INO1基因在粟酒裂殖酵母中的表达及对蔗糖酶分泌和磷脂合成的影响

分别用含有INO1基因的两个质粒pADH -INO和pSPIN - 2 2对天然肌醇营养缺陷型的粟酒裂殖酵母 (Schizosaccharomycespombe)进行转化 ,得到的转化子分别命名为Sch .P94 4和Sch .P10 2 5 .通过对Sch .P94 4和Sch .P10 2 5的研究 ,发现两个质粒均能在粟酒裂殖酵母中自主复制并使其变成肌醇原养型 ,但肌醇分泌的速度和数量Sch .P94 4均高于Sch .P10 2 5 .用该两菌株研究肌醇合成与细胞生长及可分泌蔗糖酶比活的关系 ,结果显示 :细胞的生长与肌醇的合成紧密相关 ;而蔗糖酶的比活 ,当葡萄糖含量小于 1%时 ,菌株Sch .P94 4的蔗糖酶分泌是解葡萄糖阻遏的 ,而Sch .P10 2 5在实验范围内 ,蔗糖酶的比活都受到葡萄糖的阻遏作用 .对Sch .P94 4和Sch .P10 2 5膜磷脂的组成进行分析比较发现 ,膜磷脂中磷脂酰肌醇 (PI)的含量Sch .P94 4比Sch .P10 2 5高 ,而磷脂酰丝氨酸(PS)的含量Sch .P94 4比Sch .P10 2 5低 .这意味着肌醇通过磷脂酰肌醇参与了蔗糖酶分泌的解阻遏作用 .

扣囊复膜酵母菌高产突变株转化可溶性淀粉生产海藻糖的研究

以前的研究曾发现扣囊复膜酵母菌 (Saccharomycopsisfibuligerasdu)能利用可溶性淀粉发酵累积质量浓度为 180 g/L的海藻糖。然而 ,该菌株含有高活性的酸性和中性海藻糖酶 ,使发酵过程中海藻糖的累积下降。为了提高海藻糖的产量 ,去除海藻糖酶的活性是必要的。野生型菌株通过EMS的诱变作用 ,筛选出了 1株不能同化海藻糖 ,但生长速率不变的突变株。该突变株与野生型菌株相比能够利用淀粉发酵累积更高含量的海藻糖 ,与野生型菌株相比 ,突变株细胞的酸性海藻糖酶的活性低 3倍 ,中性海藻糖酶的活性低 3 7倍。

灵芝(G22)多糖发酵的动力学研究

通过对灵芝 (G2 2 )多糖发酵的动力学研究 ,建立了较为合理的连续培养体系 .描述了稳态时葡萄糖、多糖、蛋白胨、菌丝量等 ,随稀释速率的变化规律 .对得到的实验数据进行计算 ,得到不同稀释速率下的菌丝产率、菌丝生长得率和灵芝多糖比产生速率等参数值 .对得到的数据进行分析计算 ,求得最大比生长速率 μmax=0 .0 6 4 h ,饱和常数KS=18.90g l,基质最大得率常数YGMAX =0 .732g g ,维持常数m =0 .0 0 93g gh .并建立了灵芝多糖发酵的一系列模型方程 .发现 :当D =0 .0 2 2 h时 ,G2 2生长速率最快 ,多糖产量最高 ,达 2 .85g l,此值比分批培养提高 0 .35g l.

多价不饱和脂肪酸发醇条件的初步研究

研究被孢霉SD－95的摇瓶发酵特性，选出最优培养基配方。摇瓶发酵结果为，菌体得率28．5％，油脂得率12．4％，油脂含量43．6％，碘值122．8。油脂中多价不饱和脂肪酸组成为，亚油酸17．2％，r-亚麻酸7．7％，花生四烯酸0．5％，多价不饱和脂肪酸总量为25．3％；菌丝体经过冬化处理后，其多价不饱和脂肪酸组成为，亚油酸18．6％，r-亚麻酸8．1％，花生四烯酸0．7％，二十碳五烯酸50．4mg／1009油脂，多价不饱和脂肪酸总量27．5％。

花生四烯酸高产突变株的选育及其发酵调控

以拉曼被孢霉（Mortierellaramanniana）SM541为原始菌株，经过紫外线复合氯化锂诱变处理，得到突变株SM541－9，其生物量由126g／L提高到28．8g／L，油脂含量由5．8g／L提高到15.7g／L。花生四烯酸含量由321mg／L增加到623mg／L。传代实验表明，SM541－9具有良好的遗传稳定性，以葡萄糖为碳源，硝酸钾为氮源的最适培养条件下，10L罐发酵，生物量和花生四烯酸含量较原始菌株分别提高了45．2％和109.5％。在液体发酵过程中，菌丝老化、增大溶氧量、间歇流加葡萄糖都有利于花生四烯酸的合成。

