产淀粉酶和蛋白酶芽孢杆菌的筛选鉴定及其酶学性质分析

从分离自土壤的芽孢杆菌中筛选产淀粉酶和蛋白酶的菌株,对其进行形态学观察、生理生化试验及分子生物学鉴定,并对筛选菌株所产的淀粉酶和蛋白酶进行酶学性质分析。结果表明,筛选到产淀粉酶和蛋白酶菌株CX-47,菌株CX-47被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。酶学性质分析结果表明,菌株CX-47所产淀粉酶和蛋白酶具有相同的最适反应温度(50℃)和最适反应p H(7.0);K^(+)和Ca^(2+)对菌株CX-47所产淀粉酶催化活性具有一定的促进作用,而Li^(+)和Mn^(2+)则有一定程度的抑制作用;K^(+)、Li^(+)、Ca^(2+)和Mn^(2+)均可显著提高菌株CX-47所产蛋白酶的活性(P<0.05)。

植物类黄酮O-甲基转移酶研究进展

植物类黄酮O-甲基转移酶(flavonoid O-methyltransferase,FOMT)属转移酶类的甲基转移酶家族,是一类可催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)中的-CH3基团转移到类黄酮-OH上的蛋白质酶。甲基化是类黄酮物质最基本、最主要的修饰反应之一,不仅可以降低类黄酮的化学反应活性,而且增加了其脂溶性,赋予了类黄酮更多的生理生化特性。该文对近年来国内外有关类黄酮甲基化对植物中FOMT催化的生理生化代谢反应、FOMT的分类、FOMT酶蛋白结构域、生物学功能以及FOMT基因克隆与表达调控等方面的研究进展进行综述,为植物类黄酮更广泛、更深入的研究提供新的思路与途径。

银杏类黄酮糖基转移酶基因片段克隆与分析

根据GenBank中其他植物的类黄酮糖基转移酶基因(UFGT)的保守区设计简并引物,采用RT-PCR技术从银杏中扩增出UFGT基因的部分保守序列,并利用3′-RACE PCR方法,得到了包括3′-末端在内的银杏UFGT基因片段,命名为GbUFGT-3。结果表明:该片段长度为1 064bp,其中3′-UTR长度为314bp、编码区长度为750bp,可编码249个氨基酸,该氨基酸序列具有完整的UFGT特征序列PSPG-box;BLASTp分析及系统进化树分析表明GbUFGT-3确为银杏UFGT基因的序列片段;半定量RT-PCR结果表明,GbUFGT-3是非诱导表达基因,在银杏叶片的整个发育期均有较高水平的表达,不同发育期表达量无差异。GbUFGT-3已被GenBank收录,登录序列号为JN640564.1。

银杏类黄酮研究进展

类黄酮是植物体内最重要的次生代谢物之一,在植物的生长、发育、抗逆境胁迫等多种生物进程中发挥着重要的作用,同时对人类的健康也具有多种保健与药用功能。该文在参考近年来国内外与类黄酮和银杏类黄酮相关研究的基础上,对银杏类黄酮分类、植物体内类黄酮生物合成途径以及银杏类黄酮生物合成相关基因克隆等进行了归纳与分析,旨在为银杏类黄酮更广泛、更深入的研究提供新的思路。

油菜内生阿氏芽孢杆菌鉴定及其对铬(Ⅲ)处理反应性分析

为探明耐铬(Ⅲ)油菜内生菌BNC-Q菌株对铬(Ⅲ)处理的生理生化反应性特点,以BNC-Q菌株为研究对象,进行了菌种鉴定以及铬(Ⅲ)处理反应性分析等试验。16S rDNA PCR分析结果表明,BNC-Q菌株为阿氏芽孢杆菌。铬(Ⅲ)胁迫培养试验结果表明,BNC-Q对铬(Ⅲ)耐受较强,可在5 mmol/L铬(Ⅲ)浓度条件下保持繁殖能力,可被不高于2 mmol/L的铬(Ⅲ)促进生长繁殖。蛋白质表达分析试验结果表明,经2 mmol/L铬(Ⅲ)处理后,BNC-Q可特异表达出一条约40 ku大小的蛋白质条带。抗氧化性分析试验结果表明,2 mmol/L铬(Ⅲ)处理对BNC-Q菌株清除DPPH自由基的能力基本无影响,但其对超氧阴离子自由基(O-·2)和羟基自由基(·OH)的清除率分别由63.7%,63.5%上升到91.1%,85.2%。综上所述,BNC-Q菌株为阿氏芽孢杆菌,对铬(Ⅲ)耐受性较强,可被铬(Ⅲ)诱导表达约40 ku的特异蛋白,铬(Ⅲ)诱导处理可显著提高其清除超氧阴离子自由基和羟基自由基的能力。研究结果可为重金属铬的生物修复研究提供一定的基础。

乙醛脱氢酶基因表达载体的构建及表达条件筛选

通过PCR扩增得到酿酒酵母乙醛脱氢酶基因ALDH长约1.6 kb的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,并将该序列与pET30a(+)载体相连,得到pET30a-ALDH重组质粒,使其在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达;对含有pET30a-ALDH重组质粒的工程菌进行表达条件分析,发现当异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度为1.0 mmol/L、诱导温度为28℃、诱导表达时间为6 h时,ALDH酶相对活性达到最高,为30.2 U/m L。

