Wistar大鼠视网膜神经元高糖模型葡萄糖浓度和培养时间的筛选

目的筛选Wistar大鼠视网膜神经元高糖模型的葡萄糖浓度及培养时间。方法取出生1~3 d Wistar大鼠分离视网膜神经元进行传代培养,尼氏染色法鉴定细胞;实验分5组:A组培养液葡萄糖浓度为0 mmol·L^(-1)(正常对照组),B组浓度为10 mmol·L^(-1),C组浓度为15 mmol·L-1,D组浓度为25 mmol·L^(-1),E组浓度为35 mmol·L^(-1)。分别培养24 h、48 h、72 h后用MTT法检测各组细胞OD值,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果倒置显微镜观察分离培养细胞,大部分细胞于接种24 h后贴壁,少数细胞长出较短的突起,并有向中央聚集生长的现象。2~3 d后长出突起的神经元数目增多,突起长度增加,约为自身胞体长度的1倍。培养5~7 d后神经元突起进一步增多、变长。经尼氏染色后细胞质呈蓝紫色,尼氏小体颗粒状结构清晰。非神经元细胞胞质基本不着色,细胞核呈淡紫色、圆形,核仁清晰可辨,神经元率达91%。各实验组在培养24 h后OD值均低于正常对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。随培养时间延长OD值继续下降,48 h后各组OD值比较差异有统计学意义(P<0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P>0.05);D组OD值明显下降,与A组比较差异有统计学意义(P<0.05),E组下降更明显,与A组比较差异有统计学意义(P<0.01)。72 h后各组OD值比较差异有统计学意义(P<0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P>0.05);D组及E组与A组比较差异有统计学意义(均为P<0.01)。各组在培养24 h后视网膜神经元凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。48 h后各组凋亡率比较差异有统计学意义(P<0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P>0.05);D组凋亡率明显升高,与A组比较差异有统计学意义(P<0.05);E组凋亡率升高更明显,与A组比较差异有统计学意义(P<0.01),且与D组比较亦有统计学意义(P<0.05)。72 h后各组凋亡率比较差异有统计学意义(P<0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P>0.05),D组及E组与A组比较差异有统计学意义(均为P<0.01)。结论葡萄糖浓度为25 mmol·L^(-1)培养48 h是视网膜神经元高糖模型最佳葡萄糖浓度及干预时间。

我国南海天然气开发前景展望

截止到2007年底,我国南海探明天然气地质储量已达到3235×108m3,天然气年产量为60×108m3,占我国海上天然气总产量的88%。在该区的勘探开发实践证实:①我国南海具有丰富的天然气资源;②南海是我国海上最重要天然气生产基地;③深水天然气勘探所获得的重大突破,使得南海天然气勘探开发具备了进一步发展的广阔前景。但是,南海天然气开发也面临着许多挑战:自然环境条件恶劣,勘探开发投资大、成本高,深水勘探开发经验不足,存在海域争端等。对此,应采取以下措施:①继续坚持自营与合作并举,加快南海天然气勘探开发步伐;②以开发荔湾3-1气田为突破口,全面掌握深水勘探开发技术;③建立自己的深水研发和装备队伍;④努力推动南海争议区的共同开发工作进程。结论认为:南中国海蕴藏着丰富的油气资源,有望建成大型天然气生产基地,如果战略目标明确、规划落实、勘探开发资金到位,2020年前后南海有望形成400×108～500×108m3的天然气年产能力。

