SHC蛋白家族成员与恶性肿瘤的研究进展

原癌基因SHC家族包含ShcA、ShcB、ShcC和ShcD 4个成员,共编码7种衔接蛋白。SHC家族各成员主要参与酪氨酸激酶信号转导通路、Ras-促分裂原活化的蛋白激酶、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶等生长因子信号通路,与氧化应激及多种生理功能的调控密切相关。SHC分布广泛,在肿瘤中高表达,参与肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为预测肿瘤患者预后及生存期的指标。因此,深入研究SHC蛋白家族成员与肿瘤的相关性,可以为肿瘤的早期诊断和免疫治疗提供新靶点。

多房棘球绦虫基因组DNA三种提取方法的比较

目的综合比较95℃水浴法、碱裂解法及离心柱法提取多房棘球绦虫虫体基因组DNA的质量差异,筛选出适用于PCR鉴定多房棘球绦虫线粒体DNA分型的DNA提取方法。方法无菌条件下取适量多房棘球绦虫原头节(Protoscoleces,PSCs)、囊壁组织样本为实验材料,分别采用95℃水浴法、碱裂解法及离心柱法提取虫体样本中的基因组DNA,检测其浓度与A260/A280比值,并以提取的DNA为模板,通过PCR扩增多房棘球绦虫核基因延伸蛋白样蛋白(Ezrin/radixin/moesin-like protein,elp)和线粒体基因细胞色素b(Cytochrome b,cob)、NADH脱氢酶亚基2(NADH dehydrogenase subunit 2,nad2)和细胞色素c氧化酶亚基I(Cytochrome c oxidase subunit 1,cox1)的片段,综合比较3种方法提取的基因组DNA扩增效果。结果3种方法均可从PSCs中提取出基因组DNA,琼脂糖凝胶电泳和核酸定量结果显示离心柱法提取的基因组DNA A260/A280比值最高,差异具有统计学意义(P<0.01),且在加样模板总量一致的情况下,以离心柱法提取的PSCs DNA为模板扩增的cob、nad2和cox1基因产物电泳条带清晰、明亮,片段长度准确;而使用95℃水浴法和碱裂解法提取的PSCs基因组DNA仅有效扩增出cob基因条带。通过离心柱法提取的囊壁组织DNA为模板仅扩增出elp基因片段,小鼠组织基因组DNA未扩增出任何虫体的目的基因片段。结论使用离心柱法从多房棘球绦虫PSCs中提取的基因组DNA质量最佳,能够有效扩增出虫体线粒体基因片段,且无宿主来源细胞的污染,可满足后续实验室对多房棘球绦虫不同虫株的基因型鉴定研究。

bcl-2核酶对SMMC7721细胞端粒酶活性的影响作用

目的 观察 bcl- 2核酶对 SMMC- 772 1细胞的作用 ,探讨 bcl- 2表达水平的改变对细胞端粒酶活性的影响 .方法 经脂质体介导的方法将 PMTr- neo(正向 bcl- 2核酶真核表达载体 )导入 SMMC772 1细胞中 ,细胞克隆转移扩大培养后 ,采用 TU NEL,TRAP- PCR- EL ISA,免疫组化技术结合图像分析技术检测 SMMC772 1/ PMTr- neo细胞凋亡、细胞端粒酶活性及 P16 ,P2 1的改变 .结果 较对照组 SMMC772 1/PMTr- neo细胞 Bcl- 2表达水平显著下降 ,伴有显著细胞凋亡现象 ;同时端粒酶活性下降 ,P16 ,P2 1表达水平显著增加 .结论 bcl- 2核酶可促进 SMMC772 1细胞发生凋亡 ,并降低细胞端粒酶活性 ,提示 Bcl- 2表达水平的改变对细胞端粒酶活性有一定的影响 .

