人外周血造血干细胞的超低温保存技术

9例急性白血病患者平均采集的外周血造血干细胞悬液量为628.33±424.13ml,总量为5655ml。在液氮中保存6—53天后,细胞回收率、台盼兰拒染率和CFU—GM回收率分别为67.6～98.9、76.8～96.5和79.3％。迄今已有7例用于自体外周血造血干细胞移植获得成功。

程序冷冻装置及其在低温保存中的应用

近年来,随着低温应用技术的迅速发展,在生物、医学方面已较广泛采用了深低温技术。经低温保存的人皮肤、角膜、血细胞、骨髓和胎肝细胞等已在临床应用,并取得了较好的效果。对各种生物材料(包括细胞、组织器官、生物体等)低温保存的研究表明,欲获得较高的生物活性。

大规模猪肝细胞低温保存方法的建立

目的 建立大规模猪肝细胞的低温保存方法以满足生物型人工肝治疗的需要。方法 用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离出猪肝细胞 ;加入本实验室配制的含有 10 %二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide,DMSO)的营养液中 ;分别采用两种降温方法使 (12 )× 10 10 猪肝细胞保存在 - 196℃液氮中 ;1个月后复温 ,观察在同一条件下培养不同时间后猪肝细胞形态、存活率和白蛋白、尿素、葡萄糖合成功能及对利多卡因的转化功能。结果 用两种降温方法保存的肝细胞 ,复温后细胞的存活率均较高 (梯度降温组和程控降温组存活率分别较冻存前降低了 4 7%和 8 6 %) ,其中前者肝细胞的尿素、葡萄糖合成功能较后者高。结论 所建立的冻存方法简单易行 ,可保存大量的猪肝细胞。

一种简便的外周血干细胞冷冻保存法

为了简化传统的细胞冷冻方法 ,即用 10 %二甲基亚砜 (DMSO)作为冷冻保护剂并用程控降温仪 - 196℃液氮保存 ,研究了用 5 %DMSO ,3%羟乙基淀粉 (HES)和 4 %人血白蛋白 (HSA)作为冷冻保护剂 ,而不用程控降温仪直接 - 80℃冰箱冷冻细胞的方法。对比了不同方法冷冻保存外周血干细胞 (PBSCs)的细胞活性、单个核细胞数、CFU GM和CD34+ 细胞回收率。结果发现 ,简便冷冻法可获得更高的单个核细胞 (MNC)和CFU GM回收率 ,无凝集现象 ;并且经长达 2 4个月冷冻保存后仍可获得满意的CFU GM和CD34+ 细胞回收率。 37℃融冻和 2 0℃室温融冻法之间各项指标无明显差别 ,细胞融冻后在室温下暴露于 5 %DMSO中 1小时 ,CFU GM回收率并不降低 ,而细胞活性从 93.2 %降至 84 .5 %。所以 ,这种简便的细胞冷冻保存法简便易行 ,可替代传统的液氮保存法 ,对于没有程控降温仪的单位具有实用价值 ,而且还可减少病人DMSO输入量和毒性。

TECA生物型人工肝支持系统替代衰竭肝脏功能机制的实验研究

分析中国实验用小型猪肝细胞型生物人工肝支持系统 (BALSS)替代衰竭肝功能的可能机制。使少肝急性肝衰 (ALF)犬血液或 16 40培养液循环流经BALSS中空纤维管的内腔 ,与培养于中空纤维管外腔中的猪肝细胞营养液进行物质交换。测定 16 40液中利多卡因浓度、白蛋白和尿素浓度的变化 ;用蛋白电泳法测定 16 40液和猪肝细胞营养液中蛋白成分的变化 ;用透射电镜观察治疗ALF犬时BALSS中猪肝细胞超微结构的变化。结果显示BALSS循环 6h时 ,16 40液中利多卡因浓度明显降低 ;白蛋白和尿素浓度明显升高 ;分子量小于 10 0kD的蛋白质成分明显增多。BALSS治疗ALF犬 6h时 ,猪肝细胞的超微结构出现明显的损伤。提示此型BALSS的猪肝细胞通过透析膜可较好地发挥肝细胞的生物转化及合成代谢等功能 ,以此达到暂时替代衰竭肝脏功能的效应。

APA微囊移植免疫隔离效果的研究

目的 :探讨海藻酸钠 多聚赖氨酸 海藻酸钠 (APA)微囊在宿主体内的免疫隔离作用。方法 :分别将APA空微囊、牛嗜铬细胞 (BCCs)和APA微囊化BCCs(APA BCCs)移植到绵羊的蛛网膜下腔中 ,观察宿主细胞免疫指标和组织形态学的变化。结果 :各组移植后血中淋巴细胞数量无明显变化 ;APA微囊包裹可明显阻止BCCs移植引起的血中CD4 + T淋巴细胞比例、CD4 + CD8+ 值和脑脊液中淋巴细胞数量的增加 ;APA微囊包裹可减轻羊移植区组织反应 ,延长移植物的存活。结论 :APA微囊具有免疫隔离效果 ,可有效地阻止细胞免疫排斥反应。

