胚胎干细胞发育相关基因PLK1在细粒棘球绦虫体外不同发育时期差异表达研究

目的探究PLK1基因在细粒棘球绦虫不同发育时期的表达情况。方法体外培养细粒棘球绦虫原头蚴在犬胆汁刺激下向成虫方向发育,收集不同发育时期的虫体,通过免疫组化定位PLK1基因的表达。光学显微镜下切割分离成虫头节和后颈节段,收集样本运用荧光定量qPCR量化PLK1基因在虫体不同发育时期或不同部位的表达量水平,用SPSS 26.0软件进行单因素方差分析。结果成功建立了细粒棘球绦虫原头蚴向成虫方向发育的体外培养模型,体外培养的虫体56 d获得4个节片;PLK1基因在细粒棘球绦虫包囊生发层中高表达量。虽然在成虫和原头蚴表达较低,但免疫组化显示在原头蚴吸盘的底部和成虫头节的下部链体延长区域的表达高于其他部位(F=14.87,P<0.05)。结论细粒棘球绦虫干细胞相关基因PLK1的表达明显位于生发层细胞和激活原头蚴的头节底部以及链体增长区域,PLK1是棘球绦虫成虫发育干细胞区域的高表达基因。

泡球蚴组织体外培养的生长发育观察

目的观察体外培养泡球蚴的生长发育特性。方法在肝癌细胞系条件下体外培养泡球蚴,用光学显微镜定期观察其数量、大小及形态变化,并绘制囊泡生长曲线。用电子显微镜观察囊泡形态结构。结果体外培养后泡球蚴增多,至22 d其数量相当于开始培养第3～4天的6～7倍;囊泡具有出芽生殖能力。起初均为小囊泡,随时间增加,囊泡的直径也增加,在第22天时约30％为大的囊泡,70％为小的囊泡。发现介于原头蚴与囊泡之间的形态。结论肝癌细胞系体外培养的泡球蚴,生长发育较好且数量增加,可获得纯度较高的分泌或排泄抗原,该方法可为泡球蚴生物学及相关实验研究提供充分实验材料。

家犬粪便中的细粒棘球绦虫DNA PCR检测方法的建立

目的建立检测家犬粪便中细粒棘球绦虫DNA的PCR方法,为开展流行病学监测提供检测手段。方法犬粪经液氮反复冻溶后提取DNA,PCR扩增编码细粒棘球绦虫12s rDNA检测该靶DNA片段(255 bp)。结果10只细粒棘球绦虫感染犬,8只(体内成虫数>80条)阳性,2只(体内成虫数分别为4条和5条)阴性。4只未感染家犬粪样及其他3种绦虫DNA样本均为阴性。结论初步建立了灵敏、特异的检测家犬粪便中细粒棘球绦虫的PCR方法。

过量氟引起成骨细胞内质网应激信号通路的基因差异表达

目的：观察人成骨细胞在过量氟作用下未折叠蛋白反应（UPR）信号通路的差异基因表达，探索在氟中毒条件下成骨细胞内质网应激的作用。方法体外培养人成骨细胞染氟模型，用不同浓度的氟干预24 h后M T S法检测细胞存活率和流式细胞仪检测细胞凋亡百分率，用UPR信号通路PCR Array芯片检测通路中相关基因表达的情况，并用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测蛋白表达。结果在氟化钠浓度为0、5、10、20、40、80 mg/L 时，细胞存活率分别为（100．6785±2．8303）％、（105．3934±2．5384）％、（106．1257±2．0483）％、（77．9773±2．5443）％（与对照组比较 P＜0．05）、（30．2377±0．6327）％（与对照组比较 P＜0．05）。流式细胞仪检测，凋亡率分别为5mg/L组4．8％，10mg/L组13．8％，20mg/L组37．0％，40mg/L组58．9％，80 mg/L组63．2％（P＜0．05）。PCR芯片检测发现1个基因表达下调，14个基因表达上调。Western blot结果显示， BIP、ATF4、CHOP、IRE1均呈现出不同程度的随氟剂量增加蛋白表达逐渐上调。XBP1在NaF 5～20 mg/L表达逐渐增强，在40与80 mg/L时表达减弱。结论氟化钠可以通过PERK和IRE1途径引起成骨细胞内质网应激，并且可以引起成骨细胞凋亡。

