九龙牦牛肌细胞生成素基因的克隆及其表达谱

旨在获得九龙牦牛(Bos grunniens)肌细胞生成素(Myogenin,MyoG)基因序列并进行生物信息学分析,同时分析其组织表达谱和时序表达谱,为进一步研究九龙牦牛肌肉发育和肉质形成奠定基础。本试验通过RT-PCR技术克隆九龙牦牛MyoG基因,利用半定量RT-PCR技术检测该基因在九龙牦牛不同组织中的表达情况,利用荧光定量PCR技术检测该基因在九龙牦牛不同发育时期背最长肌的表达情况。结果表明,获得九龙牦牛700bp的MyoG基因序列(GenBank登录号:KC184120),其中ORF为675bp,编码224个氨基酸,与普通牛、人、小鼠、大鼠、猪、羊和兔MyoG氨基酸序列同源性为92%~99%;MyoG基因仅在背最长肌中检测到表达,在心、肝、脾、肾和脂肪中未检测到表达;MyoG基因随着九龙牦牛年龄段增长表达呈上升趋势,且在3.5~5.5和9岁以上的牛肌背最长肌中的表达显著高于0.5岁牛的表达水平(P【0.05)。结果表明,MyoG基因可能在九龙牦牛肌肉组织发育过程中发挥重要的调控作用。

鲤A-FABP基因的克隆及其表达谱研究

为探索A-FABP基因表达与鲤肌内脂肪质量分数的关联,利用RT-PCR方法克隆鲤（Cyprinus carpio）脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（Adipocyte fatty acid binding protein,A-FABP）基因,同时利用荧光定量PCR技术分别检测该基因在鲤不同组织和不同发育阶段的表达差异,获得其组织和时序表达谱,并将基因表达水平与肌内脂肪质量分数进行关联分析。结果获得鲤A-FABP基因开放阅读框（ORF）序列405bp,编码134个氨基酸,与多鳞白甲鱼、斑马鱼、大西洋鲑和青鳉等的氨基酸同源性关系较近（氨基酸相似性为70%-91%）,与人、猪、田鼠和牦牛等哺乳动物的氨基酸同源性关系较远（氨基酸相似性为51%-58%）;组织表达谱分析结果显示,A-FABP基因可在鲤的心脏、肌肉、脂肪、肝脏、脑、脾脏、肾脏和鳃中表达,并且在脂肪组织的表达量显著高于其他组织（P〈0.05）。发育表达分析结果显示,较小体质量试验鱼（50g）的A-FABP基因表达水平显著高于较大体质量试验鱼（120-130g和500g）（P〈0.05）,并且其表达与背最长肌的肌内脂肪质量分数呈显著负相关。

长丝裂腹鱼MyoD1基因的克隆及序列分析

[目的]克隆长丝裂腹鱼的MyoD1基因,并对其进行序列分析。[方法]根据鲤鱼(Cyprinus carpio)的MyoD1基因序列设计引物,采用RT-PCR方法对长丝裂腹鱼MyoD1的全长cDNA序列进行扩增,并对该基因编码氨基酸的理化性质及同源性进行预测和分析。[结果]试验获得了包括完整ORF的长丝裂腹鱼MyoD1基因,该序列长957 bp,编码274个氨基酸,具有MRFs家族基因的典型性碱性bHLH结构;该MyoD1序列与齐口裂腹鱼、鲤鱼、斑马鱼和虹鳟等的MyoD1序列同源性较高,与人、猪、牛等哺乳动物的同源性较低。[结论]该研究为长丝裂腹鱼的肌肉发育和肉质特性形成的分子机制研究提供了基础数据,同时为青藏高原冷水鱼资源的利用与保护提供了指导意义。