液-液相分离:细胞内的调控机制和疾病发展

液-液相分离(LLPS)作为细胞内的生物-物理现象,在细胞调控、信号传导和生物过程中发挥着重要作用,近年来引起了广泛的关注。本文从LLPS的基本概念、形成机制、生理功能以及与疾病的关联等方面进行探讨,同时展望未来研究的方向和潜在应用。LLPS的研究为我们深入理解细胞内的调控机制和疾病发展提供了新的视角,同时也为药物开发和生物技术的创新带来了新的可能性。

杀蚊苏云金芽孢杆菌Cry4Aa和Cry4Ba晶体蛋白结构的计算机对比分析

运用生物信息学软件对苏云金芽孢杆菌毒素Cry4Aa和Cry4Ba的基本参数、一级结构、二级结构、三级结构和跨膜区进行了预测比较.它们在一级结构上有较大差异,但二级结构和跨膜区相似,三级结构中各毒素的结构域Ⅱ、ⅡI之间基本相似,结构域I之间差异较大.Cry4蛋白之间的结构相似性和差异性与其作用机理和杀虫特异性有关.为分析杀蚊蛋白作用的分子机制、定点突变及研究高效的Bt生物杀虫剂有效控制蚊虫提供参考.

透明颤菌血红蛋白基因在解淀粉芽孢杆菌中的表达及其影响

将强启动子P_(43)与透明颤菌血红蛋白基因(vgb)通过重叠延伸PCR进行融合,克隆到芽孢杆菌整合表达载体pDC1730中,重组表达载体pDG-P43vgb转化促生防病解淀粉芽孢杆菌FZB42,Wsetem-Blot和CO差光谱分析表明重组菌株FZB42-VHb表达了有活性的VHb蛋白,VHb的表达对重组菌株菌体的生长及抗菌脂肽的产生都有促进作用。在相同培养条件下,重组菌最大菌体密度比原始菌株提高了14.49%,抗菌脂肽fengycin的产量提高了1.74倍,抗菌脂肽surfactin的产量提高了3.14倍。

近红外七甲川花菁染料IR-80染色鉴别乳腺良恶性细胞

目的观察乳腺上皮细胞株和乳腺癌细胞株通过近红外(near-infrared,NIR)荧光染料IR-80活体染色后不同的染色效果,探讨最佳实验条件用于良、恶性乳腺细胞的鉴别。方法将人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB231和人乳腺上皮细胞株MCF-10A与5、2.5、1.25、0.625μmol/L浓度的NIR荧光染料IR-80在37℃下共同孵育30 min,缓冲液清洗后,应用激光共聚焦显微镜观察乳腺癌细胞和乳腺上皮细胞在500 ms、1 s和2 s曝光条件下荧光强度。结果当曝光时间一定时,随着IR-80染料应用液浓度的降低,每种细胞系NIR荧光强度逐渐降低;当IR-80染料应用液浓度一定时,随着曝光时间的增加,NIR荧光强度有所增强,但不明显;同样浓度和曝光时间下观察,乳腺癌细胞系(MCF-7、MDA-MB231)荧光染色强度高于人乳腺上皮细胞系(MCF-10A)。当IR-80应用液浓度为1.25μmol/L时,不同曝光条件下,乳腺癌细胞系NIR荧光染色强度明显高于乳腺上皮细胞系,而乳腺上皮细胞系不发荧光。结论七甲川花菁染料IR-80活体染色时,乳腺癌细胞荧光强度明显高于乳腺上皮细胞,当IR-80染料应用浓度为1.25μmol/L,曝光时间为1 s可鉴别乳腺良、恶性细胞,其有望成为鉴别临床乳腺穿刺标本和手术新鲜组织标本良、恶性的新方法。

肿瘤微环境中微生物影响肿瘤发生发展的分子机制

肿瘤微环境呈现出一个错综复杂的生态系统,包括肿瘤细胞、非癌细胞、细胞外基质以及微生物群落等多种要素。微生物在肿瘤内广泛分布,其在空间分布上呈现出显著的特异性。这些微生物的组成成分与功能状态在肿瘤的发生和进展中发挥着至关重要的作用。本文深入阐明了肿瘤微环境内微生物菌群的特征,并探索其对肿瘤发生发展的影响机制,以期为肿瘤的诊断和治疗提供全新的策略和视角。

痰液、肺泡灌洗液微生物辅助诊断老年肺结节良恶性的研究

现阶段临床上肺结节的良恶性辨别以及跟踪监测主要依赖于低剂量螺旋CT和穿刺活检。但是在影像学上观察到恶性肺结节时,少数肺癌的癌干细胞已经成功侵入机体的其他器官,导致肺癌的发生[1]。大规模的临床呼吸道样本微生物16s测序结果表明,微生物的α多样性和分布(均匀度)在非恶性肺组织中明显高于肿瘤肺组织[2]。然而,与健康人群相比,癌症病例中的几个微生物分类群已被证明是相当丰富的。

