张吉红油画作品

张吉红,1963年出生，湖南省美术家协会会员，作品多次入选省级以上展览，并有作品获奖。现为株洲画院副高级创作员、创作部主任。

4种入侵性雀麦属种子的形态鉴定

【目的】不实雀麦、硬雀麦、双雄雀麦和旱雀麦因具危害性已被公认为入侵性杂草,其种子(小花)常随进境农产品进入中国,由于外观形态较为接近易引起混肴,需对其进行进一步研究并建立鉴定方法。【方法】使用光学显微镜和扫描电镜对4种雀麦小花的小穗轴、基盘、内稃、外稃等外部结构进行形态学观察和比对。【结果】不实雀麦外稃脉纹呈脊状排列;旱雀麦内稃脊具长毛被,小穗轴疤痕面明显塌陷;硬雀麦小穗轴和基盘疤痕明显拉长等宏观特征可用于种间区别。在微形态方面可通过内外稃冠细胞分布密度进行区别。【结论】结合宏观和微形态特征的鉴定方法可用于4种雀麦属杂草种子的快速识别。

赤羽病病毒RT-LAMP检测方法的建立

为建立一种赤羽病病毒(AKAV)的快速检测方法,本研究根据环介导等温扩增技术(LAMP)原理,设计了针对AKAV S基因的特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了AKAV的RT-LAMP方法。特异性和灵敏度试验结果显示,所建立的RT-LAMP检测方法具有良好的特异性,与蓝舌病、牛病毒性腹泻及传染性牛鼻气管炎等病毒无交叉反应,敏感度可达11.5拷贝/μL,采用SYBR Green I染色,肉眼即可判定检测结果。该方法能够简便、快速、灵敏、特异地检测AKAV。

逆转录环介导等温扩增技术检测草莓潜隐环斑病毒的研究

采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立了草莓潜隐环斑病毒(Strawberry latent ringspot virus,SLRSV)检测方法。根据SLRSV外壳蛋白编码基因上的8个位点,共设计了6条引物,通过逆转录环介导等温扩增得到特征性的瀑布状条带。特异性试验表明,引物对SLRSV的检测具有良好的特异性;灵敏度试验显示RT-LAMP的灵敏度比普通RT-PCR高出100倍。该方法无需特殊的试剂和设备,只需在水浴锅中65℃等温扩增,整个检测周期约1.5h,结果采用SYBR green I染色显示,易于观察和判定。

口服嗜水气单胞菌生物被膜疫苗的动物免疫试验

将热灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)生物被膜(biofilm,BF)菌苗和浮游(freecell,FC)菌苗口服免疫小鼠和剑尾鱼,通过测定抗体效价、相对保护率、小鼠的淋巴细胞转化和肠道sIgA浓度,评价免疫效果。免疫20d后,BF菌苗组50尾剑尾鱼的相对保护率为68%;FC菌苗组为42%。BF菌苗组12只小鼠的相对保护率为70%;FC菌苗组为50%;对照组为17%。BF菌苗组小鼠外周血淋巴细胞转化率是7.28、FC菌苗组为3.87、对照组为2.36。BF菌苗组小鼠肠道sIgA浓度是1.22μg/mL;FC菌苗组为0.73μg/mL;对照组为0.465μg/mL。免疫30d后,小鼠的血清凝集抗体达到最高,BF组抗体达128:1,FC组为32:1,对照组为2:1。各组间差异显著(P<0.01)。结果表明,BF菌苗较FC菌苗能更有效地刺激机体的免疫系统,尤其是肠道淋巴组织的免疫应答,对剑尾鱼和小鼠具有较好的保护力。

短节段椎弓根钉内固定治疗非相邻型多节段脊柱骨折的临床研究

目的探讨短节段椎弓根钉内固定治疗非相邻型多节段脊柱骨折的效果。方法非相邻型多节段脊柱骨折患者108例根据随机数字表法分为治疗组与对照组各54例,对照组给予后路长节段椎弓根钉内固定治疗;治疗组给予短节段椎弓根钉内固定治疗。结果治疗后,治疗组在出血量和手术时间,明显低于对照组(P<0.05);治疗组并发症发生率明显低于对照组(P<0.05)。两组术后的伤椎前缘高度比值明显增加,而Cobb角明显减少,与术前对比均有明显差异(P<0.05),但治疗组的伤椎前缘高度与Cobb角单优于照组,差异在统计学上均有意义(P<0.05)。两组术后神经功能均较术前有一定程度的恢复(P<0.05),临床治疗效果上,治疗组明显优于对照组(P<0.05)。两组术前JOA评分无明显差异,术后JOA评分治疗组明显高于对照组(P<0.05)。结论短节段椎弓根钉内固定治疗非相邻型多节段脊柱骨折临床效果明显且具有更加微创安全的特点,还可促进神经功能与腰椎功能的恢复。

