人类乳头状瘤病毒E6相关蛋白的原核表达及纯化

目的原核表达及纯化带GST标签的人类乳头状瘤病毒E6相关蛋白E6AP,为研究泛素化修饰与多种疾病的机制关联提供实验基础。方法以人卵巢文库为模板,利用PCR技术扩增E6AP编码序列,将其插入pGEX KG GST载体中。利用DH5α感受态细胞鉴定重组质粒并大量克隆。质粒转入大肠杆菌Rossate菌株,小量诱导表达。利用GST融合蛋白纯化磁珠提取并纯化GST E6AP融合蛋白,SDS PAGE电泳和Western印迹检测纯化效率。结果PCR技术成功获取大小约为2559 bp的E6AP编码序列,与pGEX KG GST载体连接,双酶切鉴定及公司测序结果显示GST E6AP载体构建成功。转入Rossate菌株后诱导质粒小量表达,获取并提纯带有GST标签的E6AP重组蛋白。SDS PAGE电泳和Western印迹结果显示E6AP蛋白纯化成功。结论成功构建重组质粒并表达GST E6AP蛋白,获取纯化E6AP蛋白,为进一步研究泛素化在疾病发生发展中的地位和作用奠定坚实基础。