β-胡萝卜素与番茄红素体外抗肿瘤作用研究

目的 :研究 β-胡萝卜素与番茄红素的抗肿瘤作用及范围。方法 :采用体外细胞培养技术观察 β-胡萝卜素和番茄红素对大鼠正常肝细胞 (BRL)、人肝癌细胞 (QGY- 770 3,Q3)、人宫颈癌细胞 (Hela)、人肾癌细胞 (786 - O)4种细胞系的细胞存活量及蛋白质含量的影响。结果:β-胡萝卜素只在 3× 10 - 4 mol/ L对 Hela细胞呈现抑制作用 ,而在 3× 10 - 4 m ol/ L、3× 10 - 5m ol/ L对 Q3和 786 - O都具有明显抑制作用。番茄红素在 10 - 5mol/ L和 10 - 6mol/ L对 3种癌细胞均显示出明显的抑制作用。β-胡萝卜素和番茄红素对 BRL细胞的生长未显示出抑制作用。结论 :β-胡萝卜素和番茄红素对上述 3种癌细胞均有抑制生长作用。

PCR方法诊断家犬感染细粒棘球绦虫的特异性及在临床诊断中的应用价值

目的验证PCR方法检测终宿主家犬感染细粒棘球绦虫的特异性及其在临床诊断中的应用价值。方法取感染细粒棘球绦虫家犬粪便,显微镜下计数细粒棘球绦虫虫卵,稀释后PCR检测其敏感性。同时取家犬小肠内水泡带绦虫、多头绦虫、羊绦虫,将其DNA与细粒棘球绦虫DNA一起进行PCR扩增,观察其特异性。对133 bp的目标条带进行序列测定,对比分析。结果PCR检测终宿主家犬感染细粒棘球绦虫具有高度的灵敏性,即使粪便中有1个虫卵(8pg的DNA),也能测出,但扩增后特异性较差,无法利用扩增带型进行诊断。4种寄生虫均具有相同的133 bp DNA重复序列,在400 bp均可检测出相同条带。结论PCR方法检测终宿主感染细粒棘球绦虫DNA重复序列尽管有优良的灵敏性,因其特异性差,不适合用于临床诊断和推广。

氟对人成骨细胞氧化应激和骨连接素表达的影响

目的观察氟对体外培养人成骨肉瘤细胞内骨粘连蛋白/骨连接素(osteonectin,ON)基因表达及氧化应激状态的影响。方法采用McCOY’s 5A培养基培养人成骨肉瘤细胞Saos-2。按照染氟剂量将骨肉瘤细胞Saos-2分为0(对照组)、0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000、40.000、80.000mg/L组。培养24h后收集细胞,实时荧光定量PCR(real-time RT-PCR)测定成骨细胞成骨相关基因ON mRNA的表达,用双标准曲线法计算基因表达的相对比值。氧化应激状态用化学比色法分别测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的活性。结果 0.625、1.250、2.500、5.000mg/L组成骨肉瘤细胞ON mRNA表达分别为(0.014 3±0.032)、(0.057 3±0.02)、(0.042 8±0.017 7)、(0.076 2±0.005),低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.01),但10.000、20.000mg/L组成骨肉瘤细胞ON mRNA表达分别为(11.6±1.01)、(12.7±1.18)、(1.65±0.00)、(1.97±0.46),明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),组间比较差异有统计学意义(F=305.842,P<0.01)。5.000～80.000 mg/L组SOD的活性分别为(94.14±3.16)、(63.36±3.63)、(53.00±4.26)、(55.50±5.89)、(53.46±6.40)×103 U/g,与对照组[(122.34±6.99)×103 U/g]比较明显降低,组间比较差异有统计学意义(F=21.734,P<0.01)。10.00mg/L组MDA的活性为(7.74±1.43)μmol/g,与对照组[(4.99±0.65)μmol/g]比较明显升高,组间比较差异有统计学意义(F=3.067,P<0.05)。成骨细胞内ON表达水平与SOD活力呈明显负相关。结论氟可能通过影响成骨细胞内骨连接素基因的表达和氧化应激状态而改变正常的成骨分化。