高中体育教学中培养学生终身体育意识的策略分析

社会经济的迅速发展,促使高校为了适应社会的发展需要,开始进行教育改革。物质文化水平的提高,增加了人们对健康的关注。在高中体育教学中,培养学生的终身体育意识,可以加强学生体育知识的学习和锻炼,提高体育技能和水平,发挥体育强身健体和增强体魄的作用。本文简述终身体育,针对高中体育教学的现状,提出在高中体育教学过程中培养终身体育意识的策略方法。

中国大陆公民出境旅游市场研究综述

通过对1979-2008年发表的73篇有关出境旅游市场研究文献分析,发现相关研究主要涉及出境旅游市场发展现状、经济影响、消费行为、管理研究、港澳游和边境游等方面。其中,前三项为研究重点;研究方法一般以概述性分析为主,模型构建与统计分析运用较少。就整体而言,大陆公民出境旅游市场研究滞后,已不能适应我国出境旅游市场的快速发展。未来该研究领域将不断细化,研究方法也有待创新,但旅游消费行为仍将受到关注,有关旅游目的地国家和地区的研究也将被纳入研究范围。

中国公民出境旅游目的地市场变动研究

运用地理集中指数、年际集中指数对中国大陆公民出境旅游目的地的时空变化及发展规律进行定量分析．利用旅游竞争态确定我国出境旅游目的地的所属市场类型。分析发现，中国大陆公民出境旅游目的地空间分布日趋分散．旅游目的地多元化趋势初显，出境旅游目的地市场表现为瘦狗市场的回落，幼童市场的壮大。出境旅游经营主体要根据市场变化，加强对重点市场的促销，不断开发新生市场，以达到拓展我国出境旅游目的地市场的目的。

浅谈以学生为中心的高中体育教学

随着社会经济的飞速发展,教育教学也在改革中取得了不错的成绩,体育教学也越来越受到了人们的关注。在体育教学中,只有采取有效的教学模式才能够提供给学生更多的学习与锻炼的机会,从而更好地满足学生在体育学习中的个性化需求,所以体育教学要充分体现学生中心这一理念,充分表现出学生在学习中的主体地位,只有这样才能更好地促进学生自身体育素质的提高,利于今后的发展。本文旨在对如何有效促进高中以学生为中心的体育教学进行探析,保证体育教学的质量。

处理学生注意力不集中问题的“人本”策略

笔者根据多年的经验总结了几种无伤害的"人本"策略,在体育课堂上不仅能有效解决学生注意力不集中的问题,而且极易使学生产生对老师的感激之心,适宜于对小学高年级以上的学生使用。

高考体育生训练的一模四策——以江苏省高考体育加试方案为例

1体育加试方案概述1.1加试时间一般情况下,各地区的体育加试时间都是安排在当年的三、四、五月份,主要是考虑此阶段的气候比较适宜户外运动,江苏省体育加试近几年都是安排在四月份的下旬。1.2加试内容多数省份是以素质结合专项考察为主要选拔途径,但也有仅以素质为考察内容的情况。例如,江苏省从1993年-2002年,2010年的湖北省。

蛹虫草子实体中抗氧化活性化合物的分离纯化

以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除活性为指导对蛹虫草子实体中的抗氧化活性化合物进行了分离纯化。对蛹虫草子实体经甲醇浸提后获得的甲醇提取物,再进行硅胶柱色谱分离得到一个具有较强抗氧化活性的组分CM9,组分CM9利用反相高效液相色谱法进行活性指导下的分离得到抗氧化活性化合物CM9-1。该化合物采用薄层色谱和高效液相色谱法进行纯度检测发现此为纯品化合物,液相色谱-质谱分析结果表明该化合物相对分子质量为430,分子式为C22H22O9。该物质在质量浓度为1.0 mg/m L时对0.4 mg/m L的DPPH自由基试剂的清除率为(73.67±0.29)%。

紫薯杏鲍菇复合果醋混菌发酵工艺

以紫薯和杏鲍菇为主要原材料,通过果酒酵母和醋化醋杆菌混合发酵生产复合果醋,采用单因素试验,正交试验的方法,优化紫薯和杏鲍菇复合果醋混菌发酵的制备工艺。优化得到的配方及制备工艺条件为:紫薯与杏鲍菇比例为2∶1,白砂糖添加量为15%,pH为4.0,果酒酵母接种量为2.5%,醋化醋杆菌接种量为12%,种龄20 h,接种间隔0 h,装液量40 m L/250 m L,32℃,在此条件下产酸在第7天达到最大,为43.20 g/L,酿制出的紫薯杏鲍菇复合果醋澄清现粉红色,醋味浓郁,营养丰富,具有紫薯和杏鲍菇清香味。

