人β2微球蛋白基因启动子的克隆及其在P815细胞中的活性研究

目的:克隆人β2微球蛋白(β2m)基因启动子,并研究其在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中对下游报告基因的启动活性。方法:用PCR法从基因组内扩增β2m基因启动子。通过基因重组的方法,构建含此启动子的EGFP基因真核表达载体,然后分别瞬时和稳定转染P815细胞。通过RT-PCR、荧光显微镜摄像和流式细胞术分析,观察IFN-γ作用前后EGFP的表达。结果:从基因组内扩增出302bp的人β2m基因的启动子,成功地构建了含此启动子的真核报告载体。RT-PCR的结果表明,IFN-γ对启动子的活性具有诱导作用,且呈浓度依赖性。流式细胞术的结果显示,在5×105U/LIFN-γ作用下,尽管表达EGFP的细胞数量没有差异,但刺激组EGFP的表达强度是未刺激组的2倍。结论:人β2m基因启动子在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中具有高度的启动活性。通过该启动子中所含干扰素刺激反应元件(ISRE),可在IFN-γ诱导作用下调控下游目的基因的表达。

针叶水溶性物质化学组成及其应用的研究

研究了针叶水溶性物质中的维生素、含氮化合物、有机酸、碳水化合物 (糖 )

松树皮提取碧萝芷天然抗氧剂的研究

研究了马尾松、湿地松、火炬松、落叶松和黑荆树等树木的树皮 ,以及马尾松和湿地松等树木的针叶提取、分离、精制碧萝芷的工艺和产品质量。试验表明 ,以黑荆树树皮作原料提取碧萝芷高效抗氧化剂的产品得率高 ,质量好 ;制得的产品 ,外观为浅粉红色粉末 ,产品中原花色素含量达95%以上。

针叶水溶性物质提取工艺试验

研究了从马尾松、黑松和雪岭云杉新鲜嫩枝叶提取、分离、精制水溶性物质的工艺，产品质量。

从杨树皮提取分离不饱和脂肪酸的研究

精制的杨树皮不饱和脂肪酸乙酯产品是高纯度的亚油酸制品。产品中主要成分是亚油酸，其含量达９４．０４％。精制不饱和脂肪酸乙酯得率为３０％～３６％。急性毒性试验证明，产品无毒，安全可靠。药效试验证明，精制的不饱和脂肪酸乙酯对试验性高脂血症大鼠有较明显的降血脂作用（Ｐ＜０．００１）。

甘草酸单铵盐的精制工艺研究

以 2 6 %甘草酸为原料采用乙醇法精制甘草酸单铵盐 ,产品平均得率 13 97% ,甘草酸单铵盐含量为 95 3%～ 97 6 % ,95%乙醇回收率为 79 6 % ;扩大试验产品得率 12 1% ,甘草酸单铵盐含量 95 99% ,95%乙醇回收率为 90 4 6 %。临床试验表明 。

电脉冲介导荧光素酶基因转移高效率的实验研究

目的 研究电脉冲介导的基因转移效率及其最佳基因转移电脉冲参数。方法 用微量注射器将pcDNA3-Luc质粒100μg注射入BALB/小鼠的股四头肌,5 min内在注射部位给予不同参数的电脉冲刺激,然后进行荧光素酶活性测定和组织病理切片。结果 电脉冲可明显增加荧光素酶基因的表达,电脉冲组的荧光素酶活性(7.26±3.72)×107 RLU/mg蛋白是单纯注射组(1.38±1.27)×104 RLU/mg蛋白的5 262倍(P=0.017)。组织病理检查发现电脉冲刺激无严重的肌肉组织损伤。电压100 V/cm,波宽60 ms,脉冲次数10次和频率0.75 Hz是最佳的电脉冲参数。结论 在最佳的电脉冲参数条件下,电脉冲介导的基因转移可获得较高的基因表达。

有丝分裂原蛋白激酶与糖尿病肾病

糖尿病时 ,多种因素激活肾脏细胞内有丝分裂原蛋白激酶 (MAPK)信号通路。MAPK激活后通过调节下游转录因子活性 ,控制基因表达 ,最终引起肾小球肥大和细胞外基质 (ECM)积聚 ,导致糖尿病肾病 (DN)的发生。

