邻苯二甲酸二乙基己酯及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯对雄性幼鼠生精细胞凋亡的影响

目的了解环境内分泌干扰因子邻苯二甲酸二乙基已酯(DEHP)及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯(MEHP)对雄性幼鼠生精细胞凋亡有否影响。方法生后2周龄的Wistar雄性幼鼠98只,随机分为14组,7只/组。随机选择1组行生理盐水(0.9%NS 0.2 ml.kg-.1d-1)灌胃喂养3周,作为正常对照组(NC组);再选1组行环磷酰胺(CTX 100 mg·kg-1·d-1)灌胃喂养1周,作为阳性对照组(PC组);余各组分别用DEHP、MEHP按低剂量(100 mg·kg-1·d-1)、中剂量(200 mg·kg-1·d-1)、高剂量(300 mg·kg-1·d-1)灌胃喂养1周;以及分别按低剂量(100 mg·kg-1·d-1)灌胃喂养1、2、3周分组,建立动物模型。观察不同时期、不同剂量下睾丸生精细胞的形态学变化,并应用TUNEL法检查睾丸生精细胞凋亡情况,放射免疫法检测血清性激素(卵泡刺激素FSH、黄体生成素LH以及睾酮T)水平。结果(1)睾丸生精细胞的变化:用药组生精细胞萎缩、发育落后、数量少,线粒体肿胀、空泡化等;在喂养1周的不同剂量组内,随剂量增加生精细胞损害加重,在低剂量不同喂养时间组内,随喂养时间的延长生精细胞损害亦加重;(2)睾丸组织中生精细胞凋亡:与NC组比较,用药组生精细胞凋亡显著增多(P<0.01);在喂养1周的不同剂量组内、以及低剂量不同喂养时间组内生精细胞凋亡间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);(3)血清性激素水平:与NC组比较,用药组FSH、LH水平升高,T水平下降(P<0.05);在喂养1周的不同剂量组内、以及低剂量不同喂养时间组内性激素水平间比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论 DEHP及代谢产物MEHP对幼鼠生精细胞凋亡有明显影响,且呈时间-量效依赖效应。

邻苯二甲酸二乙基己酯及代谢产物MEHP对幼鼠睾丸组织TGF-β1表达和端粒酶活性的影响

目的:观察邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯(MEHP)对幼鼠睾丸组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达和端粒酶活性的影响,探讨DEHP和MEHP损害生精功能可能的机制。方法:生后2周龄的Wistar雄性幼鼠96只,随机分8组,每组12只。随机选择1组行生理盐水[0.9%NS0.2 ml/(kg.d),喂养3周]灌胃,作为正常对照组(NC组);再选1组行环磷酰胺[CTX 100 mg/(kg.d),喂养1周]灌胃,作为阳性对照组(PC组);余各组分别用DEHP、MEHP按低剂量[100 mg/(kg.d),喂养3周]、中剂量[200 mg/(kg.d),喂养2周]、高剂量[300 mg/(kg.d),喂养1周]灌胃制作动物模型。观察不同时期、不同剂量下睾丸组织精子形态变化,光镜下计数精子头部及畸形率;应用免疫组化SABC法及RT-PCR法检查睾丸组织TGF-β1的表达,并测定面密度;ELISA法检查睾丸组织中端粒酶活性。结果:①睾丸组织内精子形态变化:用药组精子数量减少,出现精子断头、无钩、双尾等畸形精子;在光镜下精子计数,与NC组比较,用药各组精子头部显著减少(P<0.05),畸形率增加(P<0.05),但高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②睾丸组织TGF-β1的表达变化:NC组低表达,DEHP及代谢产物MEHP染毒各组生精细胞内表达增多,PC组大量表达,阳性细胞呈黄褐色,主要分布于胞膜及胞质。NC组面密度为0.156 0±0.003 5、TGF-β1mRNA为1.51±0.20,PC组面密度为0.534 0±0.003 1、TGF-β1 mRNA为8.43±1.75;用药的DEHP组面密度均值为0.289 0±0.003 6、TGF-β1 mRNA为3.83±1.57,MEHP组面密度均值为0.284 0±0.003 1、TGF-β1 mRNA为3.51±1.41,用药各组与NC组、PC组比较差异有统计学意义(P<0.01),但高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P>0.05);③睾丸组织中端粒酶活性:与NC组比较,用药各组睾丸组织中端粒酶活性下降(P<0.05),高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:DEHP及代谢产物MEHP对幼鼠生精功能有明显损害,其损害机制可能与DEHP及代谢产物MEHP诱导睾丸组织TGF-β1的表达水平升高、端粒酶活性降低有关。