番茄红素体外抗肿瘤作用实验研究

目的:研究番茄红素体外抑制肿瘤的可能机制。方法 :采用体外细胞培养技术观察番茄红素对人宫颈癌细胞 (Hela)、人肝癌细胞 (QGY- 770 3,Q3)、人肾癌细胞 (786 - O) 3种细胞系细胞凋亡及突变型 p5 3蛋白表达的影响。 结果 :吖啶橙荧光染色后未发现 3种癌细胞 (Hela、Q3、786 - O)有典型凋亡现象 ,Hoechst332 5 8荧光染色后在所试 2种癌细胞 (Hela、786 - O)中无典型凋亡现象。利用 DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测细胞凋亡未见 3种 DNA移动呈“梯形”条带。受试物对 Hela、786 - O2种细胞突变型 p5 3蛋白表达的检测与未加受试物的空白对照相比未显示出明显变化。 结论 :番茄红素在体外对所试 3种癌细胞的抑制生长作用可能与促细胞凋亡无关 ,该作用也不是通过抑制突变型 p5 3蛋白表达途径实现的。

5对引物检测犬棘球蚴病感染方法评价

目的 评估5对引物检测犬棘球蚴病感染的PCR方法并建立可将多房棘球绦虫及细粒棘球绦虫羊株（G1型）和骆驼株（G6型）区分的方法。方法 选用引物BG1／3、Bretange：1／2、Eg1f／1r、EM—H15／H17和Cabrera：1／2，扩增稀释的细粒棘球绦虫虫卵DNA，进行敏感度测定。对水泡带绦虫、多头绦虫、羊绦虫、多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫G1型和G6型进行PCR扩增，测定引物的特异度。结果 5对引物在体外均能检测出1个虫卵的稀释度。Cabrera：1／2引物能在6种寄生虫样本中扩增出相同片段大小的条带：Bretange：1／2引物可以扩增出多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫G1型和G6型；BG1／3引物可以在多房棘球绦虫和细粒棘球绦虫G1型中扩增出1条带，在细粒棘球绦虫G6型中扩增出2条带：Eg1f／1r可以在细粒棘球绦虫G1型和G6型中扩增出相同片段大小的条带；EM—H15／H17可以在多房棘球绦虫和细粒棘球绦虫G6型中扩增出相同的条带。结论 5对引物中BG1／3具有较强的特异性，其余4对引物特异性不强；利用BG1／3和Eg1f／1r、EM—H15／H17组合可以方便区分细粒棘球绦虫G1型、G6型和多房棘球绦虫。

抗细粒棘球绦虫成虫单克隆抗体的制备及鉴定

目的 建立能分泌与细粒棘球绦虫 (简称包虫 )成虫特异结合的抗包虫成虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法 用包虫成虫抗原免疫BALB/c小鼠后 ,获取免疫的脾细胞 ,与小鼠骨髓瘤细胞SP2 / 0融合。结果 ELISA方法筛选出 1株能持续稳定分泌抗包虫成虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,1F5E3C9E9D5杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体可以与包虫成虫、棘球蚴结合 ,与囊液抗原呈边缘性阳性反应 ,而与泡球蚴EM2抗原呈阴性反应。冻存 1个月后复苏 ,仍能稳定分泌。经免疫组织化学检测发现 ,该单克隆抗体与棘球蚴的生发层 ,棘球蚴原头节虫体呈阳性反应。结论 1F5E3C9E9D5是一株稳定的杂交瘤细胞株 ,所分泌的抗细粒棘球绦虫成虫单克隆抗体在粪抗原的检测方面有应用前景。

氟致成骨细胞内质网应激对骨转化基因表达的影响

摄入过量氟能够引起成年人氟骨症.研究发现氟可以诱导成骨细胞内质网应激,同时会对成骨细胞的骨发生作用产生影响[1].将氟诱导的成骨细胞内质网应激与骨转化基因进行联合系统的研究未见报道.本研究用PCR芯片观察成骨细胞内质网应激情况下骨转化相关基因的变化,为探索氟中毒机制提供理论依据.