冷冻保护剂二甲基亚砜的毒副作用及应用剂量研究

本文主要用台盼兰排斥试验、CFU-GM体外琼脂培养技术和细胞电泳技术研究了冷冻保护剂二甲基亚砜(DNISO)在4℃和室温条件下对细胞活力的影响。结果表明,DMSO对骨髓、胎肝和淋巴细胞的毒性在室温比在4℃时大。小鼠静脉注射DMSO的LDS0剂量为3.9364±0.8709mg/g体重。提出了应用DMSO作为冷冻保护剂冻存人骨髓和胎肝细胞悬液的临床输注方法和DMSO的剂量安全值。

TECA-I型生物人工肝支持系统治疗急性肝衰竭犬的实验研究

目的 :评价经改进的 TECA I型生物人工肝脏支持系统 (bioartificial liver supportsystem ,BAL SS)治疗醋氨酚诱发急性肝衰竭 (acute liver failure,AL F)犬的有效性和安全性。方法 :采用多次皮下注射醋氨酚的方法建立 AL F模型犬。分离中国实验用小型猪肝细胞并培养于 BAL SS中 ,对 AL F犬进行 6小时的治疗 ,观察治疗前后犬生理、生化和组织学的变化 ,与常规药物治疗组和对照组进行比较。结果 :注射醋氨酚 48小时后 ,可建立 AL F犬模型 ,模型成功率为 6 3.16 %。应用我们改进的酶消化法 ,平均从每只小型猪的肝脏可得到(0 .8～ 3.0 )× 10 1 0 个肝细胞且存活率较高。TECA I型 BAL SS对 AL F犬治疗后 ,血氨、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶和碱性磷酸酶等生化指标明显下降 ,支链氨基酸 /芳香族氨基酸比值显著上升 ,其肝脏的病理改变得以修复 ,治疗后犬可长期存活 (>30日 )。药物治疗组和对照组的 AL F犬病情持续恶化 ,并于治疗后 14.83～6 0 .0 0小时内死亡。结论 :此型 BAL SS能够迅速、安全、有效地暂时替代药物诱发的 AL F犬的肝脏功能 ,其疗效明显优于常规药物治疗 ,BAL SS可望成为救治 AL F的新方法。

冷冻猪肝细胞在生物型人工肝系统中的生存状态研究

目的 研究冷冻复温后猪肝细胞在生物型人工肝支持系统(BALSS)中的生存状态。方法 用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离出猪肝细胞;将1×10 1 0 猪肝细胞冷冻保存在-196℃液氮中;1个月后复温,将等量的冷冻和新鲜猪肝细胞分别培养在BALSS中,比较其形态、存活率和白蛋白、尿素、葡萄糖合成功能及对利多卡因的转化功能。结果 冷冻保存的猪肝细胞,复温后其存活率较高;在培养于BALSS时其生化功能、利多卡因转化功能及超微结构与新鲜肝细胞类似。结论 用该冻存方法保存的猪肝细胞可试用于BALSS系统。

一种生物型人工肝支持系统治疗急性肝功能衰竭犬的效应

目的：评价我们改进的生物型人工肝系统（ＢＡＬＳ）治疗急性肝功能衰竭犬的有效性和安全性。方法：在引进中空纤维管式ＢＡＬＳ基本技术的基础上，将中国实验用小型猪肝细胞培养于ＢＡＬＳ中，对醋氨酚诱发ＡＬＦ模型犬进行透析治疗，测定治疗前、后肝衰犬血液ＧＰＴ、ＮＨ３、ＧＯＰ、ＢＵＮ及ＡＫＰ等生化指标及肝脏组织学的变化。结果：采用此种ＢＡＬＳ对ＡＬＦ犬治疗４～６ｈ，其血氨、ＧＰＴ、ＧＯＴ和ＡＫＰ等生化指标均明显降低（Ｐ＜０．０１）；而药物组和对照组其治疗前、后这些生化指标均无明显改变（Ｐ＞０．０５）。药物组和对照组的肝衰犬均在治疗后６～３６ｈ内死亡，而透析组的肝衰犬在治疗后可长期存活（大于３０ｄ）。ＢＡＬＳ治疗效果明显优于常规的药物治疗（Ｐ＜０．０１）。结论：此种ＢＡＬＳ能迅速、安全。

TECA型组合型人工肝系统治疗肝功能衰竭患者的初步临床观察

目的 :观察TECA型组合型人工肝支持系统 (HALSS)治疗急性肝功能衰竭 (ALF)患者的有效性和安全性。方法 :分离中国实验用小型猪肝细胞并培养于BALSS的生物反应器中。患者的血浆先经碳吸附或血浆置换后 ,循环流经BALSS的中空纤维管。每次治疗持续 6～ 7h。观察治疗前、后患者生理和血液生化指标的变化。结果 :从每只小型猪的肝脏平均可得到 (1.0～ 3.0 )× 10 10 个猪肝细胞 ,存活率 >85 %。TECA -HALSS治疗结束后 ,患者的血NH3、ALT、AST、TB、DB等水平明显降低 ;PTA水平升高 ;患者的神志由嗜睡或昏迷转为清醒。治疗中患者生命体征平稳、血电解质水平无明显改变。结论 :TECA -HALSS是一种能迅速、安全。

