猫1型疱疹病毒分离鉴定及部分生物学特性分析

本试验旨在从临床样品中得到猫1型疱疹病毒(feline herpesvirus-1,FHV-1)分离株,为FHV-1疫苗候选毒株的研究奠定基础。从宠物医院采集疑似感染FHV-1的猫的眼鼻拭子,用猫肾细胞(Crandell reese feline kidney,CRFK)进行病毒分离,并进行分离株的遗传进化分析、形态学电镜观察以及动物回归试验等系统评价。结果显示:用CRFK细胞对临床样品进行分离培养,经PCR和间接免疫荧光方法鉴定为FHV-1,并命名为“FHV-ZH2202”株。经高通量测序以及基因参考组装拼接获得病毒的全基因组序列后,将其与国内流行毒株进行SNP分析,发现非同义突变SNP主要集中分布在UL22和US7基因。通过构建系统发育树对FHV-ZH2202与国内外流行株进行分析,FHV-ZH2202株与国内外流行株在UL22基因的同源性较高,但对于US7基因具有相对较远的亲缘性。动物回归试验结果表明,FHV-ZH2202株感染组猫全部发病,出现打喷嚏、眼鼻分泌物等典型症状,但无死亡病例出现。感染后第2天开始,感染组猫通过眼鼻向外界排毒,持续6~8 d。本研究成功分离到1株FHV-1病毒,并对其部分生物学特性进行了鉴定,证明FHV-ZH2202株具有一定的致病性,为FHV-1疫苗候选毒株的研究提供一定的参考。

鸭圆环病毒Cap基因在昆虫细胞杆状病毒系统中的表达及鉴定

通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBacmid-CP。在脂质体的介导下转染Sf9昆虫细胞,72h后获得重组杆状病毒。Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验结果表明,表达的蛋白与原核表达Cap蛋白免疫小鼠采集的血清具有良好的反应原性,为进一步研究Cap蛋白的功能奠定基础。

《发酵工程技术》课程教学思政育人的探索与实践

课程思政的教学改革广受关注,专业教育如何与课程思政有机融合,是一个值得探讨的问题。本文以《发酵工程技术》课堂教学融入课程思政的教学实践为出发点,确立课程思政的设计方案,在教学过程中实现科学素养元素与专业知识点融合、案例解析与思政元素结合、教学资源与仿真教学结合。思政育人教学达到了预期效果,树立学生的价值认同,培养学生的创新意识和工程思维,培育学生的工匠精神,为课程思政教学改革提供参考。

鸡新城疫类脂灭活疫苗的研究

用纯化的天然活性物质-杨树皮类脂作为免疫增强剂制备鸡新城疫类脂灭活疫苗,对该制品的保存条件、包被状况、安全性和免疫原性进行测定,结果表明,该制品性状稳定、安全有效、接种后无不良反应,保护率达95%以上,田间试验与扩大试验表明,该制品对处于产蛋高峰期的产蛋鸡注射不影响蛋鸡产蛋率,对雏鸡进行免疫不影响其生产性能。

广东地区鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及双重PCR检测方法的建立

对来自广东地区疑似鸭疫里默氏杆菌病的病鸭组织进行了病原菌的分离培养和生化鉴定,确定得到20株鸭疫里默氏杆菌,动物回归试验结果表明,分离的鸭疫里默氏杆菌具有很强的致病性。对这20株鸭疫里默氏杆菌进行的药敏试验表明,分离株已广泛产生耐药性。参照已经发表的2对引物以细菌全菌体为模板建立双重PCR方法,结果均能扩增出2条目的片段,经测序证实为鸭疫里默氏杆菌,而对鸭源大肠杆菌、鸭源禽多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门菌和鸭源葡萄球菌的扩增结果均为阴性。说明建立的双重PCR方法能快速、准确的检测出鸭疫里默氏杆菌,并具有高度特异性,可用于鸭疫里默氏杆菌的快速鉴定和快速诊断。

SPF鸡胚中内源性白血病病毒全基因序列鉴定与分析

以国内某3家SPF鸡场的SPF鸡胚成纤维细胞提取的基因组DNA为模板,参照已发表的序列,设计合成了4对检测内源性白血病病毒引物,分别检测gag基因、pol基因、env基因和LTR片段,结果显示4者检出阳性率很高(gag,29/46;pol,27/46;env,24/46;LTR,31/46)。设计合成了8对引物,选取4片段检测均为阳性的样品之一,经PCR成功扩增出了8段连续的、相互部分重叠的目的DNA片段,分别连接入T载体进行克隆测序。用DNAstar软件对测序结果进行拼接,从一个鸡胚得到了内源性白血病病毒前病毒全基因组序列。比较分析发现,该序列env基因与已知的E亚群内源性病毒代表株env基因的核苷酸序列同源性在98.5%以上,全基因组序列同源性在99.1%以上,而与其他亚群代表株同源性相对较低,env基因同源性仅为56.3%～91.5%。