同性恋者梅毒性直肠炎2例临床病理分析

目的 分析同性恋者梅毒性直肠炎的组织病理学特点及临床表现。方法 对 2例具有肠道症状的同性恋者梅毒性直肠炎临床表现、病理形态学特点进行探讨。结果 2例同性恋者梅毒性直肠炎镜下具有梅毒病变的基本组织学特点 ,表现为淋巴细胞和浆细胞浸润构成的非特异性炎、闭塞性动脉内膜炎和血管周围炎 ;血清学检测梅毒螺旋体抗体阳性表达。结论同性恋者梅毒性直肠炎临床表现常无特殊性 ,组织学检查浆细胞恒定浸润是本病的特征性改变之一。梅毒性直肠炎既易于合并其他病原菌感染 ,又常易被误诊为其他肠道病变。在了解病史的基础上 ,根据其组织学特点 ,结合血清学检测结果 ,可以做出明确的病理诊断。

反义端粒酶RNA抑制肝癌细胞生长的机制

目的 观察反义端粒酶 RNA对 SMMC- 772 1肝癌细胞系的作用 ,探讨抗端粒酶治疗在原发性肝癌治疗中的意义 .方法 采用脂质体介导的方式将反义端粒酶 RNA真核表达载体 p BBS2 12 / h TR转入 SMMC772 1细胞中 ,经潮霉素筛选 ,克隆细胞株扩增鉴定后 ,采用 TRAP- PCR- EL ISA,FCM及电镜检测反义端粒酶 RNA对转染细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响 ;同时进行裸鼠荷瘤生长实验观察 .结果 TRAP- PCR- EL ISA法检测细胞端粒酶活性的结果为 :实验组吸光度值为 0 .980 ,对照组吸光度值为 2 .86 1;FCM检测细胞凋亡结果为 :实验组 13.8% ,对照组未见有凋亡峰形成 ,电镜观察发现转染细胞表现出典型的凋亡细胞形态 .裸鼠移植瘤生长实验发现 ,转染细胞生长明显受到抑制作用 ,说明反义端粒酶 RNA显著抑制 SMMC772 1细胞的端粒酶活性 ,并且对其有显著的促凋亡作用 .结论 反义端粒酶 RNA能有效地抑制肝癌细胞端粒酶活性 ,同时显著促进癌细胞凋亡 .

婴幼儿促纤维增生性星形细胞瘤的临床病理特点

目的 :分析婴幼儿促纤维增生性星形细胞瘤 (desmoplasticinfantileastrocytoma,DIA)的病理形态特征及其与其他肿瘤的鉴别诊断。方法 :对 2例DIA进行组织形态学、组织化学和免疫组织化学分析 ,结合文献对其临床表现、病理形态特点及鉴别诊断进行探讨。结果 :本组 2例DIA的CT检查表现均为左颞叶巨大的囊性病变 ;组织学表现在丰富的纤维性间质中 ,含有灶状或巢状的向星形细胞分化的神经上皮成分 ;免疫表型显示瘤细胞呈GFAP阳性 ,Vim阳性 ,NSE阴性 ;网织纤维染色示在致密的嗜银纤维区之间可见岛屿状的空染区。结论 :DIA是一种罕见的发生在婴幼儿的中枢神经肿瘤。根据其组织学特点 ,结合组织化学和免疫组化染色结果 ,可以做出明确的病理诊断。

鼻咽部髓外浆细胞瘤2例临床病理分析及文献复习

目的 报道 2例起源于鼻咽部黏膜下软组织的髓外浆细胞瘤 ,同时分析其病理形态学特征。方法 对 2例鼻咽部髓外浆细胞瘤进行组织形态学和免疫组织化学研究 ,结合文献对其临床表现、病理形态特点及鉴别诊断进行探讨。结果 2例鼻咽部髓外浆细胞瘤均表现为鼻咽部隆起的肿块 ,表面不平 ,无破溃、出血。组织学表现为位于鼻咽部黏膜下软组织中的孤立性病变 ,组织分布较均匀 ,局部瘤组织呈器官样、条索状或腺样分布 ;瘤细胞主要由分化程度不一的浆细胞组成 ,Russel小体可见 ,Dutchs小体偶见 ;免疫组化显示瘤细胞呈免疫球蛋白κ链 (- )、λ链 (+) ,EMA(+)。结论 起源于鼻咽部黏膜下软组织的髓外浆细胞瘤较罕见 ,易误诊为其他肿瘤。肿瘤常原位复发并演化为多发性骨髓瘤。依据临床和组织学特点 。