人胎肝细胞低温保存的临床基础研究

近年来,随着低温医学技术和实验血液学研究的进展,业已证明低温保存的自体骨髓治疗白血病及淋巴瘤等患者取得较好疗效。由于胎肝细胞不仅能使造血重建,而且可减少或避免移植物抗宿主病(GVHD)的发生,因此人们对胎肝细胞移植寄于很大希望。为了得到足够的胎肝细胞来源,很多学者进行了胎肝细胞低温保存的研究。

TECA型生物人工肝脏治疗少肝急性肝衰犬的效应

目的 :观察TECA型生物人工肝支持系统 (BALSS)治疗少肝急性肝衰 (ALF)犬的安全有效性。方法 :以肝脏切除 80 %诱发犬ALF。采用含中国实验用小型猪肝细胞的BALSS对ALF犬血进行 6h交叉灌流 (肝细胞组 ) ;以无肝细胞组及药物组作为对照治疗 ;测定治疗前、后ALF犬血生化、免疫学指标 ,观察犬脏器组织学变化。结果 :BALSS治疗后 ,肝细胞组 10只ALF犬的血NH3、BIL、ALT、AST明显下降 (P <0 0 1) ,PT、PA明显改善 (P <0 0 5 ) ;犬平均生存期为 (10 8 0± 12 0 )h ,其中 3只犬存活 >30d ;其免疫学指标无明显改变。而不含肝细胞的透析及常规药物治疗不能改善ALF犬的上述生化指标 ;其治疗后的平均生存期分别为 (2 4 0± 6 0 )h、(2 0 4± 6 4)h。结论

人工肝脏研究的现状和发展

人工肝脏研究的现状和发展薛毅珑，张佐云，黄英才，刘成贵关键词人工肝；肝功能衰竭；治疗；综述中国图书资料分类法分类号Ｒ５７５．３急性肝功能衰竭（ＡＬＦ）是指由于各种原因造成严重的肝细胞损伤或坏死而致迅速出现意识障碍、出血倾向、黄疸及肝臭、肝脏进行性缩小...

冷冻装置、冷冻速度和低温保存袋的研究

对生物材料低温保存的研究表明,欲获得较高的生物活力,必须选用适合的冷冻装置,并选择最佳的冷冻速率。耐低温保存袋则是确保冻存材料能够安全应用的重要保障。为此我们对冷冻装置、冷冻速度和低温保存袋进行了分析研究。

人胎肝细胞的低温保存和临床应用

102例人胎肝细胞在液氮中(—196℃)保存1—1257天后,平均细胞回收率、CFU—GM回收率和台盼兰拒染率分别为98％、71％和62％。18例再生障碍性贫血患者输注了冻存胎肝细胞,9例显示了较好的治疗效果;2例白血病患者冻存胎肝移植成功;冻存胎肝细胞输注对改善肝脏疾病的临床症状有一定好处。

冷冻和气功对人胎肝细胞超微弱发光的影响

低温技术在生物医学中的应用,促进了生物材料低温保存研究的进展。医用生物材料(骨髓、胎肝细胞、角膜、皮肤等)低温保存与移植的成功,为临床治疗某些难治之症开辟了新的途径。生物体具有很微弱发光并反映生命状态的事实,有可能揭开生物材料在液氮(-196℃)中长期保持其生命力的奥秘,并为准确测定细胞、组织的活力提供可靠的证据。

冷冻猪肝细胞在生物型人工肝系统中生存状态研究

目的研究冷冻复温后猪肝细胞在生物型人工肝支持系统(BALSS)中的生存状态。方法用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离猪肝细胞,将1×1010猪肝细胞冷冻保存在-196℃液氮中,1个月后复温,将等量冷冻和新鲜猪肝细胞分别培养在BALSS中,比较其形态、存活率和白蛋白、尿素、葡萄糖合成功能及对利多卡因的转化功能。结果冷冻保存的猪肝细胞,复温后存活率较高,在培养于BALSS时其生化功能、利多卡因转化功能及超微结构与新鲜肝细胞类似。结论用冻存方法保存猪肝细胞可试用于BALSS系统。

低温保存库的管理原则和社会作用

低温保存库的管理原则和社会作用１００８５３解放军总医院刘作斌，张佐云低温保存库是获取、处理、贮存、运输可供移植用的人体细胞、组织、器官以及生物样品的专门技术机构。国外有关低温保存库的管理原则及社会作用的主要观点如下。库的社会管理原则：供体有允许保存库...

深低温冻存血对细胞形态学及六项细胞化学影响的观察

血细胞经液氮-196℃冻存,使细胞新陈代谢停止,可以长期保存。我们在工作中见到准备冷冻作骨髓移植的骨髓血中的有核细胞,大多数是外周血的白细胞。本文旨在了解在深低温冻存后白细胞的生化及形态学的变化,拟为临床提供一点参考。一,取材:健康成人(25～40岁)10例,取静脉血10ml放ACD保养液中,再加二甲亚砜1640。