新生鼠部分输尿管梗阻建立及梗阻解除的动物模型制作

目的探索新生鼠部分输尿管梗阻建立及梗阻解除的动物模型制作,为临床小儿肾积水的研究提供可靠的动物模型。方法生后48h内新生Wistar鼠72只,随机分为6组,每组12只,选择1组行假手术,作为对照组,余各组用腰大肌压迫法制作左侧部分输尿管梗阻性(PUO)肾积水模型,再随机分为组2～组6,作为模型组。3周后解除梗阻,术中观察梗阻肾体积是否增大,皮试针穿刺证实肾盂是否积水。组2梗阻解除后即处死,余各组分别于梗阻解除后第2、6、8、12周处死。实验动物处死后,切取肾脏行病理学检查。结果大体观察:梗阻侧输尿管上段增粗,肾盂扩张积水,梗阻肾外观体积较对侧肾脏及对照组同侧肾脏增大;对侧肾脏体积又较对照组同侧肾脏体积大。镜下观察:梗阻肾皮质变薄,肾单位减少,肾小球萎缩变形,肾小管扩张,出现肾间质纤维化;对侧肾脏肾单位较对照组增多,余形态学无异常改变。随梗阻解除时间延长,病肾肾小球及肾小管结构逐渐恢复,正常形态肾小球数目增多,肾间质纤维化逐渐减轻。结论本动物模型成功模拟了小儿肾积水梗阻解除前后的病理改变,可作为临床研究小儿肾积水的理想动物模型。

渐进性皮瓣转移技术联合改良Devine术治疗小儿隐匿性阴茎的效果评价

目的评价渐进性皮瓣转移技术联合改良Devine术治疗小儿隐匿阴茎临床效果。方法2020年7月~2021年7月收治的隐匿型阴茎患儿80例,根据手术方法分为两组,实验组44例,采用渐进性皮瓣转移技术联合改良Devine术;对照组36例,采用改良Devine术。记录两组手术时间、术中出血量、阴茎包皮水肿时间、阴茎延长长度、皮瓣感染坏死率及手术满意度。结果两组手术均获得成功,实验组患儿阴茎延长长度、包皮水肿时间及家属手术满意度分别为(2.67±0.29)cm、(55.09±5.52)天和95.5%,对照组分别为(2.12±0.36)cm,(70.22±7.73)天和75.0%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);实验组手术时间、术中出血量及术后皮瓣感染率分别为(66.61±7.45)分钟、(5.64±1.35)ml和2.3%,对照组分别为(63.58±8.07)分钟、(5.75±1.40)ml和2.8%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论渐进性皮瓣转移技术联合改良Devine术治疗小儿隐匿性阴茎,方法简单,术后效果肯定。

腹腔镜与传统开腹手术治疗小儿消化道磁性异物的对比研究

目的对比腹腔镜与传统开腹手术治疗小儿胃肠道磁性异物的优劣势。方法选取2011年2月~2021年7月本院收治的误服磁性异物患儿共38例,对其回顾性分析并分为两组,腹腔镜组(18例)和开腹组(20例),统计其年龄、性别、误服磁珠个数、穿孔数目及肠穿孔部位;对手术时间、失血量、术后疼痛评分、开始下床活动时间、禁食时间、并发症及住院时间进行分析。结果腹腔镜组手术时间为(125.6±34.0)分钟、术中失血量(5.9±1.9)ml,术后并发症为0例,开腹组分别为(128.0±33.0)分钟、(6.9±2.7)ml、2例,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);腹腔镜组术后疼痛评分为(3.2±0.5)分、开始下床活动时间(57.4±14.7)小时、禁食时间(3.8±0.5)天、住院时间(6.5±0.7)天,开腹组分别为(4.4±0.5)分、(83.9±18.9)小时、(5.7±1.9)天、(8.9±2.2)天,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在治疗胃肠道磁性异物时腹腔镜手术较传统开腹手术具有相同的安全性,且在术后康复方面优势明显。