反义端粒酶RNA抑制胶质瘤细胞系BT-325细胞端粒酶活性表达

目的 :观察反义端粒酶RNA对BT - 32 5细胞的作用 ,探讨端粒酶在恶性胶质瘤发生过程中的可能作用及反义端粒酶RNA在恶性胶质瘤基因治疗中的意义。方法 :经脂质体介导的方法将pBBS 2 12 -hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体 )导入BT - 32 5细胞中 ,细胞克隆转移扩大培养后 ,采用TRAP -PAGE电泳、电镜和TUNEL技术检测BT - 32 5 /pBBS 2 12 -hTR细胞的端粒酶活性表达、细胞凋亡的情况。结果 :与对照组比较 ,反义端粒酶RNA显著抑制BT - 32 5细胞端粒酶活性、诱发细胞发生凋亡。结论 :转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒酶活性表达的同时 ,可促进BT - 32 5细胞凋亡。在研究恶性胶质瘤发病机制及治疗方面做了有益的探讨。

有明显浆细胞形态特征的间变性大细胞淋巴瘤3例报告

目的 报道 3例有明显浆细胞形态特征的间变性大细胞淋巴瘤 (ALCL) ,总结其临床病理形态学特点及临床表现。方法 临床资料结合组织学和免疫组化研究 ,对 3例有明显浆细胞形态特征的ALCL临床表现、病理形态特点及鉴别诊断进行探讨。结果 3例有明显浆细胞形态特征的ALCL均为青少年 ,无明显临床症状 ,查体分别表现为淋巴结肿大及下肢皮下包块。镜检病变位于淋巴结与皮肤真皮层内 ,呈弥漫性侵袭性生长 ,局部区域瘤细胞排列紧密 ,组织结构破坏 ;瘤组织由有明显浆细胞形态特征的细胞组成 ,有明显恶性指征和间变形态 ,CD30、CD45、CD45RO弥漫 ( +) ;CD2 0、免疫球蛋白轻链κ链和λ链 ( - )。结论 有明显浆细胞形态特征的ALCL组织形态学较特殊 ,但根据其组织学特点 ,结合免疫组化染色结果 ,可以做出明确的病理诊断。

反义端粒酶RNA对SMMC7721细胞P16、P21表达的增强作用

目的观察反义端粒酶RNA对SMMC7721细胞周期的影响,检测P16和P21的表达,探讨端粒酶与细胞周期调控间的关系及反义端粒酶RNA在肝癌基因治疗中的意义。方法经脂质体介导,将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212-hTR导入SMMC7721细胞中。细胞克隆转移扩大培养后,采用流式细胞仪、TRAP-PCR-ELISA及免疫组化技术,结合图像分析,在检测SMMC7721/pBBS212-hTR细胞端粒酶活性的同时,检测P16和P21的表达。结果与对照组相比较,反义端粒酶RNA在抑制SMMC7721细胞端粒酶活性的同时,P16和P21蛋白的表达水平显著增高。结论转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒酶活性表达的同时,伴发P21与P16表达水平的升高。本实验研究为探讨肝癌发病机制及治疗提供了一定的依据。

成体兔转基因成纤维细胞的克隆分离及其核移植研究

哺乳动物体细胞核移植及其与转基因技术的结合为转基因动物的研究提供了新的思路和方法.然而,单个转基因细胞克隆的分离培养一直比较困难,很大程度上限制了转基因动物的研制.将pRNAT-U6.1/Neo质粒转染成体兔成纤维细胞,通过24孔细胞培养板分离培养法获得来源于单个转基因成纤维细胞克隆.由于单个成纤维细胞克隆在新鲜DMEM培养液中生长比较困难或缓慢,采用由DMEM/F12制备的条件性培养液进行筛选.以转基因成纤维细胞为供体细胞进行核移植,囊胚率为23.5%,与来源于成体兔正常成纤维细胞相比较差异不显著.并且利用PCR或多重PCR方法鉴定筛选的转基因细胞克隆及其核移植胚胎中整合的NeoR基因和常染色体β-actinDNA.为转基因哺乳动物细胞的分离培养和核移植胚胎的鉴定提供可靠的方法,缩短了转基因动物的研制周期,降低生产成本,同时为进一步通过核移植技术获得转基因克隆兔提供了条件.

