茶多糖的化学修饰及体外抗凝血作用研究

采用DEAE-52纤维素柱层析的方法,分离纯化乌龙茶中的多糖成分;选用硫酸化、乙酰化和羧甲基化分别对纯化后的茶多糖进行化学修饰,研究了其修饰前后的体外抗凝血作用。结果表示:茶多糖具有抗凝血作用,能显著延长人体血浆的APTT值,而对TT和PT值无明显影响。茶多糖经柱层析后分离出四个多糖组分,其中组分Ⅱ为茶多糖总量的57.36%,抗凝血活性也相对较强。茶多糖组分Ⅱ经硫酸化、乙酰化和羧甲基化修饰后,抗凝血活性进一步增强,化学修饰试剂与多糖的比例以及修饰反应时间在一定的范围内,影响茶多糖分子结构的变化程度,相应改变抗凝血活性。

采用高效液相色谱技术分析生物体内维生素B_6

For the determination of vitamin B 6 derivatives, a high performance liquid chromatography(HPLC) system composed of a single reversed-phase octadecylsilane column and fluorescence detector with an isocratic elution was proposed. This HPLC system perfectly analyzed pyridoxine, pyridoxal, pyridoxamine, pyridoxine 5′-phosphate and pyridoxamine 5′-phosphate together with pyridoxic acid in biological samples. In this method, relatively low fluorescence intensity of pyridoxal 5′-phasphate was improved by converting it to pyridoxic 5′-phosphate with KCN. The analytical procedure is very simple and economical, it is a useful tool for studying vitamin B 6 in animal body.

大蒜多糖的体外抗凝血作用及结构分析

采用碱提法和DEAE-52纤维素柱层析法,从大蒜中分离纯化出3种多糖组分(GPⅠ、GPⅡ和GPⅢ);采用体外抗凝血活性试验分析了大蒜粗多糖及其分离组分GPⅠ的抗凝血作用;采用SephadexG-100凝胶层析法和冻融分析法鉴定GPⅠ的纯度,采用气相色谱分析了GPⅠ的单糖组成,首次采用凝胶渗透色谱与多角度光散射仪及示差检测器连用系统测定了GPⅠ的分子结构。结果表明:GPⅠ、GPⅡ和GPⅢ分别为大蒜多糖总量的75.2%、15.5%、9.3%;大蒜粗多糖及其分离组分GPⅠ能显著延长人体血浆的APTT值,通过影响内源性凝血系统发挥抗凝血作用;GPⅠ由鼠李糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖及1种未知单糖组成,构成比例为1.5∶1.1∶3.3∶1∶5.1∶3.5,分子质量为5.2×104～5.6×104u,分子旋转半径为31.5～32.9nm,分布宽度指数为1.039和1.084,分子呈球形。

高分子量透明质酸产生菌选育及发酵条件优化

以Streptococcus equi SH-0为出发菌，用5-溴尿嘧啶（5-BU）、紫外线和N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（NTG）为诱变剂进行复合诱变，选育到1株遗传稳定性好、产高分子量透明质酸（HA）的突变菌SH-109；在500mL摇瓶和5L发酵罐中，分别对其生产高分子量HA的发酵条件进行了优化。多因素正交试验表明发酵培养基的最佳配比为：50g/L蔗糖、100g/L混合氮源、10g／L葡萄糖、2．0g／LMgSO4·7H2O、2．0g／LNa2HPO4·12H2O、1．0g／LNaHCO3、0．1g／LUTP。在pH7．6、转速550r／min条件下有利于高分子量HA的合成，突变菌SH-109发酵生产HA相对分子量达4．36×10^6Da。

桑叶多糖的分离及红外光谱和气相色谱分析

多糖是桑叶中的重要功能性成分之一。采用水煮提取、乙醇分级沉淀和Sephadex G-100凝胶层析的方法,从桑叶中分离、纯化出3种多糖组分:MPSⅠ、MPSⅡ和MPSⅢ。经红外光谱分析,MPSⅠ不同于MPSⅡ和MPSⅢ,表现出长分子链、β-糖苷键构型和含酰胺基团等特征。气相色谱分析结果显示,L-鼠李糖、D-葡萄糖和D-半乳糖是3种桑叶多糖的共同成分,其中D-葡萄糖和D-半乳糖的构成比例较大,3种桑叶多糖的单糖构成也存在明显差异。