视网膜血管内皮细胞高糖模型糖浓度及培养时间的筛选

目的:筛选Wistar大鼠视网膜血管内皮细胞(retinal vascular endothelial cells,RVEC)高糖模型糖浓度及培养时间。方法:取出生1~3d的Wistar大鼠,分离RVEC进行原代培养,Ⅷ因子抗体免疫组化鉴定细胞;设立葡萄糖浓度0mmol/L为正常对照组(C组),按不同葡萄糖浓度依次分为10mmol/L(A组)、15mmol/L(B组)、25mmol/L(D组)、35mmol/L(F组),分别在24、48、72h的3个时间点用MTT法检测各组细胞OD值,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果:RVEC纯度达94%;MTT法检测不同浓度葡萄糖对Wistar大鼠RVEC的影响:培养24h,各组的OD值比较差异无统计学意义(F=0.42,P=0.7411);培养48h,五组OD值比较差异有统计学意义(F=45.2,P=0.000),五组间两两比较,除A组、B组、C组间差异无统计学意义外(Q_(48AB)=44.0427,Q_(48AC)=36.4701,Q_(48BC)=27.7953,均P>0.05),其余各组两两比较差异均有统计学意义(其中Q_(48CD)=11.0715,Q_(48AD)=14.0794,Q_(48AF)=12.2964,Q_(48BD)=23.4698,Q_(48BF)=12.7016,Q_(48DF)=10.2013,均P<0.05;Q_(48CF)=6.4701,P<0.01)。培养72h后,五组OD值比较差异有统计学意义(F=37.46,P=0.000),五组间两两比较,同样A、B、C三组间差异无统计学意义(Q_(72AB)=27.7338,Q_(72AC)=25.0054,Q_(72BC)=33.3797,均P>0.05),其余各组差异均有统计学意义(其中Q_(72AD)=13.4793,Q_(72BD)=12.7546,均P<0.05;Q_(72CD)=7.3743,Q_(72CF)=8.3465,Q_(72AF)=4.7455,Q_(72BF)=3.9471,Q_(72DF)=3.2649,均P<0.01)。不同浓度葡萄糖在不同时间点对RVEC凋亡率的影响:培养24h后各组间差异无统计学意义(P>0.05)。培养48h后,五组间两两比较,Q_(48AB)=31.1704,Q_(48AC)=33.5947,Q_(48BC)=29.3968,Q_(48AD)=30.4097,Q_(48BD)=28.8164,均P>0.05;Q_(48CD)=12.5032,Q_(48AF)=11.7531,Q_(48BF)=14.1076,Q_(48DF)=13.9372,均P<0.05;Q_(48CF)=7.0953,P<0.01。培养72h后,五组间两两比较,Q_(72AB)=26.3392,Q_(72AC)=24.9142,Q_(72BC)=30.2976,均P>0.05,其余各组差异均有统计学意义(其中Q_(72AD)=14.1983,Q_(72BD)=12.9356,均P<0.05;Q_(72CD)=6.8752,Q_(72CF)=7.6745,Q_(72AF)=5.0545,Q_(72BF)=4.0741,Q_(72DF)=3.8876,均P<0.01)。结论:葡萄糖浓度为25mmol/L培养48h是RVEC高糖模型最佳葡萄糖浓度及干预时间。

海上稠油油藏早期注聚最佳时机的确定

受经济性及平台寿命限制,海上油田开发须在较短时间内尽可能获得最大采出程度和效益。设计了不同孔隙体积注入水转聚实验和不同注水体积微观可视化驱替实验,结果表明水驱前缘突破前注聚合物能够有效扩大波及效率。进一步结合一维贝克莱渗流理论,利用油水/油聚相渗曲线,研究了海上油田转聚时机范围,认为含水快速上升阶段为最佳注聚时机,并且地层原油黏度越大,注聚时机越提前;对于黏度为25.9、70.0、122.8 mPa·s等具有代表性的海上稠油油藏,其最佳转注时机分别为油藏含水饱和度在0.186、0.252、0.354(油藏含水34%、49%、56%)左右。在渤海S稠油油田实施了聚合物驱矿场试验,注聚初期含水率为68%,截至2017年12月累增油量达到464.5万m3,这表明早期注聚能够实现海上油田平台有效期内早拿油、快拿油、多拿油的预期目标。

二元复合驱注采参数优化方法研究

二元复合驱已在胜利、大庆等油田工业化应用,但矿场上普遍采用的笼统均匀注剂方式没有考虑地层条件差异,容易造成高价化学剂利用效率不高,无法完全发挥其降水增油作用。以经济净现值为目标函数,考虑矿场注入能力及地层条件限制建立约束条件,给出二元复合驱注采优化模型,并利用最优扰动近似梯度法进行求解。结果表明:在聚合物和表面活性剂总注入成本恒定的条件下,通过优化调配各注入井的聚合物质量浓度、表面活性剂质量分数和段塞尺寸,油藏累积采出程度相比均匀注剂方案提高1. 23%,经济净现值提高977. 8万元。优化结果说明提出的二元复合驱注采参数优化方法能够辅助设计高效合理的二元复合驱开发方案,对提高二元复合驱开发项目的经济、技术效益具有一定的指导意义。

