自发性脑出血动物模型选择及临床前药物试验指南(2024年版)

自发性脑出血(spontaneous intracerebral hemorrhage,sICH)是最常见和致死性最高的卒中类型,其特征是脑实质的自发性出血,目前尚无有效的防治方法。现有的sICH动物模型可以概括为三大类:(1)诱导性脑出血模型,主要有自体血注入、胶原酶注射、微气球充盈、高血糖诱导的sICH血肿扩大模型;(2)自发性高血压脑出血模型,主要有易卒中性自发性高血压大鼠和易卒中性肾血管性高血压大鼠模型;(3)基因修饰模型,主要有高血压脑出血转基因模型、脑淀粉样血管病转基因模型、脑动静脉畸形病变相关基因修饰模型、脑海绵状血管畸形相关基因修饰模型及胶原蛋白相关基因修饰模型。这些模型不仅帮助我们了解sICH的发病机制、探索预防或治疗的方法,也可用于临床前药物试验,促进sICH新药研发工作。本指南系统总结了sICH的发病机制,详细介绍了不同种属建模动物的优劣性、不同sICH动物模型的建模原理和方法、建模技术细节、模拟的病理生理机制及其临床相关性以及sICH动物模型神经行为评价技术,并比较了各种sICH模型的优缺点及其适用的研究范围,最后重点概括了sICH相关的临床前药物试验设计要点。

脑溢安对脑出血大鼠脑内碱性成纤维生长因子mRNA和肿瘤坏死因子蛋白表达的影响

目的:探讨脑溢安颗粒（简称脑溢安）对脑出血大鼠脑内碱性成纤维生长因子（bFGF）mRNA和肿瘤坏死因子（TNF）蛋白表达的影响。方法:用Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型,进行行为学计分、Northern blot、Western blot及吸光度扫描测定相关指标。结果:模型组的行为学计分在术后24h开始降低,7d时明显降低（P<0.05）,脑溢安组3d即有明显的降低（P<0.05）;模型组、脑溢安组bFGF mRNA和TNF蛋白表达在3d时达到高峰,7d时逐渐减弱,而脑溢安组在各个时间点的表达均强于模型组。结论:脑溢安治疗脑出血能增强bFGF的表达,抑制TNF蛋白表达,从而使行为学得到改善,这可能是脑溢安促进神经功能修复的主要机制之一。

体外诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的 探讨在体外诱导骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经样细胞的可行性。方法 采用Percoll(1.077g/L)离心分离MSCs,然后进行培养,以流式细胞仪进行荧光三标检测,并用免疫细胞化学法鉴定经β-巯基乙醇(BME)、二甲亚砜(DMSO)、丁羟茴醚(BHA)诱导分化的细胞是否为神经样细胞。结果 分离后的MSCs在生长因子的作用下出现增殖性生长,经流式细胞仪检测显示CD90和CD106阳性、CD45阴性,经诱导后MSCs分化的细胞经免疫细胞化学证实巢蛋白(nestin)、神经元特异性核蛋白(NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、2-3-环核苷酸磷酸二脂酶(CNP)阳性。结论 MSCs经诱导可分化为神经样细胞。

脑出血大鼠脑内bFGF和TNF蛋白的表达

在脑出血引起的缺血损伤过程中,存在着多种细胞因子的表达,其中一些是脑保护因子,另一些是脑损伤因子,它们在脑出血的过程中既共存又对立,碱性成纤维生长因子（basic fibroblastgrowth factor bFGF）和肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor TNF）是这种因子的代表。因此本实验选用bFGF和TNF作为研究对象,观察在脑出血过程中两者的表达情况,以探讨脑出血后神经功能的修复机理。

脑出血模型

自体血注入法和胶原酶诱导法脑出血模型的血肿大小一致且重复性好,适合研究脑出血过程的病理生理变化,且与人类脑出血的特点相似,目前应用较多;微球囊充胀法脑出血模型适合研究脑出血后占位效应和血肿清除的病理生理过程、颅内压变化和脑血流改变等;自发性脑出血模型可产生与人类高血压动脉硬化相同的病理改变,但由于模型不确定、重复性差且无可比性,应用较少。