过量氟对成骨细胞非折叠蛋白反应的影响

目的探讨钙连接蛋白(CNX)、钙网蛋白(CRT)和免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)在高氟处理人成骨细胞后引起非折叠蛋白反应中的作用。方法免疫印迹法测定不同浓度氟化钠处理人成骨细胞Saos-2 24 h后,细胞内CNX、CRT、生长停滞与DNA损害可诱导基因34(GADD34)和BIP蛋白表达水平。结果高氟能诱导成骨细胞内BIP表达量的增加,抑制CNX表达。对CRT蛋白表达影响较小,仅在氟化钠20 mg/L时表达增高。GADD34在所试细胞中不表达。绘制了4种蛋白相互作用的关系图。结论氟引起非折叠蛋白反应,分子伴侣CNX/CRT循环异常可能是氟骨症骨细胞受损的机制之一。

黑加仑营养成分及保健功能研究进展

黑加仑是一种多年生小灌木 ,营养成分多 ,籽、果实、叶子以及色素均可利用 ,是很有发展前景的天然食物资源。籽中的γ 亚麻酸通过减少前列腺素E2 的产生可减轻炎症反应 ;果实中含有较多的槲皮素及花青苷 ,分别具有抗氧化、抗肿瘤、提高免疫力和抗病毒的作用 ;叶子的提取物选择性作用于环氧酶 2 ,具有抗炎活性 ;其色素主要是花青素类 。

巢式PCR在鉴别多房棘球绦虫及细粒棘球绦虫基因亚型中的应用

目的探索巢式PCR在鉴别多房棘球绦虫及细粒棘球绦虫基因亚型中的应用价值。方法将水泡带绦虫、犬弓首蛔虫、多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫羊株和骆驼株等样本的DNA用巢式PCR扩增。结果巢式PCR可以扩增出多房棘球绦虫和水泡带绦虫,而对细粒棘球绦虫羊株和骆驼株及其他寄生虫均不能扩增出。结论在鉴别细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫方面,巢式PCR有一定的诊断意义,但不能用于鉴别细粒棘球绦虫基因亚型。

番茄红素的生物学特性研究进展

对番茄红素的理化性质、在体内的吸收分布与代谢进行了阐述 ,从流行病学、动物实验、细胞生物学和分子生物学等方面对番茄红素在抗氧化、抗肿瘤。

氟暴露患者外周血中MCM3的表达及肝肾功能变化

背景:前期研究发现MCM3与氟中毒相关,但其在氟中毒早期暴露者中的表达情况尚不清楚。目的:分析氟暴露患者及对照人群外周血中MCM3 mRNA的表达量。方法:选取饮水型氟中毒轻度患者(暴露组)、对照人群(非暴露组)各11例,采用SYBRGreen1嵌合荧光法实时定量PCR检测外周血单个核细胞中MCM3 mRNA的表达,同时测定两组肝肾功能指标。结果与结论:暴露组及非暴露组MCM3 mRNA表达量分别为0.573 60±0.102 59、0.550 0±0.171 81,两组差异无显著性意义(P>0.05)。所测的肝肾功能指标在两组中差异无显著性意义。结果显示轻度氟暴露对患者外周血单个核细胞中MCM3 mRNA表达无显著影响。氟对暴露者肝、肾功能的影响需要选取更多的指标综合分析。

衣霉素诱导人成骨细胞内质网应激与骨发生特征

内质网是细胞内重要的细胞器，其功能损伤可以引起内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）。ERS是细胞内一种适应性机制，可以影响成骨细胞的功能和分化，持续或过强的ERS如果不能恢复则会诱导细胞凋亡，从而导致各种骨细胞相关性疾病发生。

包虫病患者血清中sICAM-1水平的检测

目的通过检测包虫病患者血清sICAM-1水平,为探讨包虫免疫逃避机理提供资料。方法以ELISA双抗体夹心法检测40名包虫病患者和16名健康体检者血清中sICAM-1水平。结果包虫病患者和健康体检者血清中sICAM-1的水平分别为(106.76±15.68)pmol/L和(43.42±31.41)pmol/L,两者间差异有显著性(P<0.05)。结论人体感染包虫后,sICAM-1的合成增加。

培养细胞图片在组织学教学中的应用体会

组织学是重要的医学基础课,属于形态学科。目前,组织学教学多采用多媒体技术,内容主要是观察组织的平面结构,欠缺单个细胞结构的观察。将细胞培养的图片应用于教学是以细胞形态为中心讲授细胞结构和功能,并以此为基础,讲授组织的结构和功能,启发学生思维,充分发挥想象力,提高课堂教学的趣味性,培养学生的科研意识,促进基础医学知识的前后连贯。