毛竹KDO8PS的原核表达纯化及晶体生长

3-deoxy-D-manno-octulosonate(KDO)8-phosphate synthase(KDO8PS)[EC 4.1.2.16]是KDO生物合成途径中的关键酶。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,以毛竹Phyllostachys edulis新鲜实生苗为材料,分离得到竹子KDO8PS基因。通过对不同物种来源的KDO8PS进行氨基酸序列比对分析和半定量RT-PCR技术对该基因进行组织特异性表达分析。将PeKDO8PS基因构建入原核表达载体pET-28a,并在大肠埃希菌Escherichia coli原核表达系统中获得了KDO8PS的可溶性高表达。经nickel亲和层析和分子筛纯化2种方法对表达蛋白进行纯化。结果分析表明:该基因编码区全长876 bp,可编码291个氨基酸。PeKDO8PS与拟南芥Arabidopsis thaliana等植物来源的KDSA2的基因有很高序列一致性,而与微生物来源的KDO8PS序列一致性较低。分析毛竹各组织中KDO8PS基因的表达结果表明,该基因在根、茎和叶片中均有表达,但在根中相对表达量较高,此表达模式亦同拟南芥AtKDSA2类似。另外,发现KDO8PS在溶液(30 mmol·L-1Tris-HCl pH 8.0,200 mmol·L-1氯化钠)中以二聚体的形式存在,并且初步筛选出该酶晶体生长条件。此结果为PeKDO8PS蛋白的最终结构分析奠定了基础。

维药制剂药渣中蛋白质及游离氨基酸的含量测定

目的：测定药渣中蛋白质及氨基酸的含量。方法：用考马斯亮蓝G-250、茚三酮显色,分光光度法测定蛋白质及氨基酸的含量。结果：CBB G-250显色测定蛋白质线性范围0.081~0.202 mg,加样回收率102.06%、RSD为0.99%;茚三酮显色测定氨基酸的线性范围0.016~0.029 mg/m L,加样回收率99.83%、RSD为1.82%。结论：CBB G-250和茚三酮显色,均具有简便、快速、灵敏度高、成本低、重现性好等特点。

毛竹MYB转录因子PeMYB2的克隆与功能分析

MYB类转录因子在调控逆境应答基因的表达起着重要的作用,是最大的植物转录因子之一。文章通过同源基因克隆方法和RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术,以毛竹幼苗为材料,获得一个MYB类转录因子,命名PeMYB2。氨基酸序列分析表明,PeMYB2具有典型的R2R3-MYB特征,N端含有两个串联重复保守结构域,C端含有一个膜蛋白DUF3651;进化树分析表明,PeMYB2与水稻OsMYB18序列相似性最高,达到85.98%;酵母单杂实验表明,PeMYB2具有转录激活功能。将PeMYB2转化拟南芥对其功能进行分析,获得7株转基因纯合体植株。比较转基因和野生型拟南芥表型发现,PeMYB2的过量表达使转基因拟南芥出现矮化、晚花的现象;非生物胁迫处理(盐胁迫、干旱胁迫、低温胁迫)结果表明,转基因拟南芥中PeMYB2的过量表达,导致转基因植株对盐胁迫和低温胁迫有更高的耐性,但是对低温胁迫的耐受性没有明显的变化;进一步通过盐胁迫信号通路相关Marker基因(NXH1、SOS1、RD29A、COR15A)的定量PCR实验验证,发现PeMYB2对下游这些抗逆基因的表达具有调控作用。上述实验结果表明,毛竹PeMYB2可参与非生物胁迫调控,对毛竹盐胁迫和低温胁迫的响应起着重要的作用。