基于“专创融合”的“生物工程概论”课程教学改革与实践

针对课程内容知识点多、课堂教学与生产应用脱节等突出问题,在“生物工程概论”课程教学中,实施“专创融合”课程教学模式改革。优化“重素养强技能”的课程内容体系,构建产业应用的教学案例库,实施“学生中心”的混合式教学方法,落实多样化的课程考核评价体系。系列改革获得预期的教学效果,得到学生的普遍认同,改变了课堂教学的面貌,知识、能力和素养同步提升,有利于后续课程深化学习,取得了较好的创新创业成绩。

鸭疫里默氏杆菌中国分离株的外膜蛋白A基因的克隆与序列分析

为了对鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）中国分离株的外膜蛋白A（OmpA）基因的序列进行分析,根据GenBank中已发表的鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）的外膜蛋白A（Om-pA）基因序列,在其高度保守区设计一对特异性引物,应用PCR技术,分别扩增从中国广东、福建和山东等地分离的8株鸭疫里默氏杆菌中国分离株的OmpA基因,克隆测序后与GenBank中已发表的26株鸭疫里默氏杆菌进行序列比较,结果表明：所有菌株的OmpA基因均为由1164个碱基组成的ORF,编码387个氨基酸组成的蛋白质,起始密码子均为ATG,终止密码子均为TAA,其核苷酸序列非常保守,同源性高达88.2%-100%,氨基酸同源性达到88.9%-100%。试验表明,OmpA基因具有种内相对保守性,其核苷酸与氨基酸同源性与鸭疫里默氏杆菌的血清型、分离时间和地点之间无必然联系。

蓝狐细小病毒VP2基因与NS1基因的克隆与序列分析

根据GenBank上发表的犬细小病毒（Canine parvovirus,CPV）、猫细小病毒（Feline parvovirus,FPV）核酸序列,分别设计扩增VP2基因与NS1基因的特异性引物,采用PCR技术扩增蓝狐细小病毒（Blue fox parvovirus,BF-PV）泰安分离株（BFPV-TA）的VP2基因和NS1基因,将PCR产物克隆入pMD18-T载体,进行测序分析。结果显示,BFPV-TA VP2基因含有1个ORF,全长1 755 bp,共编码584个氨基酸,第219位氨基酸发生I→V（219I→V）改变,300G→P,411E→A;BFPV-TA NS1基因含有1个ORF,全长2 007 bp,共编码668个氨基酸,8个氨基酸残基发生改变,43R→H,135H→Y,172K→R,179A→E,350D→N,409I→V,574I→V,616D→V。BFPV-TA VP2基因与CPV和FPV参照株的同源性在98.4%~99.4%,BFPV-TA NS1基因与CPV和FPV参照株的同源性为98.6%~99.1%。VP2基因系统发生分析,BFPV-TA与FPV的亲源关系较为密切,但NS1基因系统发生分析,BFPV-TA成单独的分支。

对集约化畜禽养殖动物福利的认识

文章对现阶段集约化畜禽生产的福利内容与要求,人们对福利的偏差认识,缺乏动物福利保障及管理的教训等,进行了深入探讨,为未来逐步关注、提高我国集约化畜禽生产福利水平提供了有益帮助。

蓝狐细小病毒的分离鉴定及其VP1基因序列分析

从泰安地区送检的疑是细小病毒感染的蓝狐粪便中分离到一株病毒。经理化特性鉴定、血凝谱鉴定、人工感染蓝狐等鉴定,表明所分离病毒为细小病毒。并且根据GenBank上发表的犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)核酸序列,设计扩增VP1基因的引物,采用PCR技术扩增所分离细小病毒的VP1全基因,将PCR产物克隆入pMD18-T载体,进行测序分析。结果,所分离细小病毒的VP1基因全长2256bp,编码727个氨基酸,与CPV和FPV参照株的VP1基因同源性在98.7%～99.5%。VP1基因的系统发生分析表明所分离病毒与FPV的亲源关系最为密切。所分离病毒VP1蛋白375位氨基酸残基与CPV的VP1蛋白氨基酸残基一致,但其223位、236位、246位、466位、707位、711位氨基酸残基与FPVVP1蛋白的氨基酸残基一致,该病毒VP1蛋白序列表现出了过渡型序列特征,介于FPV与CPV间的过渡类型,这说明所分离病毒为蓝狐细小病毒(Blue fox parvovirus,BFPV),命名为BFPV-TA,蓝狐可能在CPV的起源过程起到重要的作用。