反义RNA抑制肝癌细胞株端粒酶活性与p16、p21表达的关系

目的 :观察反义端粒酶RNA对SMMC772 1细胞的作用 ,并检测 p16、p2 1的表达情况 ,探讨端粒酶在肝癌发生过程中的可能作用及反义端粒酶RNA在肝癌治疗中的意义。方法 :经脂质体介导的方法将 pBBS2 12 hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体 )导入SMMC772 1细胞中 ,细胞克隆转移扩大培养后 ,采用流式细胞仪、TRAP PCR ELISA、电镜、免疫组化技术结合图像分析 ,在检测SMMC772 1/ pBBS2 12 hTR细胞的端粒酶活性、凋亡的同时 ,检测p16、p2 1表达情况。 结果 :与对照组比较 ,反义端粒酶RNA在抑制SMMC772 1细胞端粒酶活性、诱发细胞发生凋亡的同时 ,p16、p2 1蛋白表达水平显著增高。结论 :转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒酶活性表达、促进SMMC772 1细胞凋亡的同时 ,伴发 p2 1与p16表达水平增高。

转染P21 WAF1基因对BT-325细胞端粒酶表达的影响

目的 :观察外源性p2 1WAF1基因对BT - 32 5细胞的作用 ,探讨p2 1WAF1表达水平的改变对细胞端粒酶活性的影响。方法 :经脂质体介导的方法将PCEP -WAF1质粒导入BT - 32 5细胞中 ,细胞克隆转移扩大培养后 ,采用TRAP -PCR -ELISA、TUNEL和电镜等技术检测外源性p2 1WAF1基因对BT - 32 5细胞端粒酶活性和细胞凋亡的作用。结果 :较对照组相比 ,转染外源性p2 1WAF1基因的BT - 32 5细胞端粒酶表达水平显著下降 ,伴有显著细胞凋亡现象。结论 :外源性p2 1WAF1基因的表达可促进BT - 32 5细胞端粒酶活性降低 ,诱发细胞显著凋亡。提示端粒酶的活性表达可能与细胞周期调控存在密切联系。

退行性神经鞘瘤的临床病理学特征

目的报道4例退行性神经鞘瘤,分析其病理组织形态学特点及临床表现。方法组织形态学结合免疫组织化学研究,对4例退行性神经鞘瘤的临床表现、病理形态学特点进行探讨。结果本组4例退行性神经鞘瘤患者均为中年患者;组织学检查,病变具有广泛的粘液样变、囊腔形成、血管壁透明变性和缺乏核分裂相等特点。免疫组织化学染色显示,病变组织不同程度表达S-100、CD68和actin等。结论退行性神经鞘瘤为良性肿瘤,发病率低;较之普通型神经鞘瘤,退行性神经鞘瘤一般具有退行性、不典型性特点,病变缺乏明显的AntoniA区,易被误诊为其他间叶组织肿瘤,导致临床处理不当。组织学检查临床资料与免疫组化三者相结合是诊断所需要的。

Bc-l2核酶诱导SMMC7721细胞凋亡与p16,p21蛋白表达的关系研究

目的 观察bcl 2核酶对人肝癌细胞株SMMC 772 1细胞的作用 ,并检测 p16和 p2 1的表达情况。探讨bcl 2核酶在肝癌治疗中的意义。方法 经脂质体介导的方法 ,将PMTr neo (正向bcl 2核酶真核表达载体 )导入SMMC772 1细胞中。细胞克隆转移扩大培养后 ,采用TUNEL法、免疫组化技术结合图像分析 ,在检测SMMC772 1/PMTr neo细胞凋亡的同时 ,检测 p16 ,p2 1的表达。结果 与对照组相比较 ,在bcl 2核酶诱发SMMC772 1细胞发生凋亡的同时 ,p16和 p2 1基因的表达水平显著增高。结论 bcl 2核酶通过封闭bcl 2的表达可促进SMMC772 1细胞凋亡 ,同时伴发 p2 1和