氯化锂诱变蛹虫草菌株液体发酵富集微量元素锌

为更好地开发蛹虫草资源,以蛹虫草为富锌载体,进行发酵富锌培养条件优化,选择最佳质量分数的Li Cl诱变蛹虫草,通过火焰原子吸收法检测诱变前后菌丝体中锌元素的含量。结果表明:蛹虫草富锌的最优碳源为蔗糖,质量分数为3%,最优氮源为蛋白胨,质量分数为3%,最佳培养时间为6 d,最佳接种量为5%,最佳装液量为100 m L/250 m L,培养基中添加的最佳Zn SO4质量浓度为100μg/m L,此时,富锌率为18.54%。Li Cl的最佳诱变条件为:Li Cl质量分数0.15%。选育出富锌较高菌株5株,最高富锌率达24.68%,比出发菌株提高了近42%,具有广阔的应用前景。

响应面法优化大豆分离蛋白提取及复合酶解制备活性肽

用碱提酸沉法从大豆中提取大豆分离蛋白,并经单因素及响应面优化法确定大豆分离蛋白最佳提取工艺为碱提时间60 min、碱提温度60℃、碱提pH值11.0、酸沉pH值5.0。使用最佳提取工艺提取大豆分离蛋白提取率为29.25%。用胰蛋白酶、糜蛋白酶分别酶解大豆蛋白产生的肽均具有抑菌活性,而采用胰蛋白酶与糜蛋白酶复合酶解大豆分离蛋白,产生的活性肽抑菌活性比单酶酶解产生的更高,且对蜡样芽孢杆菌抑菌活性最高,抑菌圈直径可达19.8 mm。通过对DPPH自由基的清除率检测复合酶解获得活性肽的抗氧化活性,发现其对DPPH自由基的清除率达到37.5%,比胰蛋白酶、糜蛋白酶单酶酶解获得的活性肽抗氧化活性都强,说明大豆分离蛋白经复合酶解后产生了具有较高抑菌活性和抗氧化活性的活性肽。

液体发酵竹红菌素的提取与表征

利用竹黄无性型菌株ZH-5-1进行液体深层发酵制备竹红菌素,利用正交试验设计优化了提取工艺,并使用萃取及硅胶柱色谱技术进行了分离纯化。结果表明,以丙酮为提取溶剂、料液比为1∶30(m/V)、于30℃温度条件下超声浸提30 min时,菌株ZH-5-1液体深层发酵菌丝体中竹红菌素的提取率最高达4.83 mg/g;竹红菌素提取液经萃取分离获得紫红色结晶,该晶体经过薄层层析法及高效液相色谱法分析确定为纯品,质谱分析后发现其分子式为C_(30)H_(26)O_(10),确定为竹红菌甲素,经统计分析发现其纯度达到98.20%。

食源性致病菌生物芯片-RCA检测新方法

将生物芯片技术和滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)技术结合,建立一种在片RCA检测食源致病性菌新方法.依据待检测致病菌的基因组序列设计捕获探针(capture probe,CP)、检测探针(detect probe,DP)和滚环探针(rolling circle probe,RCP),其中捕获探针、检测探针与待检测致病菌基因组序互补,RCP不含任何待检菌基因组DNA序列,CP的5′末端修饰氨基,将其点样制备成CP微阵列,DP、RCP与待检菌gDNA混合后变性,将其与CP微阵列杂交并连接, RCA扩增反应体系中加入链亲和素进行在片扩增反应,分析检测结果.研究表明,该方法能灵敏、特异性地检测单一和混合靶标分子,以金黄色葡萄球菌为检测对象,其最低检测限可到达50 fg/μL,其线性范围是400 ~50 fg/μL, R 2 达到0.97,证实了该方法的可行性和可靠性,为食源性致病菌检测提供了新的技术方法.

一株产高活性多酚氧化酶菌株筛选鉴定及其酶学性质

采用变色圈法从土壤样品中分离筛选产多酚氧化酶的菌株,对其进行形态学观察、分子生物学鉴定,并对其所产多酚氧化酶的酶学性质进行研究。结果表明,筛选得到1株产多酚氧化酶活性较高的菌株,命名为ZL-2,其被鉴定为竹黄菌属(Shiraia sp.)。菌株ZL-2发酵8 d产多酚氧化酶酶活最高,达到521 U/mL。菌株ZL-2产多酚氧化酶最适底物为邻苯二酚,其最适pH值为6、最适温度为30℃;酶活在温度20~40℃及pH 3~6范围内稳定。金属离子Cu^(2+)、Mg^(2+)、Mn^(2+)、Fe^(3+)、Zn^(2+)对多酚氧化酶都有激活作用,其中Cu^(2+)激活作用最强;Ca^(2+)、Al^(3+)对酶活有一定抑制作用;L-抗坏血酸和亚硫酸氢钠对该酶抑制作用较强。

生物工程专业实践教学与科研相融合的创新教学模式探索

以徐州工程学院生物工程专业为例,提出了“实践教学与科研相融合”的教学模式,充分利用科研项目的先进性、创新性等特点,将科研融入实践教学中;探讨了科研融于实践教学的教学模式,并提出了具体保障有效融合的措施。通过不断改革探索和总结创新,科研与教学融合的教学模式显著提高了学生的综合素质和创新能力。