重组人表皮生长因子在治疗外耳道胆脂瘤中的应用

目的探讨耳内镜下显微手术结合重组人表皮生长因子填塞治疗外耳道胆脂瘤的疗效。方法 34例(42耳)Ⅰ、Ⅱ期外耳道胆脂瘤患者耳内镜下行胆脂瘤清除术,然后外用重组人表皮生长因子凝胶无菌纱条铺于鼓膜及骨性耳道表面,蓬松填塞外耳道。结果34例患者(42耳)治疗后即自觉听力好转;1周后耳痛、耳鸣症状消失,术后3周复查全部干耳,外耳道骨部上皮完整,无狭窄,鼓膜标志清,无穿孔,经纯音测听语言频率平均气导听阈为(13.15±7.34)d B与术前比较有统计学意义(P<0.05),气骨导差均小于1 0 d B,平均为(5.3 8±2.1 5)d B,与术前比较有统计学意义(P<0.0 5)。声导抗检查鼓室压力图A型曲线36耳,B型曲线6耳。所有患者随访半年未见复发,无外耳道狭窄等并发症。结论耳内镜下显微手术结合重组人表皮生长因子填塞治疗外耳道胆脂瘤是一种操作简便、安全、有效的方法,值得临床推广应用。

发光二极管照射对高糖培养的视网膜神经元凋亡的光生物调节作用及其机制

背景研究糖尿病视网膜病变（DR）的发病机制及防治具有重要的临床意义。近年来随着生物医学光子学研究的发展，国际上利用光生物调节进行疾病防治的研究越来越受到重视，但关于光生物调节对DR的防治作用研究鲜见报道。目的探讨光生物调节对高糖环境下视网膜神经元凋亡的抑制作用及其机制，为光生物调节在DR治疗方面的应用提供依据。方法采用免疫磁珠分离法分离Wistar大鼠视网膜神经元并进行传代培养，采用Nissl染色法对培养的细胞进行鉴定。将培养的细胞分为正常对照组、高糖模型组和高糖＋发光二极管（LED）组，正常对照组细胞采用Neurobasal培养基进行培养，高糖模型组细胞在Neurobasal培养基中添加25 mmol/L葡萄糖，高糖＋LED组细胞造模后48 h在培养箱中用LED红光光源进行照射，光源波长为620 nm，最大功率为1 W，中心光辐射照度为6.67 mW/cm2。光源置于细胞上方2 cm处，光斑直径为2.0 cm，使光斑完全覆盖1个培养孔，每次连续照射300 s，12 h后重复照射1次，共照射3次。培养后48 h采用流式细胞仪测定各组细胞凋亡情况；采用激光扫描共焦显微镜观察各组细胞内Ca2＋浓度变化；Western blot法检测各组细胞中磷酸化丝氨酸－苏氨酸激酶（p-AKT）蛋白的相对表达量。 结果培养后2～3 d，倒置显微镜下可见细胞呈多边形和椭圆形，可见细胞核及核仁。培养后5～7 d神经元突起增多，经Nissl染色后细胞质呈蓝紫色，神经元与神经胶质细胞的比例达91%。正常对照组、高糖模型组和高糖＋LED组细胞凋亡率分别为（7.634±3.176）%、（33.642±9.315）%和（23.914±6.375）%，其中高糖模型组和高糖＋LED组细胞凋亡率均明显高于正常对照组，高糖＋LED组细胞凋亡率明显低于高糖模型组，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。激光扫描共焦显微镜下可见高糖模型组和高糖＋LED组细胞中Ca2＋荧光像素值均明显高于正常对照组，高糖＋LED组细胞中Ca2＋荧光像素值明显低于高糖模型组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。Westen blot法检测显示正常对照组、高糖模型组和高糖＋LED组细胞中p-AKT蛋白相对表达量分别为10.34±3.18、2.16±0.46和7.15±1.72，高糖＋LED组细胞中p-AKT蛋白相对表达量明显低于高糖模型组，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论高糖环境抑制抗凋亡的PI3K/AKT通路活性并影响视网膜神经元钙稳态，导致细胞凋亡。低强度LED光照射可激活PI3K/AKT通路，减少高糖引起的细胞凋亡。

薄层低品位油藏孔隙结构及渗流特征

薄层低品位油藏的油层厚度比较薄、埋藏比较深、渗透率比较低、储量丰度低、开采难度大。通过物理模拟实验研究了薄层低品位油藏的孔隙结构特征、两相渗流规律、启动压力梯度和岩石压缩性的变化规律,重点分析了不同渗透率毛管压力曲线的变化、不同渗透率相对渗透率曲线的变化规律、启动压力梯度对储层物性的影响、流动系数之间的关系、围压与渗透率之间的变化规律等。结果表明,薄层低品位油藏的孔隙结构及渗流特征与中高渗油藏有很大不同,启动压力梯度和压力敏感性影响很大,必须选择合理的注采压差和注采井距,建立有效的驱替压差,才能克服启动压力梯度和压力敏感性的不利影响,改善开发效果。