16例乳腺多形性小叶癌临床病理资料分析

目的总结乳腺多形性小叶癌(BPLC)的临床病理资料,以探讨其诊断要点、有效治疗方法及预后。方法对16例BPLC患者的临床病理资料作回顾性分析。结果患者年龄47~82岁、中位年龄68. 5岁。16例患者中,无意中发现乳腺包块就诊4例、发现乳腺包块伴刺痛就诊2例、偶尔发现乳腺包块就诊5例、健康体检发现乳腺包块就诊5例。病理学表现:①大体病理:肿块直径在1. 1~8. 6 cm、平均4. 31 cm。肿块质地均柔软偏硬,切面灰白色,均无包膜。有2例(2/16)可见点状的粉刺样坏死组织。②HE染色镜下所见:多形性癌细胞异型性明显,核较经典型小叶癌细胞核大2~3倍;细胞之间有黏附性;核分裂象6~21个/10 HPF;伴有多形性小叶原位癌2例、经典型小叶原位癌14例、经典型浸润性小叶癌5例;多形性小叶原位癌中见粉刺样坏死2例、脉管内见癌栓5例、神经侵犯5例;间质中及其周围有显著淋巴细胞浸润6例;周围导管内见Paget样浸润3例;腋窝淋巴结转移13例;远处转移2例。③免疫表型:多形性成分ER 2例、PR3例,C-erbB-2阳性(3+) 8例、C-erbB-2不定性(2+) 6例、Cerb B-2阴性(0或1+) 2例;E-cadherin阴性9例、胞膜弱阳性4例、E-cadherin胞质阳性3例;p120胞质阳性16例;CK5/6灶区阳性7例、16例Ki-67阳性细胞表达率30%~60%。HER2基因扩增10例。3例接受内分泌治疗,9例有HER2扩增者接受赫赛汀治疗,接受化疗4例(具体方案不详)。截止到2018年6月30日,1例失访,8例死亡、其中有远处转移者2例。结论 BPLC多发生在老年女性人群中,临床多表现为乳腺包块;免疫荧光染色结果显示E-cadherin阴性,p120阳性是本病主要的诊断依据;手术是本病主要治疗方法,HER2基因阳性者可接受靶向治疗;本病易于发生淋巴结转移,预后较差。

横裁带蒂包皮瓣联合Brisson术治疗重度隐匿性阴茎的效果评价

目的探讨横裁阴茎背侧带蒂包皮瓣渐进性转移技术联合Brisson术治疗重度隐匿阴茎的效果评价,为临床提供依据。方法回顾性分析菏泽市立医院2019年3月—2021年3月收治的重度隐匿性阴茎患儿68例。其中46例采用横裁阴茎背侧带蒂包皮瓣渐进性转移技术联合改良Brisson术进行阴茎整形(观察组);22例采用改良Devine术进行阴茎整形(对照组)。通过观察记录术中出血量、手术时间、阴茎延长长度、皮瓣感染坏死率、阴茎包皮水肿时间、手术满意度评分及手术满意率评估手术效果。结果两组患儿手术均获得成功,观察组阴茎延长长度、阴茎包皮水肿时间及手术满意度评分为(2.76±0.31)cm、(57.93±4.86)d、(8.61±1.34)分,明显优于对照组的(2.38±0.35)cm、(69.50±6.80)d、(7.50±1.79)分,差异有统计学意义(t=4.305、8.040、2.852,P<0.05);观察组手术时间、术中出血量、术后感染率及手术满意度分别为(68.02±6.21)min、(6.43±1.15)mL、2.2%、91.3%,与对照组的(65.82±6.29)min、(6.05±1.21)mL、4.5%、72.7%比较,差异无统计学意义(t=1.357、1.259,χ^(2)=0.293、2.748,P>0.05)。结论横裁阴茎背侧带蒂包皮瓣渐进性转移技术联合Brisson术治疗重度隐匿性阴茎操作简单,效果肯定,值得临床上推广使用。