桑叶中抗凝血活性成分的初步分离与纯化

采用乙醇分级沉淀和Sephadex G100凝胶层析的方法,结合凝血指标检测,对桑叶中的抗凝血活性成分进行了分离纯化。结果表明:桑叶的抗凝血活性主要集中在桑叶的水提取液中,能够显著延长人体血浆的活化部分凝血活酶时间(APTT)值。桑叶水提取液经30%乙醇沉淀、凝胶层析和醋酸纤维素薄膜电泳表明其抗凝血活性成分是一种多糖组分。试验还表明,高浓度乙醇处理对桑叶多糖的抗凝血活性没有影响。

甘油和戊二醛对丝素膜性能的改良效果

为改善丝素膜的使用性能,在丝素溶液中添加甘油和戊二醛后制膜,探讨利用甘油的吸湿性能和戊二醛的交联作用对丝素膜性能的改良效果。结果表明:添加甘油的丝素膜持水性增强、耐水性能和相对伸长大幅度提高;戊二醛可以弥补添加甘油引起的丝素膜拉伸强度的下降。甘油和戊二醛的添加的质量分数分别为0.5%和0.2%时所制成的丝素膜质地湿润、光滑、柔软而富有弹性,其综合性能指标优于表面经80%甲醇处理的丝素膜。

家蚕体内维生素B_6的存在形态和转换代谢

采用不含桑叶粉末、以去维生素牛乳酪蛋白为蛋白源的准合成饲料饲育家蚕Bombyxmori幼虫 ,探讨了家蚕体内维生素B6 (VB6 )化合物的存在形态和转换代谢途经。随饲料中盐酸吡哆醇 (PN HCl)添加量的增加 ,幼虫体内吡哆醇 (PN)含量相应变化 ,其次是吡哆醛 (PL) ;而辅酶型磷酸吡哆醛 (PLP)和磷酸吡哆胺 (PMP)含量存在稳定性。饲料中的吡哆醇以单纯扩散的形式进入体液 ;体液中的吡哆醇被各种组织吸收后 ,在各自的吡哆醛激酶和PNP 磷酸吡哆胺氧化酶的作用下 ,转变成辅酶型磷酸吡哆醛。家蚕不同于哺乳动物 ,没有特定的辅酶型磷酸吡哆醛形成组织和辅酶型磷酸吡哆醛的转送机制。同时家蚕体内缺乏具储存VB6 功能的辅酶型磷酸吡哆醛结合蛋白 ,推测这是用缺乏VB6 的饲料饲育各龄起蚕 ,幼虫当龄死亡的主要原因。

丝素膜表面接枝肝素分子的反应条件与体外抗凝血作用

利用等离子体处理技术使丝素膜表面被激活,以戊二醛作为交联剂,接枝肝素分子进行丝素膜表面抗凝血性修饰,从而为新型抗凝血生物医用材料的设计及临床应用提供试验依据。单因素优化实验结果显示:经等离子体和戊二醛处理后的丝素膜与肝素溶液的较好反应条件为pH 1.5、40℃、4 h,该条件下丝素膜表面肝素含量为37.62μg/g。经体外凝血试验检测,接枝肝素分子后的丝素膜具有较强的抗凝血活性;经稳定性试验分析,肝素与丝素膜结合稳定牢固不易被洗脱,提示其结合方式为共价键结合。

采用高效液相色谱技术分析烟草体内的维生素B_6化合物

维生素B6(VB6)是一类化合物的总称。近年来研究发现VB6在植物体内发挥抗逆作用。烟草作为模式植物其体内VB6的存在形态还未见报道。本研究采用高效液相色谱结合荧光检测技术对烟草体内VB6的存在形态进行了分析。结果表明:土壤栽培烟草叶、茎和根中VB6的含量依次为2.9、1.7、3.0μg/g鲜重;组培烟草叶片的VB6含量为3.9μg/g鲜重,构成比为磷酸吡哆胺(PMP)7%、吡哆胺(PM)14%、磷酸吡哆醛(PLP)19%、吡哆醛(PL)29%、吡哆醇(PN)30%;组培烟草在连续3周的检测过程中,PLP和PL含量下降、PN含量上升,VB6总量保持相对稳定。研究结果有助于以烟草为材料,进一步开展植物体内VB6代谢机制和特殊生理机制的研究。