健脑益智汤和益肾通窍汤对老年性痴呆作用机制的实验研究

目的 研究健脑益智汤（ＹＮＹＺ）和益肾通窍汤（ＹＳＴＱ）对痴呆大鼠的行为学、脑内递质及海马形态学的影响。方法 跳台实验、迷路实验、双缩法、紫外线分光光度法。结果 喜得镇、健脑益智汤和益肾通窍汤对改善大鼠行为学、过氧化脂质（ＬＰＯ）、谷氨酸（ＧＬＵ）、胆碱酯酶（ＡＣＨＥ）、Ｂ型单胺氧化酶（ＭＡＯ－Ｂ）有明显效果，而且对海马形态学有保护作用。结论 健脑益智汤、益肾通窍汤可提高大鼠脑内ＬＰＯ、ＧＬＵ、ＡＣＨＥ的表达，降低ＭＡＯ－Ｂ的表达和保护海马形态，可能是其对老年性痴呆的作用机理之一。

大鼠脑出血后细胞色素c表达和神经细胞凋亡的关系及牛磺酸熊去氧胆酸的干预作用

目的 研究大鼠脑出血（ICH）后细胞色素c（cytc）表达和神经细胞凋亡的关系，探讨牛磺酸熊去氧胆酸（Tudca）的干预作用及其机制。方法 用VII型胶原酶注入到大鼠右侧苍白球诱导ICH模型。用凋亡原位末端标记技术（TUNEL）和免疫组化方法检测血肿周围神经细胞凋亡和cytc表达的动态变化。透射电镜观察术后3d血肿周围神经元超微结构的变化。结果：ICH后6hcytc表达开始增加，1d达高峰．此后逐渐减少，7d时回落至假手术组水平。ICH后6h血肿周边组织可见TUNEL阳性细胞．3d达高峰。然后逐渐减少，7d、10d时仍见较多凋亡细胞。ICH后7d内cytc表达和神经细胞凋亡呈正相关（r=0．6357，P〈0．01）。Tudca治疗组cytc和TUNEL阳性细胞数较模型组明显减少（P〈0．05～0．01），神经元超微结构改变亦比模型组减轻。结论 ICH后血肿周围神经细胞损伤有凋亡机制参与，cytc释放是神经细胞凋亡的一个关键事件，Tudca可以有效减轻脑出血后的细胞凋亡，其机制之一是抑制凋亡通路cytc的释放。

大鼠脑出血后神经细胞凋亡和蛋白激酶B表达及β-七叶皂甙钠的干预作用

目的 观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡和蛋白激酶B（AKt）的表达，探讨β-七叶皂甙钠的干预作用及机制。方法 将雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、脑出血组和β-七叶皂甙钠治疗组。后3组又各分为6h、12h、1d、3d、7d组；用Ⅶ型胶原酶注入到大鼠右侧苍白球诱导脑出血模型，采用原位末端标记技术（TUNEL）和免疫组化方法检测损伤侧皮质区细胞凋亡及AKt表达的动态变化以及β-七叶皂甙钠对此的影响。结果 脑出血组TUNEL阳性细胞于脑出血后6h出现，AKt于脑出血后12h表达增多，二者均在第3d达到高峰，1周仍有表达。治疗组1d、3d、7d时间点TUNEL阳性细胞较脑出血组明显减少（P〈0．05．0．01），AKt表达较脑出血组显著增加（P〈0．05—0．01）。结论 β-七叶皂甙钠可以减少脑出血后神经细胞的凋亡，其机制可能与上调AKt表达有关。

细胞移植对脑出血脑损伤的保护作用

目前用于脑出血治疗研究的主要细胞有:神经干细胞、遗传工程神经干细胞、骨髓间质干细胞、脐血细胞、胚胎干细胞、重组细胞、微囊化人工细胞等,本文就前5种细胞移植在出血性脑损伤中的保护作用进行综述。干细胞移植在脑出血性动物身上的实验所取得的良好效果,显示细胞移植重建损伤的脑组织、改善脑功能成为治疗脑出血疾病的必然途径临床实验也取得了一定效果,但要真正应用于临床目前还有许多问题要解决:要想准确的定向诱导细胞分化,需要更深入的研究局部微环境,细胞因子及基因对干细胞分化的作用;细胞移植促进脑出血功能的恢复,其确切的机制还需要进一步研究;诱导分化的神经干细胞是否能象正常神经细胞一样能分泌神经递质,是否具有复杂的电生理等。