伴高分化脂肪肉瘤分化叶状肿瘤2例临床病理分析

目的观察伴高分化脂肪肉瘤分化叶状肿瘤(differentiation of well-differentiated liposarcoma in phyllodes tumor,DWLSPT)的临床病理学特征。方法对2例DWLSPT进行组织学观察、免疫组化标记,采用FISH检测MDM2和CDK4基因有无扩增。结果2例患者年龄分别为58岁和62岁,肿块直径分别为5.3 cm和6.9 cm;B超检查和钼靶检查的BI-RADS评分均为4B。均行单纯乳腺切除术+前哨淋巴结活检术。镜检:两者间质细胞均丰富,细胞均有异型性,核分裂象数分别为9个/10 HPF和18个/10 HPF,有分带现象;局部区域见WDLS成分,约占70%和10%,均未见坏死和神经侵犯,局部与周围境界不清;均无淋巴结转移和远处转移。免疫表型:WDLS成分S-100蛋白、p16阳性,MDM2、CDK4阴性;其余成分CD117阳性、CD34局灶阳性,Ki-67总增殖指数分别为20%和50%。临床分期均为ⅡB期。FISH检测均未检测到MDM2和CDK4基因扩增。随访:1例术后无瘤生存35个月,1例术后40个月时出现局部复发,复发病灶中无WDLS成分。结论DWLSPT中的脂肪肉瘤成分不表达MDM2和CDK4,也未检测出相应基因的扩增,复发病例中无脂肪肉瘤成分,故其可能不影响预后。

MicroRNA-613靶向调控FRS2抑制肾母细胞瘤发生发展

目的探讨肾母细胞瘤组织中miR-613表达水平及其抑制肾母细胞瘤细胞增殖的作用机制。方法收集64例肾母细胞瘤患者术后肾母细胞瘤组织及癌旁组织标本,用PCR检测组织中miR-613表达量。在SK-NEP-1和G401肾母细胞瘤细胞中转染miR-613模拟物,用Real-timePCR检测miR-613表达量。用MTT法检测miR-613对肾母细胞瘤细胞增殖的影响。用流式细胞仪检测miR-613对肾母细胞瘤细胞凋亡的影响。用生信分析及双荧光素酶报告基因预测及验证miR-613和FRS2的靶向关系。用Real-timePCR和Westernblot法检测FRS2基因的mRNA及蛋白表达的影响。结果肾母细胞瘤组织中miR-613表达量显著低于癌旁组织(P<0.05)。miR-613表达量与肾母细胞瘤患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移和病理学分型无关(P>0.05),与肿瘤临床病理分期相关(P<0.05)。转染miR-613mimics组肾母细胞瘤细胞中miR-613表达量显著高于空白组和miR-NC组(P<0.05)。在肾母细胞瘤细胞中,过表达miR-613能显著抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因证实FRS2是miR-613的靶基因,在肾母细胞瘤细胞中,过表达miR-613可抑制FRS2基因mRNA及蛋白表达量。结论miR-613是肾母细胞瘤发生中的抑癌因子,可能是通过靶向下调FRS2基因水平从而抑制肾母细胞瘤细胞的增殖。