嗜水气单胞菌生物被膜对其耐药性的影响

建立了嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila,Ah)的生物被膜 (Bacterialbiofilm ,BF)体外形成模型 ,并对 1 1种抗菌药物对BF细菌和浮游 (Free cell,FC)细菌的清除作用进行了研究。将AhJ 1株在放有硅胶膜的TSB中培养 7d,用银染法鉴定 ,发现可形成良好的BF。FC细菌对青霉素具有耐药性 ,最低杀菌浓度 (MBC)为 2 5 6μg mL ;对蒽诺沙星和氟哌酸最敏感 ,MBC分别为 0 0 3μg mL和 0 2 5 μg mL。氟苯尼考对BF细菌的清除能力最强 ,作用于BF细菌和FC细菌的MBC之比为 2∶1 ;卡那霉素、青霉素、新霉素的MBC比值在 32∶1以上。扫描电镜观察蒽诺沙星作用于FC及BF细菌前后的形态变化 ,并测定其杀菌曲线。发现 4×MBC时可完全清除FC细菌 ,但不能完全清除BF细菌 ;在 32×MBC时 ,4h内可完全清除FC细菌 ,而 2 4h内完全清除BF细菌。结果表明形成BF的Ah对抗菌药物可形成强耐受性 ,其潜在影响应引起足够重视。

膝关节滑膜炎滑膜清理术前后MMP-7与 MMP-9测定和关节功能的影响分析

目的：探讨膝关节滑膜炎滑膜清理术前后基质金属蛋白酶（MMP）-7与基质金属蛋白酶（MMP）-9测定和关节功能的影响。方法膝关节滑膜炎患者72例根据随机抽签方法分为治疗组与对照组各36例，对照组采用传统滑膜刨削手术治疗，治疗组采用关节镜下滑膜清理术。结果治疗后治疗组的有效率是97.2％，对照组的有效率是80.6％，治疗组比对照组的疗效更为显著，差异具有统计学意义（P ＜0.05）。两组术后的 Lysholm 功能评分明显增加，而疼痛评分明显减少，与术前对比差异明显，具有统计学意义（P ＜0.05）；同时术后治疗组的 Lysholm 功能评分与疼痛评分与对照组对比差异也有统计学意义（P ＜0.05）。术后两组滑膜组织的 MMP-7与 MMP-9阳性表达率都明显降低（P ＜0.05），与此同时，术后治疗比对照组在 MMP-7与 MMP-9阳性表达率方面要明显低，差异具有统计学意义（P ＜0.05）。结论关节镜下滑膜清理术治疗膝关节滑膜炎能缓解疼痛，改善膝关节功能，降低 MMP-7与 MMP-9的表达，从而提高治疗综合疗效。

斑点免疫金渗滤法检测赤羽病抗体的研究

以亲和层析原理为基础,将提纯的AKAV抗原包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,建立了斑点免疫金渗滤法诊断赤羽病抗体的方法。其中最佳点样抗原质量浓度是0.099mg/mL,封闭液选择含1%BSA,0.5%Tween-20的0.01mol/LpH7.2的PBS缓冲液,SPA胶体金最佳稀释度为1∶4。特异性试验表明,该方法特异性好,与牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎、牛白血病、口蹄疫、蓝舌病等阳性血清不发生交叉反应。将DIGFA与ELISA进行对比,差异不显著。研究结果表明,该方法操作简单,结果易于判断,适用于赤羽病的临床诊断和流行病学调查。