骨髓间充质干细胞对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护机制

目的 :研究骨髓间充质干细胞 (MSC)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法 :192只SD大鼠随机分为假手术组、手术组、对照组和MSC治疗组。MSC移植前应用BrdU标记 ,再灌注 1d后经同侧颈内动脉注射MSC(1× 10 6) ,对照组则注射PBS。采用线栓法建立脑缺血再灌注模型。术后每天应用爬杆法评定大鼠神经功能缺损。缺血 2h再灌注 2、4、6和 8d取脑组织 ,用免疫组织化学方法检测脑组织中bFGF的表达 ,RT PCR技术观察bFGFmRNA的表达。结果 :MSC治疗组大鼠的神经功能缺损评分明显低于手术组和对照组 (P <0 0 5 )。MSC治疗组缺血侧缺血周边区脑组织中观察到BrdU与bFGF免疫组化双染阳性细胞 ,脑组织中bFGFmRNA的表达也高于其他 3组 (P <0 0 1)。结论 :经颈外动脉给予的MSC可促进脑缺血再灌注大鼠的运动功能恢复 ;bFGF表达升高 ,可能是MSC脑保护作用机制之一。

大量活性神经元细胞核的分离技术(英文)

背景:细胞分化、细胞融合乃至克隆均需要应用分离细胞核的方法以获得大量有活性的细胞核,但是目前很难在数量和质量上同时达到较高的水准。目的:探索简单易行的分离细胞核的方法,为神经元细胞核移植、细胞拆合以及细胞核成分的研究提供大量完好有活性的细胞核。设计、时间及地点:对比实验,于2006-09/2007-01在南京医科大学基础医学院卫生部抗体技术重点实验室完成。材料:CytochalasinB为Sigma公司提供,清洁级SD孕大鼠来源于南京医科大学动物实验中心。方法:取胎鼠大脑皮质,进行神经元的培养并鉴定。用Cytochalasin B结合梯度离心法及细胞核分离液法两种方法进行细胞核分离的对比观察。主要观察指标:用碘化丙啶标记后进行流式细胞仪检测凋亡率并用免疫荧光染色对细胞核进行形态学观察。结果:两种方法均成功地分离出大量有活性神经元细胞核,且梯度离心法可以得到较为完整的胞质体,与完整细胞细胞核荧光强度比较无显著性差异(P>0.05)。结论:CytochalasinB结合梯度离心法及细胞核分离液法均能够有效地进行神经元细胞核的分离,且细胞核在短期内有较高的活性。

骨髓间质干细胞的胞质体制备及其活性

背景:细胞质在细胞分化过程中起着决定作用,但目前的实验很难获得大量的、有活性的胞质体。目的:分析影响大鼠骨髓间质干细胞胞质体制备的因素,并观察胞质体活性,以期为细胞重组提供实验依据。设计、时间及地点:以细胞为观察对象的多因素设计实验,于2006-09/2007-01在南京医科大学基础医学院卫生部抗体技术重点实验室完成。材料:选用1月龄SD大鼠,用于分离骨髓间充质干细胞。方法:骨髓间质干细胞经分离培养、扩增后,用松胞素B、秋水仙碱结合离心术制备胞质体。主要观察指标:应用苏木精-伊红、Alexa-Flour?488anti-ratCD106及Bis-Benzimide染色进行形态学观察,计算胞质体纯度;应用Rhodamine123标记后用流式细胞仪检测胞质体中线粒体膜势能。结果:①胞质体纯度可达95%。80%的胞质体在一两个小时内恢复原来形态,但其生活力不会超过18h。胞质体活性随时间延长而下降。②骨髓间质干细胞的胞质体制备与松弛素B、秋水仙碱剂量、离心速度、离心时间,特别是离心温度有关。结论:骨髓间质干细胞的胞质体制备可受多因素影响。当胞质体具有活性,具有有核细胞的一些行为特征时,可以进行细胞重组。

碱性成纤维细胞生长因子真核表达载体转染骨髓间充质干细胞的表达

目的 :探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)真核表达载体转染骨髓间充质干细胞 (MSCs)后的表达情况。方法 :应用脂质体介导的基因转移技术将bFGF真核表达载体导入MSCs,用抗药性标志选择方法筛选出阳性克隆后 ,用免疫细胞化学检测bFGF表达分泌情况。结果与结论 :经转染bFGF真核表达载体的MSCs细胞呈阳性 ,说明经转染的MSCs表达并分泌bFGF蛋白。

