微小RNA-508-3p靶向调控配对盒基因2影响肺癌细胞生物学特性的分子机制研究

目的探讨微小RNA-508-3p(miR-508-3p)在肺癌组织中的表达及其对肺癌细胞增殖活力、侵袭能力、凋亡率的影响与机制。方法采用定量聚合酶链反应(qPCR)法和蛋白质印迹法(Western blotting)检测肺癌组织中miR-508-3p和配对盒基因2(PAX2)表达,分析两者的相关性。分别用miR-508-3p模拟物(miR-508-3p组)、模拟物阴性对照miR-NC(miR-NC组)、PAX2 siRNA si-PAX2(si-PAX2组)、siRNA阴性对照(si-NC组)、miR-508-3p抑制剂anti-miR-508-3p(anti-miR-508-3p组)、抑制剂阴性对照anti-miR-NC(anti-miR-NC组)、共转染miR-508-3p和PAX2过表达质粒pcDNA-PAX2(miR-508-3p+pcDNA-PAX2组)、共转染miR-508-3p和空白质粒pcDNA-NC(miR-508-3p+pcDNA-NC组)转染肺癌A549细胞,并设置空白组。采用噻唑蓝(MTT)法检测24~72 h的细胞增殖活力;采用Transwell小室及流式细胞术分别检测细胞侵袭能力及凋亡率,采用Western blotting检测A549细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。根据双荧光素酶活性检测结果评估miR-508-3p对PAX2的靶向调控。结果肺癌组织miR-508-3p表达低于癌旁组织,PAX2 mRNA和PAX2蛋白表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);PAX2蛋白和miR-508-3p的表达呈显著负相关(P<0.05)。与空白组比较,miR-508-3p组Bax表达和细胞凋亡率均升高,MMP-2、Bcl-2蛋白表达和增殖活力、侵袭能力均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与si-NC组比较,si-PAX2组PAX2、MMP-2、Bcl-2表达降低,Bax表达、凋亡率升高,增殖活力和侵袭能力降低,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-508-3p靶向PAX2基因,调控PAX2蛋白的表达。PAX2可以逆转miR-508-3p对A549细胞增殖活力、侵袭能力以及细胞凋亡的影响。结论 miR-508-3p在肺癌组织低表达,其过表达可降低A549细胞增殖活力及侵袭能力,诱导细胞凋亡,机制与靶向调控PAX2基因有关。

miR-144在早期非小细胞肺癌中表达及临床预后研究

目的分析miR-144的表达与早期非小细胞肺癌(NSCLC)患者术后预后的关系。方法收集早期NSCLC患者的术后病理标本,采用荧光定量法分析miR-144的表达水平,采用卡方检验分析miR-144与临床病理特征的关系,采用Cox回归分析miR-144对NSCLC不良预后的影响。结果共收集141例病人的随访资料,66例低表达,75例高表达。miR-144高表达组淋巴结转移比例为65.6%,低表达组为34.4%,两组之间差异有统计学意义(P=0.007),提示miR-144与NSCLC患者淋巴结转移相关,而与性别、年龄、吸烟、分化程度、临床分期和肿瘤大小不相关(P>0.05);Cox回归显示miR-144高表达是NSCLC不良预后的独立预测因子(HR=3.82,95%CI:2.12~6.89),并显示吸烟和淋巴结转移也是NSCLC不良预后独立预测因子。结论miR-144高表达是早期NSCLC患者不良预后的独立预测因子,可能作为将来治疗的新的靶点。

LncRNA UNC5B-AS1靶向miR-339-5p调控人肺腺癌细胞系A549增殖和凋亡

目的旨在研究lncRNA UNC5B-AS1靶向miR-339-5p对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法体外培养人肺腺癌细胞系A549;将si-NC、si-UNC5B-AS1、miR-NC、miR-339-5p mimics、si-UNC5B-AS1与anti-miR-NC、si-UNC5B-AS1与anti-miR-339-5p分别转染至A549细胞。RT-qPCR检测肺癌组织和癌旁组织中UNC5B-AS1和miR-339-5p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测UNC5B-AS1与miR-339-5p的靶向调控关系;Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21蛋白、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中UNC5B-AS1表达水平显著升高(P<0.05),miR-339-5p表达水平显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-UNC5B-AS1组细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-339-5p组细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与(si-UNC5B-AS1+anti-miR-NC)组比较,(si-UNC5B-AS1+anti-miR-339-5p)组细胞活力显著升高(P<0.05);细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论通过干扰UNC5B-AS1上调人肺腺癌细胞系A549的miR-339-5p表达,促进其凋亡、抑制其增殖。