显降低但其成年子代鼠的体质量与对照组无明显差异(P>0.005);胎鼠及成年子代鼠循环血液中Na+、K+浓度及Osm也无明显变化。孕期尼古丁暴露的成年子代鼠脱水24h后,饮盐水量(2h内和24h内)明显增加,且其子代鼠脑组织AT1R和AT2R蛋白的表达量明显下降,与对照组比较均有明显差异(均P<0.05)。结论孕期尼古丁可影响成年子代在脱水应激下的摄盐水平,且该变化可能与子代中枢血管紧张素受体表达下调有关。

大鼠心肌梗死模型的建立

目的探讨大鼠心肌梗死动物模型的构建方法。方法用4%水合氯醛麻醉SD大鼠,缝扎左冠状动脉前降支,阻断冠状动脉血流,造成心肌梗死,形成与临床相似的病理生理过程。结果大鼠术后20 min,心电图肢体导联ST段弓背向上抬高,出现病理性Q波。组织切片镜下观察病变区心肌细胞排列紊乱、疏松,细胞核固缩、碎裂。结论该心肌梗死动物模型构建方法简单,创伤轻,成功率高,结果可靠。

低氧对小鼠胚胎干细胞诱导分化成心肌细胞的影响

目的探讨在胚胎干细胞诱导分化过程的不同阶段进行低氧处理对分化心肌细胞的影响。方法建立胚胎干细胞向心肌细胞诱导分化的实验方法,在分化过程的不同阶段采取低氧(氧浓度为4%)处理,并设立常氧组(约为20%)作为对照,用免疫荧光鉴定分化后的心肌细胞,以流式细胞术检测低氧对分化心肌细胞的增殖、分化、凋亡的影响。结果分化细胞经免疫荧光检测显示,部分细胞呈α辅肌动蛋白阳性(红色)、心肌肌钙蛋白I阳性(绿色);分化细胞经流式检测显示,与常氧组相比,悬滴低氧组α-actinin阳性细胞和cTnI阳性细胞的比率分别提高了12.55%(P<0.01)和6.11%(P<0.05),悬浮低氧组凋亡比率与常氧组相比明显提高(P<0.01),悬滴低氧组处于S期的细胞比率与常氧组相比明显降低(P<0.01)。结论在胚胎干细胞向心肌细胞的定向诱导分化过程中,采用悬滴阶段低氧处理,使心肌特异性蛋白阳性细胞比率提高,细胞凋亡率稳定,细胞增殖能力因细胞分化成熟而有所降低,为低氧处理的最佳方案。

抗坏血酸体外诱导人胚胎生殖细胞向心肌细胞分化

目的探讨抗坏血酸作为诱导剂诱导人胚胎生殖细胞(hEGC)体外分化为心肌细胞。方法取5～10周人胚胎生殖腺嵴,进行组织块体外培养,用直接悬浮法使hEGC形成拟胚体(EBs),用不同浓度抗坏血酸的培养基对其进行诱导分化。然后取不同时间的细胞做免疫细胞化学染色,鉴定细胞的心肌特异转录因子GATA-4和心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达情况。结果抗坏血酸诱导hEGC分化为心肌细胞的最佳浓度为0.1mg/ml,诱导第3周时分化率达(85.2±1.8)%,显著高于不添加任何诱导剂的对照组。诱导后细胞形态变成梭形,4周时细胞突起相互连接成条索状,且排列方向趋于一致;诱导后1周即开始出现GATA-4弱表达,第3周时表达最强;诱导后2周,细胞内开始表达cTnT,3周强阳性表达,4周表达明显增强。结论抗坏血酸能够促进hEGC向心肌细胞分化,可用以建立体外诱导hEGC分化为心肌细胞的方法 。

人胚胎生殖干细胞移植及心肌再生

目的探讨直接注射移植人胚胎生殖(EG)细胞对大鼠心肌梗死的影响。方法40只SD大鼠经缝扎左冠状动脉前降支,建立急性心肌梗死(AMI)模型,分干细胞移植组和对照组。取5～10周人胚胎生殖腺嵴,组织块体外培养,生物学鉴定证实为人EG细胞,将其直接注入大鼠急性心肌梗死区边缘。移植后1 d,1、2、4周处死大鼠,采用免疫组化法观察心肌形成转录因子Nkx 2.5在移植细胞的表达。结果移植组鼠抗人细胞核抗体MAB1281检测阳性,心肌形成转录因子Nkx2.5在移植细胞阳性表达。结论人EG细胞直接注入移植大鼠心肌梗死处,细胞能存活并呈现向心肌细胞分化的表型。