神经导管修复大鼠坐骨神经缺损实验研究

目的:采用一种自行研制的具有良好生物相容性的壳聚糖构建人工神经来修复大鼠坐骨神经缺损,研究证实其修复效果。方法:选用30只健康雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组(A组)、原位神经移植组(B组)、壳聚糖神经导管桥接组(C组)3组,分别切断坐骨神经后做相应处理,12周后进行神经电生理检测。结果:C组12周后神经已经长过缺损段,神经传导功能恢复。结论:这种套管能够有效的桥接10 mm长的大鼠坐骨神经缺损,可应用于周围神经缺损的治疗,同时可以作为进一步开发组织工程化的人工神经的良好载体。

一种快速分离检测产脂肽类生物表面活性剂枯草芽孢杆菌的方法

脂肽(Lipopeptide)是由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)等微生物产生的一类具有较强表面活性的生物表面活性剂。枯草杆菌磷酸泛酰巯基转移酶基因(sfp)是枯草芽孢杆菌中参与脂肽代谢的功能性基因。采用sfp基因PCR对从环境中得到的一组产生表面活性剂的微生物进行筛选,结合Tricine-SDS-PAGE电泳对PCR结果呈阳性的菌株的代谢粗初提物进行检测,初步鉴定得到两株枯草芽孢杆菌。进一步利用16S rDNA序列的系统发育学分析确定这两种菌株为枯草芽孢杆菌,并利用TLC、HPLC鉴定其产物为脂肽类表面活性剂,从而建立了一套快速分离检测产生脂肽类生物表面活性剂的枯草芽孢杆菌方法。

壳聚糖支架与大鼠许旺细胞的体外组织相容性

背景:与聚乳酸、胶原等材料相比,壳聚糖作为一种新的生物材料研究时间较短,在神经修复方面的工作开展的较少。目的:介绍一种简单的壳聚糖支架制备方法并分析其与许旺细胞的生物组织相容性。设计、时间及地点:体外对比观察实验,于2008-11/2009-07在包头医学院生物医学中心实验室完成。材料:Wistar乳鼠10只用于分离培养许旺细胞。医用级壳聚糖粉(脱乙酰度为99%)由浙江澳兴生物科技有限公司提供。方法:以6%壳聚糖乙酸水溶胶制备壳聚糖支架,取乳鼠坐骨神经采用酶消化后组织块贴壁培养的方法培养许旺细胞。实验分为正常对照组和实验组,实验组将壳聚糖支架平铺于孔底,超净工作台内干燥,然后将许旺细胞接种到培养板内培养,24h后培养液中加入4,6-二氨基-2-苯基吲哚孵育过夜,去除未与细胞结合的4,6-二氨基-2-苯基吲哚继续培养1周。正常对照组不加任何干预,同样在37℃和体积分数为5%CO2的条件下培养1周。主要观察指标:培养第1,3,5,7天分别选择细胞总数不低于100和200个的视野进行照像,应用图像分析软件(Image pro plus 6.0)分析,计算凋亡细胞的百分率。结果:壳聚糖支架表面光滑,透明状,质地均匀,厚度0.15mm。正常对照组和实验组在第1,3,5,7天凋亡细胞的百分率比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:该壳聚糖支架所需材料少,制作方法简单,与许旺细胞具有良好的组织相容性。

真菌球型鼻窦炎的病变部位分布及CT影像特征分析

目的探讨真菌球型鼻窦炎的病变部位分布及CT影像特征。方法回顾分析解放军总医院2014年10月-2015年1月收治的经鼻内镜手术治疗、病理学确诊为真菌球型鼻窦炎78例的病变部位分布和术前鼻窦CT表现。结果单侧发病66例(84.62%),双侧发病12例(15.38%),上颌窦发病率最高,为64例(82.05%),其他鼻窦发病14例(17.95%)。CT表现:病变鼻窦内软组织影中央见斑点状、线状或云絮状钙化灶58例(74.43%),病变鼻窦骨质增生硬化59例(75.64%)。结论真菌球型鼻窦炎多为单窦发病,以上颌窦受累最多见;病变中央钙化影、窦壁骨质增生是特征性CT表现,确诊依据病理学检查。

论公共利益导向的产品严格责任制度

为合理保护消费者利益和厂商利益,应当建立以公共利益为导向的产品严格责任理念。首先,产品严格责任制度建立的司法实践鲜明地体现出公共利益导向。其次,理性分析表明,在一定条件下,产品严格责任制度确实是保护公共利益的最佳制度。此外,过度的产品严格责任,有损社会公共利益。

Triton X-100/甲苯/水三元体系界面张力的耗散颗粒动力学模拟

采用耗散颗粒动力学方法在介观层次上模拟了非离子表面活性剂TritonX-100在油/水界面上的分布行为,并把用于油/水二元体系界面张力的计算方法拓展到含表面活性剂的三元体系.利用该方法可以得到与实验数值吻合的界面张力数据.另外,模拟结果直观展示了表面活性剂界面张力与界面密度的关系,为表面活性剂复配增效理论提供了依据.该模拟方法给出的微观信息可以为驱油体系配方筛选和表面活性剂有效应用提供指导.