线粒体释放的凋亡因子与缺血性神经元凋亡

凋亡是细胞接受各种凋亡信号,在基因调控下发生的主动死亡过程。线粒体在脑缺血神经元凋亡的发生过程中起着关键作用。文章就线粒体释放的凋亡相关因子及其在缺血神经元凋亡通路中的作用机制作了综述。

脑出血大鼠脑内bFGF mRNA和TNF蛋白的表达

目的 研究脑出血大鼠脑内碱性成纤维生长因子 (b FGF) m RNA和肿瘤坏死因子 (TNF)蛋白表达的规律 ,探讨脑出血后神经功能修复的内源性机制。方法 用 型胶原酶诱导大鼠脑出血模型 ,采用 Northern blot、Western blot及吸光度扫描分析 b FGF和 TNF表达。结果 脑出血大鼠脑内 b FGF m RNA和 TNF蛋白的表达在 3 d时达到高峰 ,7d时逐渐减弱。结论 随着脑出血大鼠脑内损伤因子 TNF蛋白表达的增强 ,保护因子b FGF m RNA的表达也相应增强 ,这可能是脑出血过程中神经功能修复的主要机制之一。

脑溢安对出血性中风大鼠脑内磷酸化蛋白激酶表达的影响

探讨脑溢安对出血性中风大鼠脑内磷酸化蛋白激酶 (P -C -Jun)表达的影响和治疗机理。根据Roserberg法复制大鼠脑出血模型 ,采用免疫组织化学方法观察脑出血后梨状皮质内P -C -Jun的表达变化 ,并用组织病理学方法分析脑皮质内神经元的损伤状况。结果 :脑溢安治疗组较模型组脑内P -C -Jun蛋白表达弱 ,神经元受损状况轻。结论 :脑溢安下调脑内P -C -Jun蛋白表达 ,从而干预了丝裂原活化的蛋白激酶 (MAPK)信号转导通路。

脊髓小脑共济失调3型发病机制研究进展

脊髓小脑共济失调3型（Spinocerebellar ataxia type 3,SCA3）又称为马查德约瑟夫病（Machado-Joseph Disease,MJD）,是我国遗传性共济失调（Hereditary Ataxia,HA）中最常见的亚型,约占所有遗传性共济失调的60%,其患病率为3～5/10万,仅我国就有4万余名患者。

饥饿状态引起大鼠海马细胞DNA损伤

目的研究饥饿状态对海马细胞DNA的损伤。方法分别运用单细胞电泳(彗星实验)和缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞核DNA单链及双链损伤,半胱天冬酶3(caspase3)活性片段免疫组化检测海马细胞caspase-3激活;结合神经元尼(氏)体染色和苏木素伊红(HE)染色了解海马神经元形态和数目变化。结果经受饥饿状态1周的动物可见海马细胞DNA单链损伤,海马各区caspase-3活性片段免疫反应阴性,但TUNEL法检测到一种具非典型凋亡特征的阳性显色;经受饥饿状态2个月的动物,DNA单链损伤持续存在,海马CA1区caspase-3活性片段免疫组化见广泛细胞浆阳性表达,海马其他区域仅有零星阳性细胞,但TUNEL检测无阳性细胞。神经元尼(氏)体染色示,饥饿状态1周和2个月海马神经元部分尼(氏)体溶解消失。HE染色示,经受饥饿状态1周和2个月的动物,海马CA1区锥体层细胞数减少(P<0.05)。结论饥饿状态可造成大白鼠海马细胞染色体DNA损伤及部分细胞死亡。

脾虚是痹证的发病之本

脾虚是痹证的发病之本张化彪（河南省济源市卫生学校，４５４６５０）主题词痹证／中医病机，脾虚痹证是人体正气不足，风寒湿热等外邪侵袭，以致肢仲关节，肌肉疼痛，重着，麻木，肿胀，屈伸不利，甚则关节变形，僵硬或累及脏腑为特征的一类病证。是常见病、多发病，其中...

小胶质细胞与脑出血

小胶质细胞是脑内的主要免疫效应细胞,正常时处于“休眠状态”,无吞噬能力。脑出血后,小 胶质细胞迅速活化、增殖,发挥巨噬细胞的吞噬效应,并通过产生神经毒性分子和神经营养因子发挥 双重效应。蛋白激酶C、核因子κB和丝裂素活化蛋白激酶的活化是脑出血后小胶质细胞产生神经毒 性分子的内在机制。在一定时间窗内适当抑制小胶质细胞的活化,能减轻其细胞毒作用,改善预后。