新型甜味剂塔格糖的应用及生产

D-塔格糖是一种新型低热量甜味剂,用于食品和药品领域,有抗高血糖和益生保健等多种功能。本文综述了其基本性质和功能,抗高血糖的机制,食品和药品应用情况及生产技术开发的进展,重点阐述了塔格糖生产的工具酶——L-阿拉伯糖异构酶的基因克隆与筛选、酶工程化改造及固定化等方面的研究进展。

铜与锌对拉曼被孢霉的生长、油脂及花生四烯酸合成的影响

报道了不同浓度的 Zn2 +和 Cu2 +对拉曼被孢霉 (Mortierella ramanniana)的细胞形态、生长、油脂和花生四烯酸的生成的影响。Zn(CH3COO) 2 在 5× 10 -6和 1× 10 -5时对拉曼被孢霉的细胞生长有轻微刺激作用 ;当浓度高于 1.5× 10 -5时有抑制作用 ,随浓度的提高而抑制作用增强 ,细胞缩小 ;Cu SO4 在 0 .5× 10 -6和 1×10 -6时对该菌细胞生长有轻微作用 ,高于 1.5× 10 -6时抑制作用明显增强 ,细胞缩小。 Zn2 +在 1×10 -5和 1.5× 10 -5时 ,对该菌油脂及花生四烯酸的生成有刺激作用 ,高于 2 .5× 10 -5时则有抑制作用 ;Cu2 +在 1× 10 -6和 1.5× 10 -6时 ,对该菌油脂及花生四烯酸的生成有刺激作用 ,高于 2 .5× 10

酵母菌磷脂酰肌醇(PI)的生物合成及其重要的生理学功能

本文对近年来在酵母菌磷脂酰肌醇 (PI)生物合成 ,PI与酵母菌信号传导的相互关系 。

荧光辅助糖电泳的优化

荧光辅助糖电泳(FACE)是一种快捷、花费少的分离糖类方法。寡糖首先经8-氨基萘-1,3,6-三磺酸(ANTS)胺化还原衍生,该反应过程在所给实验条件下需要16 h。然后,经ANTS衍生的寡糖在ρ(丙烯酰胺)=0.32 g/mL、ρ(双丙烯酰胺)=0.024 g/mL组成的碱性分离胶上电泳从而得以分离。该方法无需专门的仪器和操作熟练的技术人员。

多价不饱和脂肪酸高产菌株的选育及发酵产物的分析

从十四株菌中筛选出产油丝状真菌Ｕ—７，并以此作为初发菌株，经过紫外线、氯化锂复合诱变处理，得到变异株Ｕ—７１，传代实验表明，Ｕ—７１具有良好的遗传稳定性．通过气相色谱分析，油脂中多价不饱和脂肪酸组成为：亚油酸１７．２％、γ—亚麻酸７．７％、花生四烯酸０．５％，多价不饱和脂肪酸总量为２５．３％；菌丝体经过冬化处理后，其多价不饱和脂肪酸组成为：亚油酸１８．６％、γ—亚麻酸８１％、花生四烯酸０７％、二十碳五烯酸５０４ｍｇ／１００ｇ油脂，多价不饱和脂肪酸总量为２７５％．

氯霉素的糖基化修饰及其抗菌活性研究

制备5种氯霉素糖基化衍生物,并对这些衍生物的抑菌活性和安全性进行初步测试。实验结果表明:1)氯霉素被糖基化后水溶性得到了明显提高;2)氯霉素糖基化衍生物时未产生抗菌活性,但经相关糖苷酶水解后,可重新表现出抗菌活性;3)小鼠急毒试验证明,氯霉素糖基化衍生物的毒副作用与原药相比显著降低。该项研究对于设计和合成类氯霉素前药开辟了新领域。

Man_8GlcNAc_2糖基化的酿酒酵母菌株的构建

酿酒酵母糖蛋白的N-糖基化经过高尔基体的修饰后形成聚合度约150-200的甘露寡糖,高尔基体N-糖基化的糖基转移酶Mnn1p和Och1p在甘露寡糖的形成过程中起关键作用。通过同源重组置换敲除了酵母中的MNN1和OCH1基因阻断高尔基体N-糖基化修饰,分离纯化了mnn1 och1突变株中的N-糖蛋白,糖酰胺酶PNGaseF酶解释放的N-糖链经过2-氨基吡啶衍生后,利用HPLC和MALDITOF/MS结合的方法分析了突变株糖蛋白上的N-糖链。结果显示mnn1 och1突变株中的糖蛋白的N-糖链为结构单一的糖链,分子量为1794.66,推测为Man8GlcNAc2。