副鸡禽杆菌单因子血清的制备与应用

利用副鸡禽杆菌的A、B和C 3个血清型的参考菌株Hpg-8、CCM6075和Hpg-68分别制备相应的抗血清,然后对抗血清进行交叉吸收试验,得到A型、B型和C型3种单因子血清,不同血清型的单因子血清不与其他血清型菌株发生凝集。利用这3种单因子血清对临床上分离到的6株副鸡禽杆菌进行血清型的鉴定,结果表明6株地方分离株均为血清A型。

一株Ⅹ型鸭疫里默氏杆菌GN52稳定性的研究

选取鸭疫里默氏杆菌的一株地方分离株GN52,按照生长的最适条件,在马丁固体培养基上连续传代。分别选取第3代、第11代、第21代、第31代、第41代、第51代和第61代的细菌,对其进行染色镜检、生化试验、药敏试验及动物实验。结果表明,随着代次的增加,该菌株染色形态、生化特性及抗药性均未发生明显变化,但毒力有逐渐下降的趋势。

猪细小病毒NS1基因和VP2基因的克隆与序列分析

根据GeneBank上发表的猪细小病毒（PPV）的基因组序列,分别设计扩增非结构蛋白NS1基因和结构蛋白VP2基因的特异性引物,采用PCR方法扩增PPV泰安株（PPV-TA）NS1基因和VP2基因。结果表明,PPV-TANS1基因长1989 bp,编码662个氨基酸,与参考PPVNS1基因核苷酸同源性在98.3%～99.9%之间。PPV-TA NS1蛋白有3个糖基化位点分别是356NIS、446NFS、513NLT,除PPV Tomau/1/02在356位缺失了一个糖基化位点之外,PPV-TA与其他PPV参考毒株一致;这表明不同毒株NS1蛋白调节功能可能有差异。PPV-TA NS1蛋白的潜在磷酸化位点是Thr435和Ser473,与PPV参考毒株相同。NS1基因系统发生分析表明,PPV-TA与PPV china亲缘关系最近。PPV-TAVP2基因长1740 bp,编码579个氨基酸,与PPV参考毒株VP2基因核苷酸同源性在98.3%～99.8%之间。PPV-TA VP2蛋白的378D、383H、436S氨基酸残基决定了PPV的组织嗜性,与PPV-NADL-2和PPV-china相同,这表明这3个毒株的组织嗜性是一致的。但与其他PPV参考毒株有差异,这表明不同毒株在动物体内的组织分布是有差别的。PPV-TA VP2蛋白有9个线性抗原位点,与PPV NADL-2和PPV china的线性抗原位点是一致的,这表明具有相同的抗原特性。VP2基因系统发生分析表明,PPV-TA与PPV NADL-2亲缘关系较近。

类脂作为佐剂对新城疫灭活疫苗免疫效果的影响

对免疫新城疫(ND)类脂灭活疫苗的雏鸡分别于免疫后2、7、14、21、28、35和42d进行法氏囊、脾脏、胸腺指数测定,以注射生理盐水、ND抗原、类脂的鸡只为对照。结果表明,免疫后2～14d,各组指数差异不显著,14d以后,疫苗组与其他组比较差异显著,与类脂组差异不显著。表明,类脂作为佐剂用于制备ND疫苗,具有较强的免疫增强作用。

紫花补血草提取物对犬乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

本研究用95%乙醇、极性梯度萃取法等获得紫花补血草乙酸乙酯提取物;用超高效液相色谱仪及四级杆串联飞行时间质谱仪(UPLC-Q-TOF-MS)在正负离子模式下分离分析其化学成分;用犬乳腺肿瘤分离的原代细胞为体外模型,以明确紫花补血草乙酸乙酯提取物对乳腺肿瘤细胞增殖及迁移的影响。结果显示:紫花补血草乙酸乙酯提取物含有槲皮苷、香叶木素、木犀草素等多种天然黄酮类化合物,对犬乳腺癌细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.05),并能抑制乳腺癌细胞迁移能力(P<0.05)。由于紫花补血草中的黄酮类化合物可能是该属植物抑制肿瘤增殖及迁移的活性成分,有望通过进一步开发,应用于犬肿瘤治疗。