家蚕体内因缺乏维生素B_6而引起的若干代谢变动

采用不含桑叶粉末、以去维生素牛乳酪蛋白为蛋白源的准合成饲料饲育家蚕Bombyxmori 5龄幼虫 ,探讨了缺乏维生素B6 (VB6 )对蚕体氨基酸代谢、脂肪酸代谢以及转氨酶活力的影响。缺乏VB6 引起支链氨基酸分解代谢受阻 ,幼虫体液中大量积累亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸。同时因绢丝腺发育停滞 ,丝氨酸也在体液中积累。另一方面 ,缺乏VB6 幼虫体液中赖氨酸、脯氨酸、精氨酸、甲硫氨酸和谷氨酸含量减少 ,其中赖氨酸尤为突出。推测缺乏VB6 引起赖氨酸分解代谢亢进。结果还表明 ,缺乏VB6 幼虫体内脂肪酸代谢异常 。

家蚕磷酸吡哆醇氧化酶cDNA克隆、鉴定及基因结构分析

【目的】了解家蚕维生素B6关键代谢酶磷酸吡哆醇氧化酶(PNPO)的基因结构。【方法】利用生物信息学原理和PCR方法,克隆出编码家蚕(Bombyx mori)PNPO的cDNA(GenBank登录号:DQ452398);采用T7启动子/T7RNA聚合酶原核表达系统对cDNA进行体外表达,并通过酶活检测进行表达产物的功能鉴定;依据家蚕基因组数据库信息和得到的cDNA,对家蚕PNPO基因结构进行分析。【结果】克隆到的cDNA含有771bp的完整可读框,编码一条分子量为29.86kD、含257个氨基酸残基的蛋白质。序列比对显示此蛋白质与人类PNPO具有51.44%的同源性,包含PNPO家族共有的保守序列,但在人和大肠杆菌PNPO中具有重要作用的几个氨基酸残基在此蛋白质中被替换。在以磷酸吡哆醇(PNP)为底物时,表达产物Pro-PNPO的酶活力约为17nmol·min-1·mg-1。家蚕PNPO基因包含5个外显子和4个内含子,跨越3.5kbDNA序列,所有外显子/内含子交接点都遵从gt/ag剪接规则,基因的5’端启动子调控区发现有TATA-box和CAAT-box保守基序。【结论】获得家蚕PNPO基因,可利用该基因在分子水平上研究家蚕的VB6代谢特征,弄清PNPO家族的特征及其在生物进化过程中的演变规律。

植物维生素B_6从头合成与代谢转换研究进展

维生素B6是一组可相互转换的吡啶衍生物的总称,包括吡哆醇、吡哆胺、吡哆醛、磷酸吡哆醇、磷酸吡哆胺和磷酸吡哆醛。其中,磷酸吡哆醛是140多种细胞酶的辅酶。至今发现两种VB6从头合成途径,DXP(1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸)依赖途径和DXP非依赖途径,前者仅存在于大肠杆菌和少量其他细菌,后者存在于其他所有VB6自养生物。除了VB6的从头合成,所有细胞生物体内还存在一条相似的补救途径,补救途径实现VB6各型的代谢转换。该文对近年来国内外有关植物VB6从头合成和代谢转换研究进展进行综述。

家蚕造卵机制受激素调控作用的研究 Ⅱ.保幼激素类似物和蜕皮激素对蚕蛹的生殖效应

本文探讨昆虫保幼激素类似物(JHA)和蜕皮激素(MH)对家蚕蛹的生殖效应。结果表明:(1)两种激素在蛹期使用的生物活性与其在幼虫期的作用效果完全相反。JHA具有缩短蛹期经过的作用,最大效应值出现在蛹中期使用。高剂量的MH具有显著延长蛹期经过的作用。最大效应值出现在蛹前期和蛹后期处理。(2)蛹期注射适当剂量的MH,对生殖生物量具有一定的增值效应,处理时间以蛹前期和蛹后期为准。(3)激素类似物在蛹期使用,其生殖效应主要改变百粒卵重,MH具有正效应,JHA具有负效应。中、低剂量的MH和JHA不显著改变成熟卵粒数,而高剂量的MH和JHA均使成熟卵数大幅度下降。

家蚕造卵机制受激素调控作用的研究 Ⅰ.家蚕幼虫期使用保幼激素类似物、蜕皮激素对生殖的效应

本文以保幼激素类似物ZR-515和20-羟蜕皮酮添食四、五龄期的家蚕,探讨其生殖效应(造卵)。结果表明:(1)JHA和MH不仅能显著影响茧质性状,对生殖生物量也有显著效果。四龄第1日和五龄前4日施用JHA,对总造卵生物量具有明显的增值效应;五龄后期(第6—7日)使用MH,具有显著的减值效应。两种激素的这种生殖效应与雌蛹体重具有较好的一致性。(2)根据对生殖指标的分析,激素类在幼虫期使用,其生殖效应以改变成熟卵粒数为主,影响卵重为辅。(3)经对成熟卵蛋白和糖元含量测定发现;卵蛋白含量和卵糖元含量与激素的生殖效应相平行。