嗜水气单胞菌生物被膜的特性与相关基因的研究

建立嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila,Ah)的生物被膜(BF)体外形成模型,用银染法及扫描电镜观察检测Ah致病株J1、N1及非致病株W1、4332株产生BF的情况,同时研究温度和消毒剂对AhJ1株的游离(FC)细菌(以下简称FC细菌)和具有BF的细菌(以下简称BF细菌)的影响。实验表明:致病株AhJ1、N1株均可形成BF,而非致病株AhW1、4332株均不形成BF。AhJ1株的BF细菌经85℃30min、-20℃80d、0.01%新洁尔灭处理后均有存活,而FC细菌无存活细菌。根据已发表的AhA1株的转录调节蛋白基因(AhyR)核苷酸序列,设计并合成了一对引物,对AhJ1、N1、W1、4332株的基因组进行PCR扩增和测序分析。发现致病性AhJ1、N1株可扩增出912bp的核苷酸片段,该片段与已发表的AhAhyR基因的同源性达99%,而非致病性AhW1、4332株无该基因片段。

茶叶中掺杂小麦DNA的提取及检测方法的比较

为探索茶叶中掺杂小麦的快速检测方法,对3种不同的核酸提取方法(标准CTAB提取法、改良CTAB提取法和试剂盒提取法)进行分析比较,根据小麦内源GAG56D基因比较了茶叶中掺杂小麦成分的普通PCR和实时荧光PCR检测方法。结果表明:最适合掺杂小麦DNA的方法为标准的CTAB提取法。扩增结果显示,针对理论DNA浓度的检测灵敏度,实时荧光PCR的灵敏度能达到0.1%,普通PCR能达到1%,实时荧光PCR是普通PCR的10倍。

佐剂对嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫效果的作用

制备嗜水气单胞菌J1株福尔马林灭活疫苗,用浸浴法免疫银鲫。设疫苗加IMS1312佐剂免疫组、不加佐剂疫苗免疫组及未免疫对照组,每组20尾。18～20℃水温饲养35d,检测银鲫血清嗜水气单胞菌凝集抗体。佐剂组抗体效价达1∶64,相对保护率为67%。不加佐剂免疫组抗体效价为1∶32,相对保护率达56%。对照组抗体效价为1∶4,相对保护率为10%。试验结果表明浸浴免疫对银鲫具有较好的保护力,佐剂IMS1312可增强鱼体的免疫应答。

关节镜下同种异体骨髌腱重建前交叉韧带的初步应用

应用同种异体骨-髌腱-骨在关节镜下重建前交叉韧带损伤的手术要点及临床疗效。为单侧伤,采用同种异体骨-髌腱-骨移植材料,等长重建、挤压界面螺钉固定,重建断裂的前交叉韧带。术后评估方法采用客观评价和主观评价。获得12-30个月的随访,平均15个月。所有病例术前打软腿、关节交锁、弹响症状消失,关节稳定性改善。随访X线片均示骨道愈合。

进口奶牛感染铜绿假单胞菌的微生物学诊断

从病死奶牛脏器中分离出1株革兰氏阴性短杆菌,通过染色镜检、培养特性分析及生化鉴定,证明为铜绿假单胞菌。动物试验证明,分离株对小鼠有较强的致病性,并从死亡鼠体内分离到相应细菌。药敏试验结果显示,铜绿假单胞菌对多种抗菌药物有耐药性。

痕量及微量转基因大米成分半巢式PCR检测方法的建立

采用半巢式PCR技术建立了食品中痕量及微量转基因大米成分的检测方法。根据大米内源SPS基因以及转基因大米Bt63含有的外源Cry1A(b)/Cry1A(c)融合基因和Btc基因,分别设计了6对普通与半巢式PCR引物。扩增结果显示,针对理论DNA浓度的检测灵敏度,普通PCR扩增灵敏度为1ng/μl左右,半巢式PCR扩增灵敏度达到10-3～10-4ng/μl,半巢式PCR比普通PCR方法提高了103～104倍;在质量百分比的检测灵敏度方面,普通PCR方法扩增灵敏度在0.1%～1%之间,半巢式PCR方法的检测灵敏度能够达到0.001%～0.01%,半巢式PCR比普通PCR方法要提高10倍以上。在实际样品的检测中,速冻汤圆、婴儿米粉及芝士小圆饼等食品经普通PCR扩增,其内源SPS基因条带模糊或未扩增到,进一步采用半巢式PCR扩增后,能够得到清晰明亮的特异性条带。所有样品均未扩增到外源Cry1A(b)/Cry1A(c)和Btc基因。