非小细胞肺癌奥希替尼获得性耐药细胞株的建立及其耐药机制的探讨

耐药的产生是肺癌死亡率居高不下的主要原因。因此,建立非小细胞肺癌(NSCLC)第三代分子靶向药物奥希替尼获得性耐药细胞株,并探讨其耐药机制对肺癌耐药的研究具有重要意义。本研究采用间歇性大剂量冲击和梯度递增法,以HCC827为模型,在体外建立奥希替尼耐药细胞株HCC827OR。利用细胞计数(CCK8)法检测细胞增殖,通过耐药指数(RI)评估细胞对奥希替尼的敏感度;利用荧光染色法比较耐药前后细胞的形态学变化;利用Western blot法检测表皮生长因子受体(EGFR)及其下游信号蛋白的表达;第二代测序(NGS)检测EGFR的基因突变;细胞周期和划痕试验检测细胞的增殖和迁移能力。试验结果显示,HCC827OR的RI为18.65,表明HCC827OR为奥希替尼耐药细胞株。与野生型HCC827细胞相比,奥希替尼耐药细胞的核质比显著增大,关键蛋白p-EGFR表达显著下降,而细胞增殖相关的p-AKT显著增加,这表明其可能通过非EGFR依赖信号通路产生耐药。同时,流式细胞术和划痕试验结果表明,HCC827OR细胞株出现了明显的G2/M周期阻滞,但其迁移能力得到了提高。本研究成功构建了NSCLC奥希替尼耐药细胞株HCC827OR,初步证明了其可通过非EGFR依赖的旁路产生耐药,为研究肿瘤细胞耐药提供了重要的体外模型。

细菌治疗肿瘤的发展现状及趋势

癌症治疗依然是现代医学难题,这使得“非常规”治疗手段——细菌治疗肿瘤再次成为21世纪的研究热点。细菌治疗肿瘤主要基于刺激机体产生的免疫反应以及部分细菌能够靶向性进入实体肿瘤内部生长繁殖的特性。通过展示肿瘤靶向分子或者敲除部分基因可以增加细菌的肿瘤靶向性和生物相容性;表达细胞毒性蛋白和免疫因子等可以有效抑制肿瘤的生长。借助于纳米材料的发展,细菌联合纳米技术以及其自身产物的纳米属性治疗肿瘤的研究也得到了快速发展。除此之外,细菌联合化疗、放疗和免疫治疗等方式对肿瘤进行综合治疗,显示出较高的抗肿瘤效果和低毒副作用。因此,探究细菌的肿瘤靶向性、免疫抗肿瘤特性以及辅助临床治疗,将为人类最终攻克癌症提供新的思路和途径。

肿瘤恶病质小鼠模型的建立及其相关分子机制研究进展

恶病质是肿瘤患者常见的临床并发症,表现为持续性体重下降、肌肉萎缩、乏力、贫血、营养不良等症状。建立肿瘤恶病质动物模型是探究其发病机制和寻找潜在治疗方法的重要策略之一。该类模型的建立有助于加深人们对恶病质发病机制的了解,以及肿瘤细胞与机体之间的相互作用,同时用于评估恶病质治疗药物的疗效和安全性。本文综述了肿瘤恶病质小鼠模型的建立及其相关分子机制的研究进展,并对肿瘤恶病质模型的构建和应用进行了讨论和展望。

牛乳铁蛋白肽(LfcinB)在苏云金芽胞杆菌中的融合表达

牛乳铁蛋白肽(bovine lactoferrincin,Lfcin B)来源于牛乳铁蛋白(bovine lactoferrin),是目前已知所有乳铁蛋白肽中活性最高的。前期研究表明,可以通过大肠杆菌表达体系和毕赤酵母表达体系表达有活性的Lfcin B,但得到的产物难以纯化,产量也不理想,所以研究构建新型的Lfcin B表达体系有很重要的意义。苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)能在芽胞形成的同时产生一种δ-内毒素组装成的杀虫晶体,在发酵完成后细胞裂解,将芽胞和晶体释放到培养基中。基于Bt的这种优势,将Lfcin B与分子量为35k Da的Cry60Ba晶体蛋白作融合表达。通过PCR扩增和酶切连接,将Lfcin B基因连接到cry60Ba的下游,构建融合基因并转入无晶体Bt菌株中表达,得到了工程菌4Q7/p PFT60Ba-Lfcin B。利用GYS培养发酵48h,再经过超声破碎、包涵体纯化,SDSPAGE分析表明,工程菌表达了一条38k Da左右的蛋白质条带。将纯化的融合蛋白盐酸水解后进行SDS-PAGE分析,得到近似于3k Da的蛋白质条带,挖取目的条带进行胶内酶解和质谱分析,质谱结果显示,挖取的目的条带样品为Lfcin B蛋白的特异性肽段,说明在酸水解过后,融合蛋白Cry60Ba-Lfcin B中的Cry60Ba和Lfcin B分离开,得到单独的Lfcin B蛋白。由此可见,利用晶体蛋白在苏云金芽胞杆菌中进行融合表达可能作为一种新型有效的Lfcin B的高效表达体系,为采用基因工程的方法大量生产具有活性的牛乳铁蛋白肽Lfcin B蛋白奠定基础。

受体酪氨酸激酶AXL表达与非小细胞肺癌患者预后关系的meta分析

目的通过Meta分析以探讨受体酪氨酸激酶AXL(AXL receptor tyrosine kinase,RON)表达在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)预后中的作用。方法在Embase、PubMed、中国生物医学文献数据库、万方数据库和中国知网等数据库中检索有关AXL表达与NSCLC预后的文献。应用Stata 12.0软件对所收集的文献数据进行综合分析。结果最终共入选6篇文献,包含533例NSCLC患者,最终结果表明,与AXL低表达的NSCLC患者预后情况相比,AXL高表达的患者预后更差,差异有统计学意义(HR=2.28,95%CI 1.79~2.91,P<0.001)。进行发表偏倚检测与敏感性分析,最终结果表明Meta分析结论比较稳健。结论AXL高表达应是NSCLC预后不良的危险因素。