中药转阴丹联合激素治疗男性不育患者精浆抗精子抗体阳性的临床观察

目的 探讨自拟中药转阴丹联合激素治疗抗精子抗体阳性不育患者的临床疗效以及一氧化氮(NO)含量的变化。方法 选择精浆抗精子抗体阳性的男性不育患者82例,按数字表法随机分为西药组(20例,用强的松)、中药组(28例,用转阴丹)、中西药组(34例,用强的松和转阴丹),并观察其临床疗效、治疗前后抗精子抗体的转阴率、精浆NO的含量变化及精子各项运动参数。结果 总有效率中西药组为88.2％,中药组为75.0％,西药组为65.0％。中西药组和中药组精浆MO含量、精子运动参数中直线运动速度、直线性、前向性、鞭打频率、精子活力、平均移动角度,精液质量治疗前后比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01)。西药组NO含量、前向性、鞭打频率、平均移动角度,精液质量中精子活力和活率治疗前后比较差异有显著性(P<0.05)。结论 转阴丹联合激素可降低精浆NO的含量、改善精子质量。

HPLC法同时测定西帕依固龈液药渣中没食子酸、鞣花酸的含量

目的建立同时测定西帕依固龈液药渣中没食子酸、鞣花酸含量的HPLC-DAD法。方法采用Agilent Zorbax SB-C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.05%磷酸水溶液梯度洗脱,流速:1mL/min,检测波长:258nm。结果没食子酸、鞣花酸在各自测定的范围内线性关系良好(r≥0.999 9),回收率分别为99.96%、99.56%,RSD分别为1.13%、1.99%;没食子酸和鞣花酸的含量分别为5.334 1~11.865 8mg/g和0.635 7~1.951 7mg/g。结论 HPLC-DAD法操作简便、快速、准确、重现性好,可为西帕依固龈液药渣作为一种鞣质资源的开发利用提供参考依据。

维药苜蓿子中总多酚与总多糖的含量测定

目的建立苜蓿子中总多糖与总多酚含量的测定方法。方法以葡萄糖、没食子酸为对照品,以蒽酮-硫酸、福林试剂-碳酸钠溶液体系为显色剂,采用可见分光光度法在检测波长582、760 nm处测定10批苜蓿子中总多糖与总多酚的含量。结果葡萄糖溶液浓度在0.02～0.12 mg/mL、没食子酸溶液浓度为1～7μg/mL（r=0.999 5）范围内与吸光度呈良好的线性关系,加样回收率为104.30%、101.46%,RSD为2.40%、2.90%,总多糖的含量为22.34～53.43 mg/g,总多酚的含量为3.03～4.88 mg/g。结论可见分光光度法简单,准确性、重复性良好,为苜蓿子多糖与多酚的进一步研究奠定了基础。

阅读治疗对慢性精神分裂症康复效果的分析

目的探讨阅读治疗对慢性精神分裂症患者的康复效果。方法实施半开放式管理,将78例慢性精神分裂症患者随机分为研究组和对照组,每组39例。在两组均使用相同剂量抗精神病药物治疗的基础上,研究组辅以为期3个月的阅读治疗,观察两组主要临床症状改善的情况。结果两组主要临床症状改善情况的比较,有显著性差异(P<0.05)。结论在抗精神病药物治疗基础上辅以阅读疗法,对慢性精神病分裂症患者的康复疗效肯定。

音乐治疗对慢性精神分裂症患者临床康复的影响

目的 探讨音乐治疗对慢性精神分裂症患者临床康复效果的影响。方法将78例慢性精神分裂症患者随机分为两组各39例，两组患者均实施半开放式管理，均维持原用抗精神病药物治疗，研究组在此基础上联合音乐治疗，观察3个月。结果治疗后研究组情感平漠、思维贫乏、意志减退、注意障碍等症状的有效率均显著高于对照组（P〈0．05或0．01）。结论在抗精神病药物治疗基础上联合音乐治疗，对慢性精神分裂症患者的临床康复有积极的促进作用。

首发未婚精神病患者父母焦虑情绪状况的调查分析

目的探讨首发未婚精神病患者父母焦虑情绪因素,采取护理措施,提高其生活质量。方法采用状态特质焦虑问卷调查2009年2月至2009年5月绵阳市第三人民医院住院78例首发未婚精神病父母的焦虑状况进行分析。结果首发未婚精神病父母状态特质焦虑量表分值明显高于正常人群,父母经济状况、职业、文化程度、性别是影响其焦虑的主要原因。结论首发未婚精神病患者父母存在一定焦虑,应对其进行心理指导,以减轻焦虑,为患者提供更好支持。