体外震波治疗泌尿系结石148例临床分析

我院1989年3月～1992年3月应用国产BD-8828型体外震波碎石机治疗泌尿系结石148例,现就临床资料分析如下。1临床资料1 .1一般情况本组148例,双侧结石3例,共151侧。男性107例,女性41例。

决策与执行

“一个好校长就是一所好学校。”一个好的学校的匹配应该是校长做正确的事，他手下的团队要正确地做事。不能说学校每一个中层干部都要想到终端的正确，而是说校长想到终端正确就够了，中层干部要去保障执行、遵守执行，就会做到正确。每一所学校里的校长就好比是一个家庭里的家长，而职员就是子女，没有不需要关怀的子女，所以如果一所学校的校长能多关怀一下职员，

浅谈小学语文教学随文练笔

小学语文教学中的阅读不同于生活中的阅读,在语文课堂里,阅读本身不是目的,而是提高语言表现素养、写作素养的手段和过程。如果学生的写作素材能从生活的内容扩展到语文的课文中来,学生真正学会读写结合,那么他们通过这样的写作训练,就再也不会害怕写作文,而且写作能力就会跟着随文练笔得到提高。所以说随文练笔是"阅读与习作"的中介,接受与创造的桥梁,是达成拓展思维空间,提高阅读和写作质量的教学目标的有效途径,也是教师实践新课标思想的体现。

质粒介导RNA干扰抑制视网膜母细胞瘤细胞的血管内皮生长因子表达

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）短发夹RNA（shRNA）表达质粒稳定转染对视网膜母细胞瘤（RB）细胞中VEGF表达的作用。方法构建VEGF shRNA表达质粒p4．1CMV—VEGF shRNA，以脂质体介导其转染两种RB细胞系SO—RB50和HXO—RB44，新霉素筛选结合梯度稀释法获得p4．1CMV—VEGF shRNA阳性RB细胞单克隆，继续培养扩增建立p4．1CMV—VEGF shRNA阳性RB细胞，用荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测RB细胞中VEGF基因的表达，并用酶联免疫吸附（ELISA）法检测RB细胞上清中VEGF蛋白的表达；以与哺乳动物基因组无同源性的shRNA表达质粒p4．1CMV—Neg shRNA作为阴性对照，同时以未做任何处理组作为空白对照。结果成功构建p4．1CMV—VEGF shRNA并获得其表达阳性的RB细胞克隆。阴性对照组和空白对照组SO-RB50细胞的VEGF基因表达量分别为实验组的5．02倍和6．32倍；阴性对照组和空白对照组HXO—RB44细胞分别为实验组的5．70倍和4．86倍。实验组SO—RB50细胞上清中，VEGF蛋白浓度为（187．69±83．89）μg/L，显著低于阴性对照组（822．98±187．98）μg/L和空白对照组（865．76±170．33）μg／L，差异有统计学意义（均P〈0．01）；实验组HXO—RB44细胞上清中，VEGF蛋白浓度为（162．20±66．33）μg／L，与阴性对照组（764．33±164．79）μg／L和空白对照组（828．22±145．94）μg／L比较，差异也有统计学意义（均P〈0．01）。结论VEGF shRNA表达质粒稳定转染可高效抑制RB细胞中VEGF的表达，靶向VEGF的RNA干扰可作为拮抗VEGF并治疗RB的有效手段。（中华服科杂志，2007,43：493-498）

sOVA-linker-β2m融合蛋白构建表位特异的靶结构

目的 构建融合基因sOVA linker β2m ,探讨通过内源性途径递呈的肽在细胞表面形成MHCⅠ类分子复合物的情况。方法 构建了真核表达载体pcDNA3/sOVA linker β2m及不含有 β2m基因的对照载体 ,以研究 β2m是否能在此过程中起到辅助的作用。结果 RT PCR与原位杂交结果显示在各转导细胞中均有融合基因的正确表达 ,且二者的表达水平差异无显著性 (P >0 .0 5 )。进一步对细胞内、细胞表面H 2Kb OVA复合物的分布进行分析 ,表明各转导细胞中均有正确的蛋白质分子翻译合成 ,并能表达在细胞表面 ,但融合有 β2m基因的EL4 /eb2m细胞的表达量远远高于没有融合 β2m基因的转导细胞EL4 /OVA。结论 β2m基因与特异性抗原肽的融合 ,易于形成稳定的MHCⅠ类分子复合物 ,提高抗原呈递效率。