邻苯二甲酸二乙基己酯及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯对幼鼠生精上皮的影响

目的了解环境内分泌干扰因子邻苯二甲酸二乙基已酯（Di-2-ethyhhexyl phthalate，DEHP）及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯（single-ethylhexylphthalate，MEHP）对幼鼠生精上皮有否损害。方法生后2周龄的Wistar雄性幼鼠96只，随机分8组，每组12只。随机选择1组行生理盐水（0．2ml·kg-1·d-1，喂养3周）灌胃，作为正常对照组（NC组）；再选1组行环磷酰胺（CTX100mg·kg-1·d-1，喂养1周）灌胃，作为阳性对照组（PC组）；余各组分别用DEHP、MEHP按低剂量（100mg·kg-1·d-1，喂养3周）、中剂量（200mg·kg-1·d-1，喂养2周）、高剂量（300mg·kg-1·d-1，喂养1周）灌胃制作动物模型。观察不同时期、不同剂量下睾丸生精上皮的变化，并应用TUNEL法检查生精上皮凋亡，免疫组织化学法检测睾丸组织中c-kit、P13K的表达，放射免疫法检测血清性激素（卵泡刺激素FSH、黄体生成素LH以及睾酮T）水平。结果睾丸生精上皮的变化：用药组生精上皮萎缩、发育落后，数量少、线粒体肿胀、空泡化等，但在用药的高剂量组短时间内损害与低剂量组长时间的损害一致；①睾丸组织中生精上皮凋亡：与NC组（凋亡指数AI：0．015±0．002）比较，用药组生精上皮凋亡（DEHP和MEHP组的A1分别为：0．051±0．004、0．073±0．005）显著增多（P〈O．01），但在高剂量短时间喂养组与低剂量长时间喂养组间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；②睾丸组织中c-kit、P13K的表达：与NC组（c—kit：0．389±0．014、P13K：0．457±0．011）比较，用药组睾丸组织中c-kit（DEHP和MEHP组分别为：0．185±0．018、0．165±0．014）及其下游信号分子P13K（DEHP和MEHP组分别为：0．205±0．019、0．189±0．017）的表达显著减少（P〈0．01），但高剂量短时间喂养组与低剂量长时间喂养组间比较，差异也无统计学意义（P〉0．05）。血清性激素水平：与NC组比较，用药组FSH、LH水平升高，T水平下降（P〈0．05）；但用药的高剂量组与低剂量组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论DEHP及代谢产物MEHP对幼鼠生精上皮有明显损害，推测可能对小儿的生精功能也有损害，小儿应避免过多的长期接触含DEHP及代谢产物MEHP的物质。

肾积水患儿病肾肾组织胰岛素样生长因子、内皮素、转化生长因子及单核细胞趋化蛋白表达变化的意义

目的检测肾积水患儿病肾肾组织胰岛素样生长因子(IGF-1)、内皮素(ET-1)、转化生长因子(TGF-β1)及单核细胞趋化蛋白(MCP-1)的表达变化,探讨其与病肾损害程度的关系。方法收集41例肾积水患儿病肾肾组织标本,并以病肾肾组织结构改变的病理分级(按Elder等标准分为Ⅰ～Ⅴ级)为标准进行分组。8例正常肾组织标本来自肾母细胞瘤周围正常肾组织。免疫组织化学法检测IGF-1、ET-1、TGF-β1及MCP-1在正常肾脏和病肾肾组织内的表达水平,反转录-PCR(RT-PCR)检测IGF-1、ET-1、TGF-β1及MCP-1的基因水平在正常肾脏和病肾肾组织内的表达变化,并与病理分级作相关分析。结果1.IGF-1在正常肾组织呈强阳性表达,在病肾的表达随病理分级的增加逐渐降低;ET-1、TGF-β1及MCP-1在正常肾组织呈弱阳性表达,在病肾的表达随病理分级的增加而升高。2.RT-PCR显示病肾IGF-1明显降低,为0.51±0.03,正常肾为0.97±0.05,差异有统计学意义(P<0.01);病肾ET-1、TGF-β1、MCP-1表达均明显升高,分别为0.41±0.03、0.49±0.05、0.71±0.06,正常肾相应值为0.05±0.02、0.03±0.01、0.09±0.03,差异均有统计学意义(Pa<0.05)。3.病肾IGF-1表达与病理分级呈显著负相关(r=-0.879P<0.01);ET-1、TGF-β1、MCP-1表达与病理分级呈弱正相关,但无统计学意义(P>0.05)。结论小儿肾积水病肾肾组织中IGF-1表达变化可作为临床评定肾损害程度的理想指标之一。