村社文化传统与20世纪初苏联土地公有制理论的形成

20世纪初俄国发生了震惊世界的社会变迁,建立了世界上第一个无产阶级专政的社会主义国家———苏联。作为首要和核心任务的土地制度改革为布尔什维克赢得了大多数农民的支持,从而巩固了政权。指导这一改革的土地公有制理论不是一蹴而就的,其核心的土地公有、平均地权等政策明显受到了俄国村社文化传统的影响。

海上稠油聚合物驱关键技术研究与矿场试验

在深入分析海上稠油聚合物驱提高采收率的难点与挑战的基础上,通过近10年的攻关和矿场试验,研制出适合海上稠油油藏条件的驱替液技术、平台聚合物配注技术、海上稠油含聚采出液处理技术及早期注聚效果评价等一系列技术,初步形成了海上油田聚合物驱油技术体系,并在渤海绥中36-1、旅大10-1及锦州9-3等3个油田进行了不同规模的现场试验,取得了明显的增油降水效果。证明了聚合物驱提高采收率技术在海上稠油油田应用的技术可行性和经济有效性,为海上油田高效开发探索出了一条崭新的道路,具有广阔的应用前景。

海上油田丛式井网整体加密调整技术研究

以绥中36-1为代表的海上稠油油田已经进入开发中后期,逐步暴露出注采矛盾突出、层间和平面上储量动用差异大、单井控制储量过高、采油速度和采收率较低、综合含水上升快,产量递减快等问题,针对中国海油稠油开发面临的挑战,首次提出海上油田大规模综合调整研究,由于海上油田特殊的开发方式,陆地油田综合调整工作中成熟的研究思路和技术路线无法复制到海上油田,海上油田整体加密调整技术研究面临诸多技术难点,因此,本次研究结合绥中36-1油田I期自身特点和开发方式,针对油田开发存在的问题,创新性地提出一整套海上油田的整体挖潜和调整的技术思路和研究方法,完成绥中36-1油田I期整体加密调整方案,调整后油田井网由反九点面积注水井网转变成为行列注水井网,探索"定向井+水平井"开发模式,整体加密实施效果良好,油田水驱状况明显改善,水驱储量动用程度从调整前的80.5%提高到调整后的91.3%,采收率大幅度提高,预计提高采收率10.4%,整体加密调整技术必将在同类油田中推广应用。

发光二极管照射对大鼠高糖视网膜血管内皮细胞的光生物调节作用及其机制

目的:观察发光二极管照射对大鼠高糖视网膜血管内皮细胞中的光生物调节作用及其机制。方法:大鼠视网膜血管内皮细胞随机分为三组:正常对照组、高糖模型组、高糖模型发光二极管照射组,高糖模型发光二极管组的细胞在造模48h后开始采用发光二极管对培养箱中的细胞进行照射。MTT细胞凋亡实验检测各组细胞凋亡率;激光共聚焦显微镜观察各组视网膜血管内皮细胞胞内钙离子变化;Western blot法检测各组磷酸化丝氨酸-苏氨酸激酶(P-AKT)蛋白表达。结果:正常对照组、高糖模型组、高糖模型发光二极管照射组凋亡率分别为7.54%±2.67%,31.69%±5.74%,21.65%±3.52%(P<0.05)。正常对照组细胞质微弱Ca2+荧光染色呈现出绿色的荧光,其荧光像素值为192.65±50.54;高糖模型组中,细胞质呈现较强烈的绿色荧光,其荧光像素值为710.69±100.38;发光二极管照射组中,绿色荧光像素值为430.47±80.67,明显高于正常对照组,但明显低于高糖模型组。三组间细胞中内Ca2+荧光像素值有差异(P<0.05)。这三组细胞P-AKT蛋白量分别为10.26±2.47、2.35±0.16、7.46±1.64(P<0.05)。结论:高糖环境抑制苏氨酸激酶通路活性,对大鼠视网膜血管内皮细胞钙稳态产生影响,促使细胞凋亡,低强度的发光二极管照射可激活苏氨酸激酶通路,降低高糖引起的细胞凋亡率。

海上采油工艺新技术与实践综述

结合"十一五"期间海上油田开发生产所面临的挑战,介绍了采油工艺方面探索和取得的新成果。