提高小学低年级识字教学效果的方法与途径

承载着人类几千年文化的语言文字,是人与人之间重要的交流工具。汉字是传统文化的重要部分,学好汉字对弘扬传统文化具有重要意义,信息技术的发展和生活节奏的加快使得人们渐渐习惯了电子输入,这就导致了对汉字学习的忽视。汉字教学既是语文教学中的重点也是难点。为提高识字的效率,让学生对汉字产生浓厚兴趣,在教学中教师要针对不同的汉字,灵活运用各种方法,为学生呈现多样化的教学方式,培养学生识字兴趣,轻松学汉字,增加汉字学习的趣味性。

异位妊娠误诊为宫内孕44例分析

异位妊娠误诊为宫内孕４４例分析首都医科大学附属北京友谊医院妇产科张凤雪异位妊娠是妇科常见急腹症之一，临床上异位妊娠误诊为宫内孕并不罕见。１９９０年１月至１９９５年１０月我院经手术及病理证实的异位妊娠共３７２例。其中４４例收治前曾被各级医院误诊为宫内孕...

基于STA-K均值聚类的电化学废水处理过程离子浓度软测量

针对电化学废水处理过程出口离子浓度无法在线检测的问题,提出了一种基于状态转移的K均值聚类算法的软测量建模方法。在分析内部反应机理的基础上,结合物料平衡和吸附动力学定理建立电化学过程的机理模型;由于单一的软测量模型难以满足实际的精度要求,提出一种基于状态转移的K均值聚类算法将原始数据集进行聚类,应用状态转移算法对K均值算法的初始聚类中心进行优化,同时,引入离群值矩阵动态迭代同时实现数据聚类和异常值检测;最后,对聚类后的不同训练子集分别建立子模型,综合各子模型得到基于多模型切换方法的软测量模型。通过某废水处理厂的现场数据进行实例验证,结果证明了所建立的电化学废水处理过程离子浓度软测量模型合理有效。

黄精膏中水溶性总糖与多糖的测定

目的:测定黄精膏中水溶性总糖、多糖含量。方法:采用紫外可见分光光度法,经0.2%蒽酮-硫酸溶液显色测定黄精膏中的总糖、多糖含量。结果:实验测得黄精膏中总糖、多糖含量分别为85.63%、31.70%。精密度、回收率实验结果理想。结论:该方法简便、快速、准确,灵敏度高。

大学生社会责任意识教育初探

大学生社会责任意识教育越来越受到高校政治理论教育工作者的重视。但是目前大学生的社会责任意识状况却并不令人乐观。社会走向公正与高校政治理论课教学的民主化改革才是增强大学生社会责任意识的良药。

基于控制周期计算的锌液净化除铜过程优化控制

净化除铜过程是锌直接浸出冶炼工艺中硫酸锌溶液净化的第1个步骤,其效果直接影响着后续工序的正常进行以及最终锌产品的质量.本文针对除铜过程中控制周期与锌粉添加量不确定性,造成出口铜离子浓度波动大及锌粉浪费等问题,研究基于控制周期的除铜过程锌粉添加优化控制方法.首先通过分析反应器中氧化还原电位(oxidation-reduction-potential,ORP)与锌粉的时序变化关系计算除铜过程反应响应时间,然后分析响应时间的统计特性,从而确定锌粉控制周期.在确定控制周期的基础上,采用基于控制周期的固定节点控制参数化方法,从而将最优控制求解问题转化为非线性规划问题.最后,采用状态转移算法对该非线性规划问题进行求解.采集工业现场数据进行实验证明了该优化控制方法的有效性,为类似的净化过程的优化控制提供了新思路.