家蚕吡哆醛激酶cDNA的克隆、表达和基因结构分析

吡哆醛激酶(pyridoxal kinase,PLK,EC2.7.1.35)是维生素B6关键代谢酶,其cDNA的克隆在昆虫类还未见报道。利用生物信息学原理和使用PCR方法,克隆出编码家蚕Bombyx mori吡哆醛激酶的cDNA(GenBank登录号DQ452397),体外原核表达成功,并对表达粗提产物进行了酶活检测。克隆到的cDNA含有一894bp的完整可读框,编码一条分子量为33.1kD,含298个氨基酸残基的蛋白质。序列比对显示此蛋白质与人类吡哆醛激酶具有52.84%的同一性,包含吡哆醛激酶家族共有的特征保守序列,但比哺乳动物和植物克隆到的吡哆醛激酶均少10多个氨基酸残基,几个有关键功能且在哺乳动物和植物中均保守的氨基酸残基在此蛋白中被替换。依据家蚕基因组数据库信息和PLK的cDNA,家蚕PLK基因包含5个外显子和4个内含子,跨越10kb DNA序列,所有外显子/内含子交接点都遵从gt/ag剪接规则,基因的5′端启动子调控区发现有TATA-box和CAAT-box保守基序。

烟草磷酸吡哆醛水解酶的分离纯化与表征

采用硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换、Sephadex G-100凝胶过滤和SP Sephadex C-25阳离子交换柱层析等步骤,对烟草磷酸吡哆醛水解酶进行了分离纯化。结果表明:该酶被纯化了119.6倍,得率为28.49%,经凝胶过滤和SDS-PAGE测得该酶的全分子量为49.6kDa,亚基分子量约为25kDa;该酶最适温度为50℃,最适反应pH为5.5;Mg2+、Ca2+、Mn2+等对该酶有激活作用,金属离子螯合剂EDTA对酶有抑制作用,加入Mg2+后抑制作用得到解除;在最适反应条件下,测得反应底物磷酸吡哆醛(PLP)和磷酸吡哆胺(PMP)的Km值分别为0.23mmol/L和0.56mmol/L。

四氢叶酸和5-甲基四氢叶酸高效液相色谱分析方法的建立与应用

采用ODS分离柱(250mm×4 6mmi d )、恒组成流动相(8 5%CH3CN 33mmol·L-1磷酸缓冲液,pH3 0)并结合荧光检测的高效液相色谱(HPLC)技术,可以对生物体内重要的叶酸存在形态,四氢叶酸和5 甲基四氢叶酸进行分析定量;将这种检测方法应用于亚甲基四氢叶酸还原酶和甲硫氨酸合成酶的活性分析,不需要使用放射性同位素,并且具有检测灵敏度高、特异性强、重复性好、操作简单迅速的特点。使用抗坏血酸、巯基乙醇或二硫苏糖醇,在检测过程中叶酸化合物和酶保持稳定;反应体系中也没有任何试剂会干扰反应产物四氢叶酸和5 甲基四氢叶酸的HPLC检测。

家蚕卵和幼虫、蛹、蛾血液蛋白成分的电泳观察与比较

家蚕卵和幼虫、蛹、蛾血液蛋白成分的电泳观察与比较张剑韵，黄龙全，徐永镇（安徽省农业大学蚕桑系）家蚕卵黄蛋白质是胚胎发育的重要素材和能源物质。它的形成主要通过卵母细胞从雌蛹血液中摄取并积累。探讨家蚕一生主要蛋白成分的变化和生理功能具有很重要的意义。但这...

磷酸吡哆醛补救途径两个关键酶的研究进展

维生素B_6(VB_6)包括6个可相互转换的吡啶衍生物。其中,磷酸吡哆醛(PLP)作为140多种细胞酶的辅酶,在生物体内发挥重要作用。动物从食物中获得VB_6,通过由吡哆醛激酶和磷酸吡哆醇氧化酶构成的补救途径合成PLP。PLP依赖酶的正常功能乃至人体最佳健康状态,依赖于细胞中PLP的平衡供给。然而,就PLP的动态平衡和调节机制以及PLP合成后的转移机制而言,目前还知之甚少,是一个富有挑战性的研究领域。为此,综述PLP补救途径两个关键酶的研究进展。