抑制端粒酶活性对1,25-(OH)_2D_3诱导肝癌细胞增殖分化的影响

目的:观察抑制端粒酶活性对1,25-(OH)2D3诱导肝癌细胞增殖分化的影响作用。方法:经脂质体介导,将反义端粒酶RNA转染肝癌细胞系SMMC7721细胞。转染细胞扩大培养后,添加1,25-(OH)2D3分别作用于各实验组细胞后,采用MTT法、平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长;光镜和电子显微镜检测细胞分化形态改变。结果:对照组与转染组的吸光度值分别为1.685和0.686,说明转染反义端粒酶RNA可显著抑制肝癌细胞的端粒酶活性;而在抑制肝癌细胞端粒酶活性的基础上,1,25-(OH)2D3抑制肝癌细胞增殖和诱导细胞分化的作用得以显著的增强。形态学检查也进一步证实存在诱导分化改变。结论:在降低细胞端粒酶活性的基础上,1,25-(OH)2D3抑制肝癌细胞增殖、诱导细胞分化的作用得到增强。

1,25-二羟基维生素D_3协同转染反义端粒酶RNA诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的观察在抑制肝癌细胞端粒酶活性表达情况下,1,25-二羟基维生素D3(1,25-VD3)对肝癌细胞凋亡的影响。方法经脂质体介导,将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212/hTR导入维生素D3受体(VDR)阳性的肝癌细胞株SMMC7721细胞中培养。细胞克隆转移扩大培养,将其分为对照组、药物组、转染组和转染药物组。添加1,25-VD3,分别作用于转染药物组、药物组,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)和电子显微镜检测肝癌细胞凋亡。结果转染组和对照组细胞的端粒酶活性分别为0.686和1.685,说明反义端粒酶RNA可显著降低肝癌细胞端粒酶活性。对照组、药物组、转染组和转染药物组细胞凋亡率分别为3.4%、12.2%、8.8%、23.6%;差异有显著统计学意义(P<0.01)。超微结构检查也证实存在凋亡发生。1,25-VD3或转染反义端粒酶RNA对肝癌细胞有促细胞凋亡作用,两者协同对肝癌细胞凋亡作用显著增强。结论转染反义端粒酶RNA,可降低肝癌细胞端粒酶活性,可显著增强1,25-VD3对肝癌细胞的促凋亡作用,并且对细胞的增殖也存在明显的抑制作用。

利用Red同源重组系统构建兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因打靶载体

利用EL350基因工程菌进行同源重组,成功进行基因敲除已有报道,但利用该系统进行兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因突变和基因打靶方面的研究还没有报道。实验首先在已经筛选到含有兔全长HPRT基因BAC克隆(LBNL1-304M19)的基础上,利用Red重组系统,通过Gap-Repair方式从此克隆上将一段47kb无启动子的HPRT基因组片段(不含有第1个外显子)克隆到pBACLinkSp质粒上,产生pBACLinkSp-rHPRT质粒。然后基于pBACLinkSp-rHPRT质粒,设计不同的同源臂,从而删除了HPRT基因的不同编码区,成功构建了三个不同的HPRT基因打靶载体。同时对利用同源重组技术敲除不同大小的DNA片段的效率进行了研究。基于实验所构建的三个不同的兔HPRT基因打靶载体,为探索兔成纤维细胞和胚胎干细胞基因打靶的适宜条件,及进一步获得兔HPRT基因敲除动物疾病模型奠定了基础。

三峡ALSTOM机组转子磁轭热套工艺改进

本文总结三峡电站左岸11#机转子热套经验,对12#机转子热套工艺进行改进,使热套加热升温时间由原来60h降为40h,热套后转子磁轭圆度等主要技术指标达到优良标准。