慢性酒精摄入所致的肝细胞上皮-间充质转化参与小鼠肝纤维化形成

目的:探讨慢性酒精摄入对肝组织病理学改变的影响及上皮-间充质转化对肝纤维化形成的作用。方法:将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为3组:对照组灌胃给予与酒精组等体积的蒸馏水,低剂量和高剂量酒精组分别灌胃给予2.0 g·kg-1·d-1和4.0 g·kg-1·d-1酒精5个月。肝组织病理学改变和纤维化分别用HE和Masson三染色观察;荧光标记的TUNEL法检测肝组织细胞凋亡;自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;肝组织成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏素表达采用免疫荧光观察;E-钙黏素、α-SMA、FSP-1、转化生长因子β1(TGF-β1)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达水平用Western blotting检测。结果:与对照组相比,小鼠酒精灌胃5个月后,血清ALT和AST活性升高;肝组织细胞凋亡增加;低剂量酒精组呈现肝脂肪变性和轻度的肝纤维化,高剂量酒精组呈现出严重的肝纤维化;肝组织丙二醛(MDA)含量升高,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)下降;肝细胞E-钙黏素表达下降,α-SMA表达增加;低剂量酒精组肝细胞内白蛋白和FSP-1共定位,而高剂量酒精组肝细胞内只表达FSP-1;Western blotting检测结果显示,E-钙黏素表达下降,而α-SMA、FSP-1、TGF-β1和HIF-1α蛋白表达水平升高,但是HIF-1α蛋白表达水平在高、低酒精组之间无差别。结论:慢性酒精摄入可诱导肝纤维化,部分成纤维细胞来源于肝细胞上皮-间充质转化,其机制可能与肝细胞氧化状态、TGF-β1及HIF-1α升高有关。

硫化氢对肥胖小鼠肝脂质蓄积的影响

目的探讨硫化氢对肥胖小鼠肝脏脂质蓄积的影响。方法 C57BL/6J小鼠,随机分为对照组、模型组、硫化氢干预组。对照组喂普通饲料,模型组和硫化氢干预组喂高脂饲料。从第13周开始,硫化氢干预组注射硫氢化钠,剂量为50μmol·kg-1·d-1,模型组注射等量生理盐水,16周末处死动物。肝脏组织匀浆,取上清,做生化检测,测量各组小鼠肝组织中甘油三酯、胆固醇含量;肝脏石蜡切片做H&E染色观察肝组织一般形态;冷冻切片,油红染色观察肝组织脂质蓄积情况;肝脏新鲜冰冻组织提取RNA,PCR检测小鼠肝脏中CPT-1、FAS的基因表达情况,并用ELISA法检测CPT-1、FAS的活性。结果模型组、硫化氢干预组小鼠体重明显高于对照组。与模型组相比,硫化氢干预组小鼠体重减轻;肝组织内甘油三酯、胆固醇含量明显下降;肝组织病理变化程度减轻,脂质蓄积减少;肝脏CPT-1表达及活性增高,FAS表达及活性降低。结论硫化氢可以降低肥胖小鼠肝组织脂肪含量,减轻肝脂肪变性程度,其机制可能与肝组织CPT-1表达增加、FAS表达下降有关。

外源性硫化氢对小鼠原代肝细胞内脂质自噬分解的影响

目的:研究硫化氢(H2S)供体GYY4137释放的外源性H2S对小鼠原代肝细胞内脂质自噬分解的影响。方法:采用2步原位灌流法分离C57BL/6小鼠原代肝细胞并分为4组:用正常培养基培养正常组细胞;模型组用含1.2 mmol/L油酸(溶于10%的BSA)的培养基培养48 h;H2S组和炔丙基甘氨酸(PAG)组则用1.2 mmol/L油酸(溶于10%的BSA)的培养液培养48 h,然后换无血清无酚红的RPMI-1640培养液(同时分别给予1 mmol/L GYY4137和200μmol/L PAG)处理6 h。收集各组细胞做LC3免疫荧光染色,拍摄荧光和相差图片;Western blot检测肝细胞中LC3-Ⅰ/Ⅱ的蛋白表达量;透射电镜观察肝细胞超微结构。结果:和模型组相比,H2S组肝细胞内LC3荧光颗粒和蛋白表达量增加,自噬溶酶体数量增加,细胞内空泡增多。结论:外源性H2S可促进脂肪变性肝细胞内脂质自噬分解。

GYY4137对小鼠原代肝细胞胞质内脂质分解的影响

目的:探讨新合成的硫化氢(H2S)供体GYY4137对小鼠原代肝脂肪变性细胞胞质内脂质分解的影响。方法:体外用油酸诱导肝细胞脂肪变性模型。采用两步原位灌流法分离C57BL/6小鼠原代肝细胞并分为4组:对照组用正常培养液培养54 h;模型组用含1.2 mmol/L油酸(溶于10%BSA)的培养液培养48 h,再用RPMI-1640培养液培养6 h;H2S组和DL-炔丙基甘氨酸(PAG;胱硫醚γ-裂解酶抑制剂,抑制H2S合成)组则用含有1.2mmol/L油酸的培养液培养48 h,再用无血清无酚红的RPMI-1640培养液(分别给予含有1 mmol/L GYY4137和200μmol/L PAG)培养6 h。测量细胞甘油释放量及胞内激素敏感性脂肪酶(HSL)的蛋白表达量。结果:和模型组相比,H_2S组培养液中甘油释放量和磷酸化HSL(p-HSL)蛋白表达水平明显降低,而PAG组又明显升高。结论:在小鼠原代脂肪变性肝细胞中,GYY4137可能通过抑制HSL的磷酸化水平而减少胞质内脂质分解。