牛副结核分枝杆菌LAMP快速检测方法的建立

为建立牛副结核分枝杆菌(MAP)的快速检测方法,本研究采用环介导等温扩增(LAMP)技术,以MAP的IS900基因序列为靶基因设计特异性引物,建立了MAP特异性的LAMP快速检测方法。经反应条件优化,检测结果显示,建立的LAMP检测方法具有良好的特异性,最低见测量为0.53 pg;与其他病原菌无任何交叉反应。临床样品检测与行业标准的符合率为100%。该LAMP检测方法可以用于MAP的常规检疫。

检测小麦线条花叶病毒的TaqMan MGB探针技术

为给小麦线条花叶病毒(Wheat streak mosaic virus,WSMV)的灵敏、稳定、快速检测提供依据,根据该病毒不同分离株外壳蛋白(Coat protein,CP)基因的保守序列,设计了特异性引物与Taq Man MGB荧光探针,建立了WSMV的实时荧光RT-PCR检测方法。结果表明,本研究设计的Taq Man MGB荧光探针对WSMV的检测具有很好的特异性,解决了因病毒不同分离物之间基因组变异较大、难以找到长片段保守序列来设计探针的困难。该方法无需任何PCR后处理,基因污染风险小。它与双抗体夹心酶联免疫检测方法相比,灵敏度提高1 000倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合于WSMV的快速检测。

气井井下的腐蚀监测技术

在油气田的开发中,井流物往往含有水和CO2、H2S等腐蚀介质,会导致井下油管发生严重腐蚀而失效。在气井正常生产期间,对设备的腐蚀或破坏进行监测,可以使生产设备更加安全有效地运行。本文针对气井井下腐蚀常用监测技术进行综述,介绍了相应监测技术的原理、优缺点、现场应用现状及适用场合,提出了对监测方式的选择以及对腐蚀监测数据应用的建议。

牛传染性鼻气管炎和赤羽病基因芯片检测方法的建立和应用

为建立牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和赤羽病病毒(AKAV)的双重快速检测方法,本研究根据IBRV gB基因和AKAV S基因序列设计合成了2对特异引物和探针,建立了同时检测这两种病毒的基因芯片检测方法,即以合成探针的5'端添加poly T10尾并氨基化固定于经处理的玻璃基片表面作为捕捉序列,采用荧光素Cy3标记正向引物的5'端,对样品的PCR扩增产物进行检测,并通过试验确定其适宜杂交温度为38℃。该方法检测IBRV和AKAV重组质粒的灵敏度分别为3.6×103拷贝/25μL和9.26×104拷贝/25μL,同时通过对牛的腺病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒及牛白血病病毒等的检测均无交叉反应,表明其特异性强。该检测方法的建立对于加强进出口牛的IBRV和AKAV检验检疫具有十分重要的意义。

关节镜手术联合口服盐酸氨基葡萄糖治疗KOA的近期疗效分析

目的探讨关节镜手术联合口服盐酸氨基葡萄糖治疗膝骨性关节炎(KOA)的近期疗效。方法本研究根据双方协定,患者自愿的原则,收集我院2012年1月至2014年2月收治的KOA患者69例,根据患者意愿选择不同治疗方案,其中观察组33例实施关节镜手术联合口服盐酸氨基葡萄糖的治疗方案,对照组36例实施单纯关节镜手术治疗方案,采集两组患者在门诊、术后8周、术后13周的X线检查及膝骨关节炎量表(WOMAC)结果,以观察两组不同时期的疗效。结果两组患者在门诊时关节炎不同X线级别比较差异均无统计学意义(P>0.05);观察组治疗8周与治疗13周时的WOMAC积分比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01);对照组治疗8周与治疗13周时的WOMAC积分比较,差异也具有显著统计学意义(P<0.01);两组患者在门诊时的WOMAC量表积分比较,差异无统计学意义(P>0.05);而术后8周、术后13周时两组间WOMAC量表积分比较差异均具有显著统计学意义(P<0.01);两组患者术后8周的疗效高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),但术后13周两组疗效比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论关节镜手术联合口服盐酸氨基葡萄糖治疗膝骨性关节炎的近期疗效明显高于单纯实施关节镜术的疗效。