一起来打球吧——北京知春里中学举行垒球主题活动周

2012年5月26日至6月2日,知春里中学开展了＂一起来打球吧＂垒球主题活动,每一位学生都能亲手拿起垒球棒,体验击球的动作技术以及打球带来的乐趣和快感。5月27日,来自日本、台湾的慢投垒球队员与知春里中学女子垒球队员进行了一场精彩绝伦的交流比赛活动。知春里中学为海淀区垒球传统校，女子垒球队成立于1982年，

局部温热疗法治疗孢子丝菌病的研究进展

孢子丝菌病是一种由申克孢子丝菌复合体感染引起的疾病。临床主要表现为皮肤丘疹、疣状结节或者浸润性斑块。孢子丝菌病的病程长,危害大,现有的治疗方法主要包括:口服抗真菌药物、口服碘化钾、温热治疗、液氮冷冻等。其中,温热治疗以其安全性高、副作用小、价格低廉、患者接受度高等优势,逐渐在临床中得到推广,本文就温热治疗孢子丝菌病的研究进展进行概述。

Clinical Observation on Effect of Combination of Zhuanyindan (转阴丹) and Hormone in Treating MaleInfertility with Positive Antisperm Antibody

Objective:To explore the therapeutic effect of combination of Zhuanyindan (ZYD, 转阴丹, a self-made Chinese herbal preparation) and hormone in treating male infertility with positive antisperm antibody and its influence on nitric oxide (NO) level. Methods:Eighty-two patients were randomly divided (according to the digital list) into the WM group (n = 20, treated with prednisone), the TCM group (n=28, treated with ZYD) and the ICWM group (n=34, treated with prednisone plus ZYD). The clinical effect, negative converting rate of antisperm antibody, changes of NO level in semen and various parameters of sperm motion before and after treatment were observed. Results: The total effective rate in the ICWM group was 88.2%, that in theTCM group 75. 0% and in the WM group 65. 0%. Significant difference was seen in the ICWM and TCM group before and after treatment in NO level, sperm motion parameters, including linear motion speed, linearity, propulsion, whip frequency, sperm vitality and mean moving angle, and quality of semen ( P < 0. 05 or P < 0. 01). In the WM group, significant difference in comparison before and after treatment was seen in NO level, propulsion, whip frequency, mean moving angle and quality of semen, including vitality and survival rate (P<0. 01). Conclusion: Combination of Chinese herbs and hormone could lower the NO level in semen and improve the quality of sperm.Original article on CJITWM (Chin) 2004 ;23 (3): 223

毛竹脱氧辛糖酸-8-磷酸合酶的原核表达、纯化及酶的特性

脱氧辛糖酸-8-磷酸合酶(3-Deoxy-D-manno-octulosonate 8-phosphate synthase,KDO8PS)是一种参与细胞壁八碳糖(KDO)合成代谢的关键酶之一。为了解该酶催化特性和功能,本实验采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法首次分离得到毛竹Pe KDO8PS基因。序列分析表明该基因CDS区全长876 bp,编码291个氨基酸。通过IPTG诱导,含有该基因的原核表达载体在大肠杆菌中获得了大量可溶性活性蛋白表达;经Ni-NTA亲和层析和分子筛层析(SEC)方法进行酶蛋白的两步分离纯化,得到纯度大于90%以上的高纯度酶;SEC结果发现,纯化后目的蛋白KDO8PS在溶液中主要以二聚体形式存在。戊二醛交联实验证实该酶具有形成二聚体/四聚体的可能性,进一步通过超速离心(AUC)分析,发现水溶液中KDO8PS在高浓度时二聚体会聚合转化形成四聚体。推测形成二聚体/四聚体可能是保持酶稳定性的一种机制。通过测定毛竹KDO8PS酶学性质,发现该酶催化反应的p H值范围在4.0-9.0,最适p H值为8.0;热稳定性范围25-65℃,最适作用温度为55℃;各种二价金属阳离子在低浓度下均对酶活性存在不同程度的抑制作用,其中以Fe3+对酶活性的抑制作用最强,而低浓度EDTA可通过螯合作用消除金属离子的抑制作用。以上研究结果为植物KDO8PS蛋白结构与功能及其在新型抗生素领域中的工业化应用提供了重要理论基础。