PLOD1、NFE2L3在结直肠癌组织中的表达及意义

目的:探讨前胶原赖氨酸2-氧代戊二酸5-双加氧酶1(PLOD1)、核因子E2相关因子3(NFE2L3)在结直肠癌组织中的表达及其意义。方法:前瞻性选取我院2020年9月至2021年6月收治的90例结直肠癌患者进行研究,取患者癌组织及癌旁组织,检测PLOD1、NFE2L3表达水平。随访2年,根据随访结果将患者分为2个亚组,即转移组(20例)和非转移组(70例),比较2组患者一般临床特征及PLOD1、NFE2L3表达水平,并应用Logistic回归分析PLOD1、NFE2L3对结直肠癌转移的预测价值。结果:结直肠癌组织PLOD1、NFE2L3阳性表达率及相对表达量均高于癌旁组织(P<0.05)。转移组与非转移组患者性别、年龄、身体质量指数(BMI)、肿瘤位置、肿瘤直径比较无明显差异(P>0.05),转移组与非转移组患者临床分期、组织分化程度、PLOD1及NFE2L3阳性率比较差异显著(P<0.05);对单因素分析具有统计学差异的指标进行赋值,最终Logistic回归分析结果显示,临床分期、组织分化程度、PLOD1阳性及NFE2L3阳性表达为结直肠癌转移的独立影响因素(P<0.05)。结论:结直肠癌患者癌组织中PLOD1、NFE2L3表达水平明显上调,其表达与结直肠癌的转移密切相关,可考虑将PLOD1、NFE2L3作为结直肠癌转移的分子标记物。

亚硝酸钠增强自噬减轻肝脂肪变性的细胞脂肪蓄积

最近发现抑制自噬会加重肝细胞内脂肪蓄积,亚硝酸盐可以降低高脂饲养小鼠体内甘油三酯含量。因此,本实验目的在于观察亚硝酸盐对单纯性肝细胞脂肪变性的影响和自噬在其中的可能作用。首先用1.2 mmol·L-1油酸诱导人肝细胞系L-02细胞24 h建立肝细胞脂肪变性模型,再用0.2 mmol·L-1亚硝酸钠加或不加三甲基腺嘌呤(3-MA)或氯喹处理24 h。肝细胞脂质蓄积评价采用油红O染色和细胞内甘油三酯含量测定。1.2 mmol·L-1油酸诱导人肝细胞系L-02细胞24 h可以导致肝细胞明显的脂肪变性。用0.2 mmol·L-1亚硝酸钠处理L-02肝脂肪变性的细胞,可以明显减少肝细胞脂质蓄积,而3-MA可以减弱亚硝酸钠的这种效应;LC3-II免疫荧光、Western blot结果显示,亚硝酸钠促进L-02脂肪变性细胞LC3-II荧光颗粒和蛋白表达增加,氯喹同样可以增加这种现象;相差显微镜下显示细胞内空泡增多,溶酶体示踪剂荧光显微镜下发现,细胞溶酶体数量增多;电镜显示自噬溶酶体数量增加,氯喹可以减弱这种现象。这些结果表明,亚硝酸钠能够促进肝脂肪变性的L-02细胞自噬,促进脂质分解,减轻肝脂肪变性细胞脂质蓄积。

PD-L1、MSH2蛋白在结直肠癌组织中的表达及其与患者预后的相关性

目的:探讨程序性死亡配体1(PD-L1)、MutS蛋白同系物2(MSH2)蛋白在结直肠癌组织中的表达水平,并分析它们与患者预后的相关性。方法:选取2020年9月至2022年11月我院诊治的98例结直肠癌患者,比较其癌组织与癌旁组织PD-L1、MSH2表达水平,分析癌组织PD-L1、MSH2表达与结直肠癌患者临床病理参数及预后的关系。结果:结直肠癌组织中PD-L1阳性率(33.67%)、MSH2缺失率(6.12%)均明显高于癌旁组织(0和0),P<0.05。不同性别、疾病类型、肿瘤大小、分化程度、浸润深度患者的癌组织PD-L1阳性率比较差异均无统计学意义,P>0.05;年龄≥60者癌组织PD-L1阳性率明显高于年龄<60岁者,淋巴结转移者的癌组织PD-L1阳性率明显高于淋巴结未转移者,P<0.05。不同年龄、性别、疾病类型、肿瘤大小、分化程度、浸润深度患者的癌组织MSH2缺失率比较差异均无统计学意义,P>0.05;淋巴结转移者癌组织MSH2缺失率明显高于淋巴结未转移者,P<0.05。随访1年,疾病进展及死亡共24例,PD-L1阳性者疾病进展及死亡发生率(45.45%)明显高于PD-1阴性者(13.85%),P<0.05,MSH2缺失者疾病进展及死亡发生率(66.67%)明显高于MSH2未缺失者(21.74%),P<0.05。结论:结直肠癌组织PD-L1、MSH2表达均与患者淋巴结转移情况有关,且PD-L1阳性表达高、MSH2缺失高的结直肠癌患者预后不良。